HPV检测在宫颈癌预警和筛查中的研究

人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌发生密切相关，该病毒感染的检测对宫颈癌的筛查和预警有重要意义。综述近年宫颈癌筛查中HPVDNA的检测方法和HPV感染的病毒学、血清学追踪调查、宫颈癌前、癌变相关分子标志的研究进展，以及HPV检测在宫颈癌筛查中的地位、临床应用前景。     

荧光偏振检测HBV DNA C区BCP双突变

目的：建立简便、灵敏的HBV DNA序列中BCP双突变点的检测方法．方法：采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测．首先对HBV C区基因进行PCR扩增，然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交，使探针的3’端可以在DNA聚合酶的催化下，依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP，然后检测该3’端带有荧光素的探针，根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸．结果：该方法可以检测出HBV基因序列中BCP双突变核苷酸类型以及检测1个拷贝的模板，并且可以从BCP野性株DNA序列中检出5％BCP双突变DNA序列．结论：该技术可以检测血清中HBV DNA C区BCP双突变．     

胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白 A(Cag A)抗体的胶体金免疫层析法(GICA) .方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体颗粒 ,标记葡萄球菌 A蛋白 (SPA) ,将重组的 Cag A抗原划线固定于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫层析检测试条 .血清中 Ig G与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动 ,与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条 .结果　用 GICA与 EL ISA试剂盒对比检测了 32 6份血清标本中抗 Cag A抗体 ,本方法的特异性为95 .8% ,敏感性为 97.3% ,两法符合率为 96 .6 % .结论　 GICA检测…     

肝病患者血清转化生长因子β1和HBX蛋白的检测

0　引言　转化生长因子 β1(TGFβ1)可抑制肝细胞增生 ,抑制肝细胞生长因子 (HGF)对肝细胞有丝分裂的促进作用 .肝炎患者肝组织中 TGFβ1和 HGF的 m RNA表达明显增加 ,它能表达乙型肝炎病毒 (HBV) X基因 (HBX)的转基因小鼠中HBX基因可激活 TGFβ1基因的转录 [1 ,2 ] .我们对急慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清进行 TGFβ1和 HBX蛋白测定 ,并研究它们的变化及意义 .1　对象和方法1.1　对象　急性乙型肝炎 (AHB)患者 19(男 13,女 6 )例 ,年龄 18～ 45岁 ;慢性乙型肝炎患者 2 2 (男 15 ,女 7)例 ,年龄 2 2～48岁 ;肝硬化 (L C) 2 …     

鼠源抗胃癌抗体轻链可变区基因克隆及其结构分析

目的 扩增与人胃癌细胞特异结合的鼠源性抗体轻链可变区基因,并对其基因序列进行分析。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法从分泌鼠源抗人胃癌抗体的杂交瘤细胞扩增出抗体轻链可变区基因,克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体,测序仪测定其基因序列并对其结构进行分析。结果 所获得的基因由３５４ｂｐ组成,编码１１８个氨基酸,序列分析证实该基因可变区序列符合小鼠Ｉｇ轻链可变区的氨基酸序列特征。结论 获得的鼠源抗胃癌抗体轻链可变区基因为ｋⅢ     

冷应激大鼠垂体差异表达基因的克隆

0　引言　冷暴露机体变化机制及其预防措施的研究一直是特殊环境医学研究的重要课题 [1 ] .在冷应激条件下 ,机体变化非常广泛、复杂 ,研究结果也很凌乱 ,无法整理出一个系统性结论 .任何机体酶和蛋白质的差异 ,其根本是基因表达的差异 .研究表明 ,冷应激时 ,机体变化的基础就是基因表达的变化 ,但是有关的研究报道至今尚未见到 .如果能成功分离出冷应激时机体的特异表达基因 ,对于提高冷环境作业能力、防治冷损伤都具有十分重要的意义 .我们采用 m RNA差异展示技术 ,分离正常生存环境和低温环境下的大鼠垂体差异表达基因 ,从而为从分子水…     

检测艾滋病患者外周血HIV-1 DNA水平的竞争性PCR方法的建立

定量检测艾滋病患者体内荷毒水平对于评价治疗效果和研究发病机理至关重要 ,我们建立了一种检测 HIV- 1DNA水平的竞争性 PCR方法 ( QC- PCR)。选择 HIV- 1的高度保守区域 gag基因作为靶序列 ,以重组 PCR方法和基因克隆技术构建两种重组质粒 ,分别插入有 gag和 Δ gag片段 ,其中后者比前者内部缺失 50 bp,用作定量检测中的竞争模板。将梯度稀释的竞争模板加入到反应体系中与待测的野生型模板共同扩增 ,PCR产物经 8%聚丙烯凝胶电泳后进行密度扫描测定 ,结果表明该方法稳定可靠 ;8份艾滋病患者的 PBMC DNA标本经该方法的检测也得到较好的结果。我们认为 QC- PCR是一种较为理想的 HIV- 1DNA水平的定量方法 ,非常适合于临床标本的检测和治疗研究的应用。     

荧光偏振技术同步检测肺炎支原体肺炎衣原体方法的研究

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）、肺炎衣原体（Chlamydophila pneumoniae，CP）是呼吸道感染的常见病因，及早准确地检测，对预防控制相关疾病非常重要。本研究采用荧光偏振检测与模板指导的末端延伸反应检测技术相结合（TDI-FP）的方法，建立了在同一反应体系中同步检测肺炎支原体、肺炎衣原体感染的方法。     

应用荧光偏振技术检测HBV DNA

目的　建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法。方法　用荧光偏振技术检测 10 2例乙型肝炎患者血清中的HBVDNA ,并与多聚酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)方法作比较。结果　该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,CV为 6 .4 4 % ,对 10 2例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBsAg( )、HBeAg( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 10 0 % ( 4 0 / 4 0 ) ;HBsAg( )、抗HBe( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 81.8% ( 2 7/ 33) ;HBsAg( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 72 .4 % ( 2 1/ 2 9) ,其余为阴性。 30例非乙型肝炎患者血清中HBVDNA的检测结果均为阴性。结论　该方法简单、灵敏、特异 ,适用于临床进行大样本核酸检测     

荧光偏振检测HBVDNA前C区nt1896位点突变

目的　建立简便的HBVDNA前C区nt1896位点突变的检测方法。方法　采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测。首先对HBVDNA前C区基因进行PCR扩增 ,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交 ,使探针的 3’端可以在DNA聚合酶的作用下 ,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP ,然后检测该 3’端带有荧光素探针的偏振光值 ,根据检测得到的荧光素种类及其偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸。结果　该方法可以检测出HBV基因序列中nt1896的核苷酸类型 ,最低可检出的突变模板量为 1× 10 1拷贝。结论　该技术可以对血清中HBVDNA前C区nt1896位点突变以及其他基因突变进行检测。