线粒体自噬在糖尿病肾病肾组织巨噬细胞表型转化中的作用

目的:探讨糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织线粒体自噬特征与巨噬细胞M1/M2表型的相关性及在其分化中的作用。方法:建立DN大鼠模型分别于8周、12周、18周、24周末处死,病理染色观察肾脏病理改变,电镜观察肾组织线粒体形态数量和线粒体自噬。Western Blot检测肾组织巨噬细胞及线粒体自噬相关蛋白标志物表达。体外培养RAW264.7细胞,Western Blot和免疫荧光共聚焦比较自噬体生成抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和自噬体生成激活剂雷帕霉素干预前后,巨噬细胞表型标志物和线粒体自噬相关指标的变化。结果:体内实验(1)从12周起,随着时间延长DN大鼠肾组织巨噬细胞浸润M1型增多,并且存在线粒体自噬障碍,表现为iNOS升高,LC3蛋白逐渐降低,p62升高;(2)相关性分析显示,iNOS与LC3成负相关(r=-0.617,P0.05),而与p62成正相关(r=0.894,P0.05);(3)电镜结果显示DN大鼠肾组织线粒体肿胀、线粒体嵴消失或降低,且存在线粒体自噬障碍。(4)免疫荧光共聚焦结果显示,DN大鼠肾组织线粒体标记蛋白VDAC和LC3较对照组均降低,共定位表达减少。体外实验(1)高糖干预后,Western Blot结果显示RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α、iNOS随着时间延长逐渐升高,同时LC3、Beclin-1表达显著降低,p62明显升高,VDAC逐渐降低。(2)3-MA抑制自噬体生成能促进高糖诱导的巨噬细胞进一步向M1型巨噬细胞转化;(3)雷帕霉素激活自噬体生成能降低高糖诱导的M1型巨噬细胞活化。结论:线粒体自噬可能参与DN大鼠肾组织巨噬细胞M1/M2表型转化。     

活性维生素D3通过抑制TRPC6表达发挥糖尿病肾病的保护作用

目的:探讨活性维生素D3对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)大鼠的肾保护作用是否与抑制瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)有关.方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、DN组及DN加活性维生素D3干预组(DN+ VD组)3组各10只.造模成功后6、12、18周检测大鼠体重、24 h尿蛋白量;造模成功后18周末处死大鼠,检测血样及肾组织指标变化.结果:DN+ VD组与DN组相比蛋白尿显著减少,肾脏病理损伤改善.DN组与NC组比较,Podocin、Nephrin蛋白表达量均明显降低(均P＜0.05),Desmin和TRPC6蛋白表达量均显著升高(均P＜0.05),活性维生素D3干预后上述改变明显改善,差异有统计学意义.相关性分析显示:TRPC6与Podocin(r=-0.808,P＜0.05)、Nephrin(r=-0.791,P＜0.05)呈负相关,而与24 h尿蛋白(r=0.886,P＜0.05)、Desmin(r=0.929,P＜0.05)呈正相关.结论:活性维生素D3显著抑制STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤,其作用机制与调节足细胞TRPC6的表达有关.     

高糖对人脐静脉内皮细胞表达的黏附分子CD_(146)的影响

目的:观察高糖刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)上黏附分子CD_(146)的表达,初步探讨CD_(146)在早期糖尿病肾病发病中的作用。方法:体外培养的HUVECs根据培养液含D-glucose浓度不同分成以下几组:正常对照组NG组(5 mmol/L);高糖组(HG组):15 mM组(15 mmol/L),30 mM组(30 mmol/L),45 mM组(45 mmol/L),培养72 h后收集各组细胞,用反转录-聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测CD_(146) mRNA的表达;western blot方法检测各组CD_(146)蛋白表达量。结果:RT-PCR检测到的NG组及HG(15 mM、30 mM、45 mM)组CD_(146) mRNA的表达量分别为(/β-actin):0.28±0.03,0.30±0.04,0.68±0.14,0.45±0.11;western blot检测到各组CD_(146)蛋白质表达的量分别为(/atublin):0.60±0.11,0.74±0.13,1.03±0.09,0.89±0.11。单因素方差分析提示HG30 mM组的CD_(146) mRNA及蛋白质表达最强,与NG组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:高糖可刺激体外培养的HUVECs高表达黏附分子CD_(146),可能成为糖尿病肾病早期内皮损伤的标志物。     

调控自噬流对巨噬细胞粘附与迁移功能的影响

目的巨噬细胞浸润是包括糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)在内的多种慢性肾脏疾病的重要组织病理特征。本研究通过调控巨噬细胞(RAW264.7)自噬流各阶段,探究其对巨噬细胞黏附迁移功能的影响。 方法体内实验,建立糖尿病肾病大鼠模型,于12周末分别处死正常大鼠、DN组大鼠,病理染色观察肾脏病理改变,检测肾组织巨噬细胞标志物及自噬相关标志物表达。体外实验,检测正常与高糖(30 mM)条件下,巨噬细胞自噬体数量变化,LC3、Beclin－1(自噬相关标志物)、P62(自噬体清除指标)的表达,以及巨噬细胞粘附迁移数量。分别加用自噬溶酶体降解抑制剂氯喹(CQ)、自噬体生成激活剂雷帕霉素(RAPA),观察其对巨噬细胞自噬标记物表达及其粘附迁移功能的影响,电镜观察巨噬细胞自噬体数量与自噬溶酶体形态的变化。 结果体内实验,DN大鼠肾脏损伤明显,肾小球体积增大,基底膜增厚,系膜基质增多,肾组织CD68(巨噬细胞标志物)、P62表达增加(t＝3.35、t＝16.27, P<0.05),LC3表达减少(t＝51.12, P<0.05);体外实验,在高糖组,电镜观察发现自噬体数量较正常组减少,Western印迹与免疫荧光显示自噬相关蛋白LC3、Beclin－1表达降低,P62表达升高(t＝27.02,t＝45.56、t＝32.71,P<0.05),巨噬细胞粘附和迁移数量增多(t＝6.87、t＝8.76,P<0.05)。用CQ处理后,电镜观察发现巨噬细胞自噬体溶酶体降解受到抑制,Western印迹与免疫荧光显示自噬相关蛋白LC3、Beclin－1表达降低,P62表达升高(t＝14.64、t＝12.45、t＝8.57,P<0.05);CQ进一步促进高糖诱导的巨噬细胞黏附迁移数量增多(t＝4.37、t＝7.27,P<0.05);RAPA增加巨噬细胞自噬体数量,Western与免疫荧光显示RAPA提高了被高糖抑制的巨噬细胞自噬水平,[LC3、Beclin－1表达升高,P62表达降低(t＝9.37、t＝11.53,t＝8.73;P<0.05)],减少高糖诱导的巨噬细胞黏附、迁移数量增多(t＝4.16、t＝5.74, P<0.05)。 结论高糖抑制自噬水平,促进巨噬细胞黏附迁移;抑制自噬溶酶体降解可降低自噬水平、促进巨噬细胞粘附迁移;激活自噬体生成能提高自噬水平,减轻巨噬细胞粘附迁移。     

糖尿病肾病患者血清可溶性髓样细胞触发受体1表达变化及临床意义

目的 探究血清可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)在糖尿病肾病(DN)早期诊断中的应用价值。方法选择2020年12月至2022年1月在嘉兴市第一医院接受治疗的88例2型糖尿病患者,按照其病情将其分为单纯糖尿病组(DM组,n=33)、早期糖尿病肾病组(EDN组,n=32)和临床糖尿病肾病组(DN组,n=23),另取同期在本院接受健康体检者30例为对照组。收集4组研究对象一般资料、生化指标、肾功能指标、血清炎症因子及血清sTREM-1水平,比较各组间的差异,采用Pearson法分析血清sTREM-1水平与血清炎症因子水平的相关性,采用ROC曲线分析血清sTREM-1水平对DN早期病变的诊断价值。结果 4组糖化血红蛋白、总胆固醇、三酰甘油、胰岛素抵抗指数、空腹C肽及空腹血糖差异均有统计学意义(均P <0.05);4组肌酐、尿酸及尿微量白蛋白/尿肌酐比值差异均有统计学意义(均P <0.05);4组血清炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β(TGF-β)及sTREM-1水平差异均有统计学意义(均P <...     

活性维生素D通过调节糖尿病肾病大鼠巨噬细胞M1及M2表型活化防治足细胞损伤

目的 探讨活性维生素D（VD）能否通过调节肾组织巨噬细胞M1 及M2 表型活化从而防治糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞损伤。 方法 利用腹腔注射链脲菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型。将SD 雄性大鼠按随机数字表法分为4 组：对照组1（NC-1 组,n=8）、对照组2（NC-2 组,n=8,对照+骨化三醇0.1 μg·kg^-1·d^-1 灌胃）、DN 组（n=24）、DN+VD 干预组（VD 组,n=24,DN+骨化三醇0.1 μg·kg^-1·d^-1 灌胃）,定期检测血糖、体质量,收集尿标本,分别于干预后8周、14周、18周末处死动物,检测Scr、BUN和尿蛋白变化;PAS染色观察肾脏病理改变;免疫组化法检测肾组织CD68+巨噬细胞浸润数量;Western 印迹法检测nephrin、podocin、CD68 以及M1巨噬细胞特异性标志物诱导型氮氧化物合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和M2巨噬细胞特异性标志物CD163、精氨酸酶1（Arg-1）、甘露糖受体（MR）表达。 结果 （1）与两对照组相比,DN 组Scr、BUN、24 h 尿蛋白量及肾小球系膜基质增生程度显著增加（P＜0.05）,podocin、nephrin蛋白表达下降（P＜0.05）。VD干预后能明显改善上述病理现象（均P＜0.05）。（2）与两对照组相比,DN组肾组织CD68⁺巨噬细胞浸润数量明显增加,呈时间依赖性。VD干预后能显著减少CD68⁺巨噬细胞浸润数量（P＜0.05）。（3）进一步确定肾组织巨噬细胞M1、M2活化表型发现,8周、14周、18周末DN组iNOS、TNF-α蛋白表达较对照组显著升高（均P＜0.05）,VD干预后能明显抑制同期DN肾组织iNOS、TNF-α表达（均P＜0.05）;8周、14周末VD组CD163、Arg-1、MR蛋白表达与DN组相比差异无统计学意义（均P＞0.05）,而18周末VD组CD163、Arg-1、MR蛋白表达较DN 组显著升高（均P＜0.05）,CD163/CD68 蛋白表达比例亦显著增加（P＜0.05）。（4）相关分析显示,M1 标志物iNOS 与nephrin、podocin 蛋白表达均呈负相关（r＝-0.707,P＜0.01;r＝-0.712,P＜0.01）;M2标志物CD163与nephrin、podocin蛋白表达均呈正相关（r＝0.627,P＜0.01;r＝0.613,P＜0.01）。 结论 活性维生素D具有调节巨噬细胞表型活化的能力,通过抑制巨噬细胞M1型活化并增强M2型活化,进而发挥足细胞保护作用。     

腹膜保护——透析液以外的影响因素

腹膜透析(PD)是终末期肾病的主要肾脏替代疗法之一.尽管新型透析液具有良好的生物相容性,但其腹膜的保护作用尚未被临床证实,究其原因在于PD患者存在除PD液以外,同样能影响腹膜结构的其他因素.本文主要综述除PD液影响腹膜结构和功能危险因素,为腹膜保护找到新的方法.