甲型H1N1流感病毒快速诊断核酸试纸条的研制及应用

目的建立一种快速、灵敏度高、特异性强的核酸试纸条检测甲型H1N1流感病毒。方法根据2009年公布新型甲型H1N1流感病毒基因组序列设计合理的引物建立环介导恒温扩增体系,并在体系中加入含生物素的标记探针;在恒温下扩增45 min后产物与醋酸纤维棉片结合进行胶体金免疫试纸条显色反应,利用该方法检测76例确诊甲型H1N1流感病毒感染患者的咽部分泌物,同时采用卫生部公布的合格试剂盒进行对比试验。结果 76例确诊患者咽部分泌物经核酸试纸条检测全阳性,经对比试剂盒检测103拷贝/ml的标本进行10倍稀释后采用核酸试纸条检测结果仍能测出。结论核酸试纸条法检测甲型H1N1流感病毒具有快速、灵敏度高、特异性强的特点更适合于临床快速诊断。     

乙型肝炎病毒恒温扩增试纸条法检测在临床中的应用

PCR技术近年来广泛应用于临床诊断和治疗中,尤其是荧光定量PCR被现有三级医院所广泛使用,但在二级及二级以下医院却难以广泛开展,主要原因为:现有定量PCR仪比较昂贵,少则也要50多万元人民币,定性PCR虽不要昂贵的仪器,但存在污染,况且不能定量.恒温扩增试纸条法刚好解决了以上的问题,现报告如下.     

PCR-LDR-核酸试纸条检测法在结核分枝杆菌katG基因315位密码子突变检测中的应用

目的将一项新的分子生物学方法PCR-LDR-核酸检测试纸条法应用于katG基因315位密码子单碱基突变的检测。方法设计与合成用于检测katG基因315位密码子单碱基突变的引物和探针,通过LDR反应,使用核酸检测试纸条检测结果,并与PCR-RFLP法及直接测序法相比较。结果成功区分各突变类型及野生型,与PCR-RFLP法及直接测序法的检测结果呈高度一致性,符合率分别为97.5%和100%。结论将为katG基因315位密码子单碱基突变的检测提供一种快速廉价的分子诊断方法。     

交叉引物恒温扩增法检测甲型H1N1流感病毒及临床应用

目的建立交叉引物恒温扩增(Cross Priming Amplification,CPA)技术对甲型H1N1流感病毒进行检测的方法,并对该方法通过临床标本进行评价。方法根据甲型H1N1流感病毒的保守序列设计特异性引物,并在同一温度下实现RNA的逆转录和DNA扩增,该扩增产物可通过全封闭式核酸检测装置进行检测。14份健康人咽拭子标本、7个其他呼吸道病毒和6个虫媒病毒株被用来检测CPA反应的特异性;已知病毒滴度的甲型H1N1毒株进行对照梯度稀释,以测试CPA的敏感性;102份甲型H1N1临床咽拭子标本为检测对象,评估其临床的检测的可行性。结果 CPA反应未出现对健康样本以及其他病毒产生交叉反应;对已知滴度的病毒进行梯度稀释检测,证明CPA的敏感性为10拷贝/μL。对甲型H1N1流感临床病例发病1~3d临床标本新建检测方法的检出率为100%,4~6d临床标本检出率为79.31%,≥7d临床标本检出率为9.09%。讨论CPA具有较高的敏感性、特异性,对设备要求低,适合基层医疗单位对甲型H1N1流感发病早期诊断使用。     

甲型H1N1病毒核酸LAMP检测方法的建立

2009年的甲型H1N1流感在墨西哥暴发以来很短的时间内传播全球,WHO预测全球80%人群易感,早期快速诊断、隔离是控制甲型H1N1流行的有效手段.     

环介导等温扩增检测甲型H1N1病毒核酸方法的建立

目的建立检测甲型H1N1病毒环介导等温扩增的方法(LAMP)。方法根据已公布的甲型H1N1流感病毒HA基因序列766~995bp的6个位点设计6条LAMP引物(2条内引物,2条外引物,2条环引物),优化并建立LAMP检测体系。并对36例确诊H1N1感染患者和20例健康体检者的咽式子同时采用实时荧光RT-PCR(Real-time RT-PCR)和LAMP进行H1N1病毒核酸的检测。结果所建立的甲型H1N1病毒核酸LAMP反应体系具有良好的特异性,采用该体系检测结果与Real-time RT-PCR检测结果一致,对H1N1核酸阳性的标本经LAMP扩增产物电泳图为阶梯状条带,健康对照标本未见条带产生。灵敏度试验,采用103复制的H1N1质粒进行10倍稀释后LAMP法仍能检出。特异性试验,20例体检标本经两种方法检测全阴性,对肺炎支原体和肺炎衣原体阳性标本采用该反应体系进行检测结果为阴性。结论甲型H1N1病毒核酸LAMP检测方法简便、快捷,对实验仪器设备要求不高,适合各级实验室和现场快速诊断使用。