胞内分枝杆菌HSP65基因克隆、分析及其原核表达的研究

目的克隆胞内分枝杆菌HSP 65基因,对其进行生物信息学分析与原核表达。方法应用巢式PCR克隆胞内分枝杆菌HSP 65基因,利用在线分析软件对其进行生物信息学分析。构建原核表达载体p ET 15b-HSP 65并进行诱导表达。结果胞内分枝杆菌HSP 65基因完整ORF基因全长1 626 bp,编码541个氨基酸。HSP 65蛋白为酸性、亲水性蛋白质,亚细胞定位主要存在于细胞质,蛋白二级结构以α-螺旋、无规则卷曲及β-折叠为主。使用同源建模法预测了HSP 65基因编码蛋白三维立体结构。试验构建p ET 15b-HSP 65原核表达载体并成功表达。结论成功克隆胞内分枝杆菌HSP 65基因,并对HSP 65蛋白进行了生物信息学分析及原核表达。     

副结核病诊断抗原研究进展

副结核病是由禽分枝杆菌副结核亚种（Myco-bacterium aviumsubsp.Paratuberculosis,MAP）引起的多种动物共患的慢性、肠道肉芽肿性传染病,也称Johne＇s病,呈世界性分布,在我国被列入二类动物疫病。调查表明,美国大约20%～40%的奶牛群感染MAP,     

维氏气单胞菌最新研究进展

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii, A. veronii)是一种重要的人、兽及水生生物共患病原菌,可引起人类胃肠炎、腹膜炎、败血症和外伤感染等,严重威胁着人类健康,而且给水产养殖业造成了巨大经济损失。本文对A. veronii的病原学、临床特征、国内外流行现状以及致病机理的最新研究进展进行概述,旨在为该菌的防治提供参考。     

CRISPR/Cas9基因编辑技术在病原微生物中的应用

规律成簇间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)广泛存在于古细菌及细菌中是细菌在长期进化过程中形成的一种获得性免疫系统。近年来以该系统为基础,经过人工改造形成的一种新型基因编辑技术—CRISPR/Cas9在基因工程领域的应用越发广泛;该技术与前两代编辑技术相比,具有结构简单、成本低廉、实用价值较高等优点。自2012年在基因研究领域成功应用后,已成为当前关注度较高的基因编辑工具;该技术在多种真核生物的基因修饰中已得到成功应用,但在病原微生物上却报道较少。本文将从CRISPR/Cas9系统的结构、作用机制及其在病原微生物基因功能研究中的应用等几个方面进行综述为其深入研究奠定基础。     

新报道非结核分枝杆菌临床分离株

本文综述了近5年来新报道的24种非结核分枝杆菌所致疾病及分离、鉴定情况,其中5种分别属于快生长分枝杆菌中的2个群,3种属于未分群的快生长分枝杆菌;7种分别属于慢生长分枝杆菌中的4个群,5种属于未分群的慢生长分枝杆菌;另外4种为新命名非结核分枝杆菌。本综述为非结核分枝杆菌病的临床诊断及防控提供了参考。     

中蜂囊状幼虫病毒LN-QY株VP2结构蛋白的基因分析及B细胞抗原表位预测

目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP2蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法将已感染CSBV LN-QY株的RNA作为模板,进行RT-PCR扩增该毒株结构蛋白VP2基因,再与pMD18-T载体连接,之后转化大肠杆菌DH5α感受态,对经EcoRⅠ和BamH I双酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对,获得LN-QY株VP2的核苷酸序列和推导的氨基酸序列,建立VP2结构蛋白的3D模型,在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性以及抗原指数等参数。结果 VP2结构蛋白的空间构象比较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于178-184,144-199,211-217氨基酸区段。结论本研究为CSBV LN-QY株VP2蛋白表位疫苗的设计以及血清诊断试剂盒的研制奠定了理论基础。     

1株鼠源狂犬病毒野毒株全基因组序列测定与分析

目的对1株分离自牛狂犬病疫区野鼠脑内的狂犬病毒野毒株(MRV)进行全基因组测序,并对其分子变异和进化特点进行分析。方法RT-PCR扩增克隆覆盖全基因组9个重叠基因片段,基因组3′末端和5′末端采取3′-RACE和5′-RACE方法。结果9个重叠基因片段序列拼接得到MRV全基因组序列,共11869个核苷酸。MRV毒株全基因组构成与其他狂犬病毒基因组构成相似,由5个编码区组成,基因起始位点和终止位点高度保守,在核蛋白和糖蛋白的重要抗原位点有个别氨基酸发生变异。选择有代表性的狂犬病毒株,构建了N基因分子系统进化树。结论MRV毒株属于狂犬病毒基因1型,与AV01和CVS同源性最高为99%,与分类位置未确定的北高加索毒株(WCBV)的同源性最低为72%。     

几种PCR方法在狂犬病毒基因测序中的应用

目的本研究在狂犬病毒全基因测序中应用了RT—PCR法、递减PCR法、嵌套PCR3-法及3’-Full RACE等方法，有效的解决了狂犬病毒在体外扩增时遇到的困难。成功地获得了狂犬病毒野毒株BRV的全基因的eDNA，为实现基因测序及下一步研究工作奠定了理论技术基础。     

结核分枝杆菌L型研究现状与兽医临床

细菌L型（bacterial L-forms）是细菌在体内外受到各种直接或间接损伤细胞壁的理化和生物因素的影响,其细胞壁受到破坏或细胞壁的合成受阻而转化成一种细胞壁缺失或缺陷的细菌（cell Wall-de-ficeint bacteria,CWDB）。结核分枝杆菌（Myco-bacterium Tuberculosis）也同其它细菌一样,在干扰细胞壁合成或破坏细胞壁结构的因素作用下以及在自然生长繁殖的过程中,发生细胞壁缺陷形成L型（MTB—L）。