大鼠生长期触须毛囊干细胞中FGF-13的表达研究

目的探讨大鼠生长期触须毛囊中以及体外培养的毛囊隆突部细胞即毛囊干细胞中FGF-13的表达分布及其意义.方法分别采用免疫组织化学方法和免疫细胞化学方法检测FGF-13的表达.结果体外和在体两种情况下,毛囊隆突部细胞都有FGF-13的表达,在体情况下毛囊Bulge区以下毛球部以上的外根鞘细胞中亦有干细胞标记和FGF-13的表达.结论提示FGF-13参与生长期触须毛囊隆突部细胞沿毛囊外根鞘向下迁移这一过程.     

品管圈在缩短急性缺血性脑卒中患者静脉溶栓诊疗时间的应用

目的 探讨品管圈在急性缺血性脑卒中患者诊疗流程中缩短患者到院至接受静脉溶栓时间(door to needle time,DNT)的应用.方法 组建护理组品管圈,通过对急性缺血性脑卒中患者的静脉溶栓情况进行现状调查,分析DNT过长的原因,设定DNT目标值为60 min,并有针对性地进行整改、进行效果确认.结果 通过本次品管圈活动,DNT由原来(78.14±12.41) min缩短至(59.81±11.43) min,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 通过开展品管圈活动,有效地缩短急性缺血性脑卒中患者的诊疗流程中DNT,为急性缺血性脑卒中患者治疗赢得了时间.     

内毒素血症小鼠骨骼Toll样受体4基因的变化

目的 通过检测内毒素血症模型动物骨骼相关基因表达变化,进一步明确内毒素对机体的损害机制,为下一步研究骨骼变化对脏器产生何种影响奠定基础.方法 腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)制作内毒素血症小鼠模型.将48只小鼠随机分为正常组和LPS处理4、6、8、12、24、48和72 h组,每组6只.采尾血计数全血白细胞;取眼眶血检测肝、肾功能;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨骼中TLR4 mRNA表达;苏木素-伊红(HE)染色,镜下观察骨骼病理学变化.结果 与正常组比较,LPS 4 h组白细胞计数显著下降(P＜0.01),之后逐渐升高,于72 h时显著高于正常组(P＜0.05);LPS 4 h和6 h组丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著升高(P均＜0.05),于8 h降至正常水平(P＞0.05);LPS 6 h组血尿素氮(BUN)水平逐渐升高(P＜0.05),于8 h达峰值(P＜0.05),然后下降,12 h趋于正常(P＞0.05);LPS 6 h组TLR4 mRNA表达增加(P＜0.01),24 h达峰值(P＜0.01),然后逐渐下降,72 h仍处在较高水平(P＜0.05).LPS作用于骨骼后,HE染色显示骨骼无明显改变.结论 内毒素血症中骨骼TLR4 mRNA表达量显著增加.     

利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠h1-calponin的RNA干扰载体

目的 利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠碱性调宁蛋白(h1-calponin)的RNA干扰载体并对其干扰效率进行验证.方法 利用在线软件设计三段针对小鼠h1-calponin cDNA的寡核苷酸(A、B、C)片段,经退火成为双链后分别装入pSOS-HUS载体,得到载体调宁蛋白-PS-A/B/C,再将h1-calponin cDNA插入该载体和GFP一起融合表达,得到调宁蛋白RNAi-A/B/C 3个载体;对上述载体经酶切和测序鉴定后,转染至HEK293T细胞株,通过倒置荧光显微镜观察GFP荧光强度来判断上述载体的干扰效果.结果 经酶切和测序证明针对小鼠h1-ealponin的3个RNA干扰载体构建成功,荧光显微镜下观察显示,和空载体pSOS-HUS(未插入RNA干扰片段)相比,A组的荧光强度减弱最明显,B的基本不变,C的荧光强度稍有减弱.结论 成功构建了针对h1-calponin的RNA干扰载体.     

康复运动有助于心肌梗塞患者的恢复

目的:探讨早期康复运动对急性心肌梗塞患者的疗效。方法:将2002年8月到2004年10月在我院循环内科住院并符合入选标准的80例急性心肌梗塞患者,按自愿原则,分成两组,治疗组早期进行常规药物治疗,并早期实行严格合理的运动疗法,对照组绝对卧床,只进行常规药物治疗,不进行康复训练。采用Barthel指数评定患者的日常生活能力,并对比两组的平均住院天数,住院期间的平均花费,心律失常的发生率及生活自理能力,两组患者两年后心肌梗塞的再发率。结果:治疗组平均住院天数、平均花费较对照组减少(P<0.05),日常生活能力较对照组有显著改善(P<0.05),心律失常的发生率两组之间无显著性差异,治疗组的生活自理能力优于对照组(P<0.05)。两年后,治疗组心肌梗塞的再发率均低于对照组(P<0.05)。结论:康复运动有助于心肌梗塞患者的恢复。     

大脑中动脉狭窄支架成形术后狭窄段血流动力学异常的可能机制

目的探讨大脑中动脉(MCA)支架成形术后短期内的血流动力学变化规律,分析术后狭窄段异常动力学改变的可能原因。方法对于抗栓治疗期间仍有症状发作的MCA中重度狭窄患者,完成MCA支架成形术。应用经颅多普勒超声(TCD)技术,系统评价术前及术后3d内的血流动力学变化。根据血流动力学的变化,并结合临床及影像学改变分析血流动力学异常的可能机制。结果29例患者(31条MCA中)完成了支架成形术,27条动脉支架术后3d内狭窄段的TCD频谱恢复至接近正常的水平。4例患者(4条动脉)3d在狭窄段又出现了狭窄样频谱,2例CT显示颅内出血。可能的原因:3例考虑过度灌注综合征,1例MCA下干狭窄加重。结论对于MCA支架成形术后血管开通良好但TCD提示仍然存在或再次出现狭窄样频谱的患者,过度灌注综合征及其它部位的狭窄可能是常见原因。     

体外培养条件下毛囊bulge细胞分泌的β神经生长因子的检测

目的定性定量地检测毛囊bulge细胞体外培养条件下分泌的β-神经生长因子(β-nerve growth factor,β-NGF)及其与bulge细胞生长状态的关系.方法首先使用显微操作技术剥离出原代组织,然后培养原代细胞,使用超薄切片和透射电镜技术来观察原代细胞超微结构,使用酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法测定原代bulge细胞分泌的β-NGF,利用免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)方法检测原代细胞中β-NGF的表达.结果成功培养出原代bulge细胞,ICC方法检测到原代培养的bulge细胞质表达强阳性β-NGF.超薄切片和透射电镜技术能够显示出原代培养bulge细胞的内部结构,即核质比大,细胞器较少.通过ELISA方法能够测定出原代细胞分泌的β-NGF与体外原代培养的bulge细胞特性呈规律性变化.结论原代bulge细胞分泌的β-NGF呈规律性表达,即生长高峰时期表达最为丰富,这与毛囊bulge细胞的生长状态具有规律性变化有关,因此他们具有必然的联系.     

原代培养小鼠关节软骨细胞的分化与诱导

背景：传统培养方法体外培养的软骨细胞经长时间传代培养后往往去分化为成纤维细胞,导致细胞数量及活性下降。如何避免培养过程中的去分化问题,是模拟体内软骨内成骨软骨发育过程的关键。 目的：课题创新性提出以Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶结合消化法体外培养扩增C57BL/6小鼠关节软骨细胞并诱导其向更成熟肥大软骨细胞或终末分化软骨细胞分化。 设计、时间及地点：细胞学体外观察实验,于2008-09/12在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军战创伤中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。 材料：C57BL/6品系新生小鼠9只。 方法：采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶结合消化法分离培养C57BL/6 新生小鼠关节软骨细胞,细胞计数法绘制细胞生长曲线,RT-PCR检测Ⅱ型胶原进行鉴定。当细胞90%融合时以含5.5 mg/L人转铁蛋白,3×10-8 mol/L亚硒酸钠,10 mg/L牛胰岛素的ITS诱导培养基进行分化诱导。 主要观察指标：诱导0,7 d,阿利新蓝染色检测软骨细胞分泌基质中的葡萄糖胺聚糖,von Kossa染色检测软骨细胞钙化结节形成情况,实时定量PCR检测Ⅱ型胶原、X 型胶原及基质金属蛋白酶13的表达进行鉴定。 结果：原代培养细胞24 h贴壁,呈三角或多角形,培养4~6 d进入快速增殖期,RT-PCR检测到Ⅱ型胶原的表达,证实获得大量高纯度、高活性的软骨细胞。诱导0 d,细胞单层铺满培养皿底面,无聚集现象;诱导7 d 明显可见由软骨细胞聚集形成的软骨小结。与诱导0 d时相比,诱导7 d阿利新蓝染色示软骨细胞分泌基质中的葡萄糖胺聚糖染色呈阳性,可见明显的软骨小结,Ⅱ型胶原及基质金属蛋白酶13表达明显增高,且钙化结节明显增多。 结论：采用胰蛋白酶和胶原酶结合消化法获得大量高纯度、高活性的软骨细胞。ITS诱导体系有效地促进了软骨细胞成熟及终末分化,较成功模拟了软骨内成骨的软骨发育过程。     

牙周病的正畸治疗及护理

目的探讨牙周病的正畸治疗方法及护理配合经验。方法回顾性分析我院于2010年10月至2012年10月收治的67例牙周病患者的临床资料。结果 67例患者均顺利完成了整个疗程,并且牙齿松动、牙周炎症及错关系在治疗结束后均得到明显改善,平均治疗时间为11个月。结论在对牙周病患者进行正畸治疗的过程中,配合优质的护理服务,能够取得良好的临床疗效,提高患者对于医疗服务质量的满意度。     

β-NGF和p75NTR在鼠胚触须隆突区的表达

目的 研究胚胎大鼠触须毛囊隆突区β-神经生长因子(β-NGF)、p75神经营养因子受体(p75NTR)与毛囊干细胞特异标志物的表达规律.方法 冰冻超薄切片,免疫组织化学方法.结果 胚胎大鼠的触须隆突区表达的β-NGF和p75NTn呈规律性变化.3种毛囊干细胞(HFSC)标志物的表达有差异,毛囊发生初期毛囊干细胞(HFSC)不仅仅定位于触须毛囊上段,整个毛囊下部3/4都有表达.结论 β-NGF和p75NTR的表达变化可能与毛囊干细胞以及毛囊的生物学特性有关.