以骨间前动脉背侧支为蒂的桡骨瓣移位治疗月骨无菌性坏死

目的 探索治疗月骨无菌性坏死的有效方法。方法 对月骨无菌性坏死采用X线片等手段进行早期和晚期诊断，并设计以骨间前动脉背侧支为蒂的桡骨瓣移位术，替代坏死破裂的月骨。结果 临床应用8例，术后随访3—9个月，愈合时间3—5个月，腕关节疼痛消失、功能基本恢复正常。结论 采用骨间前动脉背侧支为蒂的桡骨瓣移位术能够重建月骨血运，促使月骨自身恢复。该手术操作简便，为治疗月骨无菌性坏死的良好方法。     

耳后皮瓣血管的显微外科解剖学基础

目的:研究颞浅动脉和耳后动脉之间的血管联系,以确定带不同血管蒂的耳后皮瓣的血供范围和皮瓣设计。方法:8具新鲜成人尸体经双侧颈总动脉灌注氧化铅-明胶混合液。掀起全层头皮和面部皮肤,将其展平摄X光片。结果:血管造影显示颞浅动脉和耳后动脉之间存在两种类型的血管吻合:一种是耳后区直接吻合,即在耳廓后面上方皮肤内可见颞浅动脉和耳后动脉发出的耳支之间存在直接吻合;另一种是头皮区网状吻合,即在耳上方头皮内可见来自颞浅动脉顶支和耳后动脉终末支之间的网状吻合。结论:本文结果有助于外科医生了解颞浅动脉和耳后动脉之间的血管联系,对耳后皮瓣的设计和改进提供可靠的解剖学基础。     

预制作生物工程性肌骨瓣的实验研究

目的 探索用羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)的支架材料与成骨细胞复合构成组织工程性肌骨瓣的方法,为修复骨缺损奠定基础.方法 自2004年12月至2006年1月,将36只新西兰大耳白兔髂后上棘抽取骨髓基质干细胞并诱导分化为成骨细胞,与HA/TCP结合培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况.将复合物埋入兔的背阔肌下构成组织工程性肌骨瓣.术后6周进行大体解剖观察,HE染色,研究组织工程性肌骨瓣的生长情况.结果 扫描电镜显示支架材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好的增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长,植入体内6周后取材见内植物有新骨形成,多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构.结论 骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞,与HA/TCP结合构建出组织工程性肌骨瓣.     

脱细胞血管基质与血管平滑肌细胞的体外相容性

目的：酶-化学除垢剂制备脱细胞血管基质，检测其与平滑肌细胞的相容性，探讨其作为组织工程支架材料的可行性。 方法：实验于2003-12／2005-12在哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心完成。①脱细胞血管基质制备：在37℃水浴振荡条件下，犬总动脉先后用1g/L胰蛋白酶＋0．2g/L乙二胺四乙酸钠和1．0％Triton X-100进行脱细胞处理24h和176h，充分漂洗，冷冻干燥后备用。②平滑肌细胞的提取：应用组织块贴壁法体外培养扩增犬隐静脉的平滑肌细胞。③四甲基偶氮唑盐法测定脱细胞血管基质浸提液对平滑肌细胞的毒性：设浸提原液、75％、50％和25％浸提液组，阴性对照组（DMEM＋体积分数为0．1的胎牛血清培养液）。以阴性对照组的吸光度作为100％细胞增殖率，增殖百分率（P％）=[实验组A值／阴性对照组A值]&;#215;100％，按ISO和医学生物材料标准评定材料毒性。④急性毒性试验：取成年大鼠8只，将备用脱细胞血管基质研磨成粉末，生理盐水配成2g/L的混悬液，无菌条件下向大鼠腹腔内注入1mL脱细胞血管基质混悬液，观察72h，记录动物有无死亡及不良反应。⑤亚急性毒性试验：取成年大鼠12只，随机分成2组。实验组用脱细胞血管基质混悬液灌胃，剂量为500mg／kg质量，隔日1次，共10次；对照组给等量生理盐水灌胃。实验期间观察记录体质量变化及动物活动情况。21d取血检查血常规。⑥溶血试验：取抗凝兔血8mL，加入生理盐水10mL，稀释备用。取脱细胞血管基质粉末，加生理盐水中，再加入稀释兔血离心后取上清测定545nm处的吸光度。阴性对照为生理盐水10mL加入稀释兔血；阳性对照为蒸馏水加入稀释兔血。溶血率=[（试验材料的吸光度-阴性对照的吸光度）／（阳性对照的吸光度-阴性对照的吸光度）1&;#215;100％。⑦凝血试验：血库健康献血员新鲜血浆，用自动血液凝固测定仪进行凝血酶原凝固试验、测定部分凝血活酶凝固时间、凝血酶凝固时间和纤维蛋白原。取血浆2mL加入脱细胞血管基质粉100mg，混合后再测定上述指标。 结果：①酶-化学除垢剂能使犬总动脉细胞几乎完全脱落，使基质纤维的三维结构变得疏松。苏木精-伊红、胶原染色和弹力纤维染色显示脱细胞血管基质无细胞残留，主要成分为胶原和弹力纤维。②动物实验表明材料无急性、亚急性毒性。体外实验脱细胞血管基质的溶血率为1．6％，符合医用生物材料生物性能测试所提出的溶血率〈5％标准。材料混合前后，血浆中凝血酶原凝固试验、部分凝血活酶时间、凝血酶凝固时间和纤维蛋白原4项指标检测结果无明显变化，说明材料不引起凝血功能的改变。③四甲基偶氮唑盐显示75％脱细胞血管基质浸提液培养平滑肌细胞1，3和5d后，细胞增殖率均大于95％，材料毒性为0或1级。 结论：Triton X-100和胰蛋白酶制备的脱细胞基质具有良好的生物相容性，能与异体犬平滑肌细胞结合到一起，并在体外生成血管移植物。     

脱细胞血管基质与血管平滑肌细胞的体外相容性

目的:酶-化学除垢剂制备脱细胞血管基质,检测其与平滑肌细胞的相容性,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。方法:实验于2003-12/2005-12在哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心完成。①脱细胞血管基质制备:在37℃水浴振荡条件下,犬总动脉先后用1g/L胰蛋白酶 0.2g/L乙二胺四乙酸钠和1.0%TritonX-100进行脱细胞处理24h和176h,充分漂洗,冷冻干燥后备用。②平滑肌细胞的提取:应用组织块贴壁法体外培养扩增犬隐静脉的平滑肌细胞。③四甲基偶氮唑盐法测定脱细胞血管基质浸提液对平滑肌细胞的毒性:设浸提原液、75%、50%和25%浸提液组,阴性对照组(DMEM 体积分数为0.1的胎牛血清培养液)。以阴性对照组的吸光度作为100%细胞增殖率,增殖百分率(P%)=犤实验组A值/阴性对照组A值犦×100%,按ISO和医学生物材料标准评定材料毒性。④急性毒性试验:取成年大鼠8只,将备用脱细胞血管基质研磨成粉末,生理盐水配成2g/L的混悬液,无菌条件下向大鼠腹腔内注入1mL脱细胞血管基质混悬液,观察72h,记录动物有无死亡及不良反应。⑤亚急性毒性试验:取成年大鼠12只,随机分成2组。实验组用脱细胞血管基质混悬液灌胃,剂量为500mg/kg质量,隔日1次,共10次;对照组给等量生理盐水灌胃。实验期间观察记录体质量变化及动物活动情况。21d取血检查血常规。⑥溶血试验:取抗凝兔血8mL,加入生理盐水10mL,稀释备用。取脱细胞血管基质粉末,加生理盐水中,再加入稀释兔血离心后取上清测定545nm处的吸光度。阴性对照为生理盐水10mL加入稀释兔血;阳性对照为蒸馏水加入稀释兔血。溶血率=犤(试验材料的吸光度-阴性对照的吸光度)/(阳性对照的吸光度-阴性对照的吸光度)犦×100%。⑦凝血试验:血库健康献血员新鲜血浆,用自动血液凝固测定仪进行凝血酶原凝固试验、测定部分凝血活酶凝固时间、凝血酶凝固时间和纤维蛋白原。取血浆2mL加入脱细胞血管基质粉100mg,混合后再测定上述指标。结果:①酶-化学除垢剂能使犬总动脉细胞几乎完全脱落,使基质纤维的三维结构变得疏松。苏木精-伊红、胶原染色和弹力纤维染色显示脱细胞血管基质无细胞残留,主要成分为胶原和弹力纤维。②动物实验表明材料无急性、亚急性毒性。体外实验脱细胞血管基质的溶血率为1.6%,符合医用生物材料生物性能测试所提出的溶血率<5%标准。材料混合前后,血浆中凝血酶原凝固试验、部分凝血活酶时间、凝血酶凝固时间和纤维蛋白原4项指标检测结果无明显变化,说明材料不引起凝血功能的改变。③四甲基偶氮唑盐显示75%脱细胞血管基质浸提液培养平滑肌细胞1,3和5d后,细胞增殖率均大于95%,材料毒性为0或1级。结论:TritonX-100和胰蛋白酶制备的脱细胞基质具有良好的生物相容性,能与异体犬平滑肌细胞结合到一起,并在体外生成血管移植物。     

血管组织工程中单根主动脉培养的内皮细胞和平滑肌细胞形态学和生长增殖

目的:探索体外培养及扩增同一来源内皮细胞和平滑肌细胞的有效方法,为研究内皮细胞和平滑肌细胞相互关系和体外构建组织工程血管提供理论和实践基础。方法:在体外用酶消化法和组织块贴壁法分别建立内皮细胞和平滑肌细胞的原代,并应用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸钠传代培养。应用光镜、透射电镜和细胞计数对内皮细胞和平附肌细胞的形态和增殖进行研究。结果:酶消化法和植块培养法可以有效的建立起内皮细胞和平滑肌细胞的原代。讨论:内皮细胞和平滑肌细胞作为血管构成的基本细胞,对于它们的形态学、体外培养和扩增以及相互关系的研究具有重要的意义。     

软骨微粒脱细胞基质微载体的制备及其特性研究

目的：制备以软骨微粒脱细胞基质为原料的微载体，为体外大量培养软骨细胞提供实验依据。方法：利用胰蛋白酶等试剂制备直径为0．100∽0．154mm的软骨微粒脱细胞基质并寻找胰蛋白酶的最佳含量及时间。取绵羊的新鲜膝、肘关节软骨600g，随机分为5组，每组8例，用不同含量的胰蛋白酶作用2∽36h。标本进行大体观察，苏木精-伊红、胶原染色，光镜及扫描电镜观察，密度、含水量测定。结果：微粒软骨脱细胞基质微载体无抗原性成分存在，主要含有胶原，氨基葡聚糖等混合细胞外基质成分。微粒呈不规则形，表面粗糙。软骨微粒脱细胞基质干重密度为0．6547g／mL，湿重密度为1.0627g／mL，含水量为72％。胰蛋白酶的最佳含量为0．25g／L，最适作用时间为(18．3&;#177;1．6)h。结论：以软骨微粒为原料的微载体具有天然细胞外基质成分，是一种体外培养软骨细胞的良好载体。     

纤维蛋白胶塑形、异体微粒软骨脱细胞基质支架的人工软骨研究

目的：利用软骨微粒脱细胞基质这种新型支架材料及纤维蛋白胶，体外构建可塑形及具有良好生物相容性的组织工程化软骨。方法：制备绵羊关节软骨微粒脱细胞基质并与体外扩增的异体关节软骨细胞及纤维蛋白胶混合，塑成圆柱形，体外培养。结果：软骨微粒脱细胞基质及纤维蛋白胶与异体软骨细胞有良好的生物相容性，软骨细胞生长和分泌功能良好，塑成的复合物具有一定的硬度和弹性。结论：塑成的圆柱形软骨细胞一异体软骨微粒脱细胞基质—纤维蛋白胶复合物可于体外形成软骨样组织，可进一步应用于体内修复关节软骨缺损。     

骨髓基质成骨细胞复合支架材料构建组织工程性肌骨瓣的实验研究

目的探索用羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)的支架材料与成骨细胞复合构成组织工程性肌骨瓣修复骨缺损的能力.方法自2004年12月至2005年5月,于新西兰大耳白兔髂后上棘抽取骨髓基质干细胞并诱导分化为成骨细胞,然后与HA/TCP结合,共培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况,最后将复合物埋入兔的背阔肌下构成组织工程性肌骨瓣.术后6周进行大体解剖观察,HE染色,研究组织工程性肌骨瓣的生长情况.结果扫描电镜显示支架材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好的增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长,植入体内6周后取材见内植物有新骨形成,多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构.结论骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞,此种组织工程性肌骨瓣生长良好,可成功构建组织工程化骨.     

小隐静脉腓肠神经营养皮瓣在足踝创面的临床应用

足跟和踝关节外伤所致软组织缺损并骨外露，以及烧伤所致踝关节瘢痕疙瘩。在临床卜并不少见。损伤多发生在承重、需要保护性感觉和活动量大的部位，是临床修复的难题之一。1999年～2004年，我科应用小隐静脉腓肠神经营养皮瓣修复踝关节及足跟软组织缺损并骨外露或烧伤后瘢痕9例，疗效满意。报告如下。