共表达HIV-1与IL-6核酸疫苗质粒诱导小鼠免疫原性的研究

目前我国ＡＩＤＳ的流行已进入快速增长期 ,因此应用现代生物技术研制新型ＡＩＤＳ疫苗 ,改进早期开发疫苗的缺陷 ,提高其质量是当前的迫切任务。本研究利用分子生物学方法在真核表达载体基础上构建ＨＩＶ结构基因与细胞因子ＩＬ 6基因共表达重组质粒作为核酸疫苗 ,进行小鼠免疫试验 ,探讨核酸疫苗对机体细胞免疫反应能力及细胞因子ＩＬ 6作为免疫佐剂的效果。构建表达中国流行株ＨＩＶ 1Ｂ亚型ｇｐ12 0基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰ及共表达中国流行株ＨＩＶ 1Ｂ亚型ｇｐ12 0基因与ＩＬ 6基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰＩＬ 6 ,检测其在哺乳动物细胞…     

HIV-2 DNA疫苗免疫小鼠的免疫反应观察

目的：用构建的HIV－2外膜蛋白gp105和核心蛋白gag基因的DNA疫苗免疫小鼠，评价其免疫效果。方法：将HIV－2型gp 105和gag基因克隆到表达载体pIRES1neo中，构建重组DNA疫苗质粒。间接免疫荧光试验证明，构建的DNA疫苗在真核细胞中表达了gp105或／和gag.构建的疫苗免疫小鼠后，用流式细胞仪测定CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞亚类数，并用HIV－2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV－2抗体水平。结果：构建了3种HIV－2 DNA疫苗pIRES1gag、pIRSE1gp105和pIRES1gag-gp105，转染BHK细胞后均能表达抗原蛋白，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抗HIV－2特异性抗体，其中pIRES1gag-gp105免疫鼠中，淋巴细胞增殖最显著，而pIRES1gp105免疫鼠中HIV－2特异性抗体水平最高。结论：构建的DNA疫苗均能诱导机体产生免疫反应，其中pIRES1gp105诱导的体液免疫应答最显著，而pIRES1gag-gp105 诱导的细胞免疫响应最显著。     

共表达HIV—1CN与IL—2基因产物免疫鼠T淋巴细胞亚群的研究

目的：研究细胞因子在机体免疫应答过程中的免疫佐剂效应。方法：以表达中国流行株ＨＩＶ－１ｇａｇ－ｇｐ１２０基因的核酸疫苗质粒ｐｃＤＮＡＧＰ及共表达中国流行株ＨＩＶ－ｌｇａｇ－ｇｐ１２０基因与ＩＩ－２基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰＨ－２银川市Ｂａｌｂ／ｃ鼠,用流式细胞仪测定１００００个免疫鼠脾淋巴细胞中ＣＤ４＾＋,ＣＤ８Ｔ细胞数及ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值。结果：ｐＧＩＬ－２与ｐｃＤＮＡＧＰ比较,ｐＧＩＬ－２免疫鼠ＣＤ＾４和ＣＤ＾８Ｔ细胞数明显提高。结论：在机体的免疫应答过程中,细胞因子ＩＬ－２能很好地发挥免疫佐剂的作用。     

人前列腺特异性抗原基因重组表达载体pPICZaC-m PSA的构建和表达

目的在毕赤酵母细胞中表达PSA，为临床的检测和治疗提供材料。方法经KT—PCR获得PSA全长cDNA并测序。将编码成熟PSA237氨基酸的cDNA序列插入毕赤酵母表达载体pPICZα—C，该栽体含有AOXl启动子和a-factor信号肽序列，构建表达载体体pPICZαC—mPSA。甲醇诱导X33细胞表达rPSA，ELASA试剂盒筛选高表达rPSA的细胞株。结果获得了人PSA全长序列，构建了表达栽体pPICZα-mPSA。获得了高表达rPSA的酵母X33细胞株。表达产量为1．2mg／L。结论建立了重组人前列腺特异性抗原的毕赤酵母表达体系。规族化的生产有助于PSA的生物学特性的研究和临床检测和治疗的应用．     

人卵GST-ZP3融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫原性的检测

目的:在大肠杆菌中表达人卵透明带3(Human zona pellucida3,HuZP3)蛋白并对其进行纯化。方法:将HuZP3基因的核心片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,经过酶切和序列分析后,用重组质粒转化E.coli BL21,经IPTG诱导产生GST-HuZP3融合蛋白并通过Glutathione Sepharose 4B纯化。以纯化的融合蛋白免疫纯系Balb/C小鼠制备抗血清。抗血清的效价采用ELISA检测。结果:成功地构建GST-HuZP3融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中高效表达特异性的GST-HuZP3融合蛋白。以该融合蛋白免疫小鼠获得高效价抗GST-HuZP3抗血清,且该抗血清可识别大肠杆菌表达的重组ZP3。结论:获得高表达的GST-HuZP3融合蛋白并证实其具有良好的免疫原性,可作为抗原研制开发检测不孕妇女体内是否存在抗自身ZP3抗体的诊断试剂盒。     

人卵透明带重组融合基因及其表达载体的构建

目的构建人卵透明带蛋白3（zona pelludda 3，ZP3）／GST蛋白融合基因原核表达载体。方法利用PCR法扩增出去N端的信号肽和C端的跨膜区huZP3成熟蛋白编码基因。先将其克隆到pGEM-T载体，进行序列测定和分析，然后将huZP3核心DNA片断克隆入GST蛋白融合原核表达载体pGEX4T-1内。结果获得一个核苷酸长度约为1000bp的基因，与GenBank（NCBI：M60504）公布的ZP3基因序列有99％的同源性。DNA序列分析发现。有一个氨基酸出现变异。酶切鉴定后证明ZP3基因完整插入GST融合蛋白原核表达载体pGEX4T-1中。结论成功构建出含ZP3基因的GST融合蛋白原核表达载体。     

免疫炎性因子过度表达在脑性瘫痪发病机制中的作用

目的探讨免疫炎性因子水平与脑性瘫痪发病机制的关系。方法运用ELISA法检测31名脑瘫患儿和20名健康儿童及37名脑瘫高危因素新生儿（新生儿病例组）和20名正常新生儿的血清肿瘤坏死因子-α（TNF—α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平。结果脑瘫患儿和脑瘫高危因素新生儿的血清TNF-α和IL-6水平均高于健康儿童和正常新生儿（P〈0.05）；脑瘫患儿血清TNF-α水平高于脑瘫高危因素新生儿（P〈0.05），IL-6水平两组间无显著性差异（P〉0．05）。结论免疫炎性因子过度表达在脑性瘫痪的发病机制中发挥重要作用，高水平的免疫炎性因子可能是脑瘫发病的一个独立危险因素。     

运用益气方调节化疗所致红细胞减少症的作用机理研究

目的:研究中药制剂益气方对环磷酰胺(CY)化疗小鼠红细胞减少症的治疗作用,筛选益气方最佳用药剂量。方法:50只ICR小鼠随机分为模型组、正常对照组、益气方高剂量组、中剂量组、低剂量组。各治疗组小鼠分别灌胃给药,正常对照组与模型组小鼠灌服等容量生理盐水,连续15 d。从第8天起模型组与各治疗组小鼠腹腔注射环磷酰胺80mg/kg,连续3 d,正常对照组小鼠注射等体积生理盐水。检测各组小鼠红细胞膜C3b受体花环率、免疫复合物花环率及红细胞、血红蛋白、血清红细胞集落刺激因子水平,观察益气方对CY化疗小鼠红细胞减少症的治疗作用。结果:①与正常对照组比较,其余各组小鼠体重降低。②与模型组比较,益气方各组小鼠血液中红细胞、血红蛋白含量增加,红细胞膜上C3b受体显著升高,免疫复合物花环率明显降低,红细胞集落刺激因子浓度升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:益气方可改善化疗所致小鼠红细胞减少症,以益气方中剂量治疗组疗效最佳。