旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠脓毒症急性肾损伤的保护作用

目的　探讨旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂（TsadSPI）对小鼠脓毒症急性肾损伤的保护作用。方法 BALB/c雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、TsadSPI治疗组,每组6只,共18只。模型组和TsadSPI治疗组小鼠采用盲肠结扎穿孔术（CLP）构建脓毒症急性肾损伤模型,假手术组小鼠剖腹探查,不结扎、不穿孔盲肠。术后30 min,假手术组和模型组小鼠腹腔注射100 μL PBS溶液,TsadSPI治疗组小鼠腹腔注射100 μL含有2 μg TsadSPI蛋白的PBS溶液。造模后12 h,检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平以评价肝肾功能,HE染色观察小鼠肾脏结构改变,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）?α、白细胞介素（IL）?6、IL?10、转化生长因子（TGF）?β水平,采用免疫组化染色评估肾脏组织中髓样分化因子88（MyD88）、核因子?κB p65（NF?κB p65）表达水平。结果　术后12 h,3组小鼠血清ALT（F = 41.031,P < 0.001）、AST（F = 54.757,P < 0.001）、Cr（F = 24.142,P < 0.001）和BUN水平（F = 214.849,P < 0.001）差异均有统计学意义,模型组小鼠ALT、AST、Cr和BUN水平均显著高于假手术组（P < 0.001）,而TsadSPI治疗组小鼠ALT、AST、Cr和BUN水平均显著低于模型组（P < 0.001）。HE染色结果显示,小鼠CLP术后肾脏损伤严重,TsadSPI治疗后损伤明显缓解。ELISA检测结果表明,3组小鼠血清TNF?α（F = 47.502,P < 0.001）和IL?6水平（F = 222.061,P < 0.001）差异均有统计学意义,TsadSPI治疗组小鼠TNF?α、IL?6水平较模型组显著下降（P < 0.001）;3组小鼠血清IL?10（F = 16.227,P < 0.001）和TGF?β水平（F = 52.092,P < 0.001）差异均有统计学意义,TsadSPI治疗组小鼠血清IL?10、TGF?β水平较模型组均显著升高（P < 0.001）。免疫组化染色结果表明,模型组小鼠肾脏组织内MyD88表达水平及NF?κB p65核阳性率显著高于TsadSPI治疗组。结论　TsadSPI可减少小鼠肾脏组织内MyD88表达及NF?κB p65核阳性率,进而上调免疫调节因子、下调促炎因子水平,从而保护脓毒症造成的肾脏损伤。