ACT1-qPCR定量分析弓形虫内参引物的筛选与鉴定

目的运用PCR对刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH、PRU、VEG株速殖子和HFF、Vero细胞系以及SPF级昆明鼠脑组织所得DNA样品进行特异性扩增,鉴定并筛选出适合用作弓形虫实时荧光定量PCR(q PCR)分析的内参引物。方法体外培养并无菌收集HFF、Vero细胞系及弓形虫RH、PRU、VEG株速殖子,SPF级昆明鼠经颈椎脱臼处死无菌采集脑组织,并提取基因组DNA。合成弓形虫MIC6基因(Toxo DB:TGME49_218520)特异性引物P1/P2,经PCR扩增鉴定所得样品是否含有弓形虫DNA成分,设空白对照。依照Toxo DB数据库弓形虫ACT1基因参考序列(Toxo DB:TGME49_209030)设计引物,经NCBI Primer-BLAST比对分析后进行合成特异性引物P3/P4、P5/P6、P7/P8、P9/P10和P11/P12,预期片段大小均为121 bp。以弓形虫RH DNA为模板,采用梯度PCR优化ACT1基因内参引物的退火温度。运用已优化条件对待检DNA样品进行PCR特异性扩增和琼脂糖凝胶电泳分析,鉴定出适合用于弓形虫q PCR定量分析的内参引物。结果 PCR扩增弓形虫RH、PRU和VEG株DNA MIC6基因时均出现一条长度约为1 050 bp的条带,且空白对照和其他样品无此条带,与预期结果一致,表明所得DNA样品可用。优化退火温度时发现,除P7/P8外其他引物均不受退火温度影响,56℃适合用于PCR或q PCR扩增ACT1基因目的片段的退火温度。以56℃为退火温度对待检DNA进行检测时发现,扩增弓形虫阳性样品时所有引物均能产生1条大小约为121 bp的条带,空白对照无此条带,与预期结果一致。此外,引物P7/P8、P9/P10扩增Vero细胞系和引物P3/P4、P5/P6、P9/P10扩增昆明鼠脑组织DNA样品时均有杂带出现,且有杂带大小约为121 bp;引物P11/P12扩增弓形虫阴性DNA样品时均无杂带出现。结论引物P11(5′-TCGGTGACGAAGCCCAAA-3′)和P12(5′-AGTTCGTTGTAGAAGGTGTGA-3′)适合分别用作弓形虫q PCR定量分析时扩增ACT1靶基因的上游和下游引物。     

医学研究生学位论文的发展趋势与跨学科研究特点分析——以病原生物学交叉神经生物学为例

目的：分析我国医学研究生学位论文发展趋势和跨学科研究特点,为医学研究生培养及医学研究生创新和实践能力提升提供参考。方法：用中国知网“学科专业名称”模块检索2003—2022年病原生物学和神经生物学专业研究生学位论文,以论文数据库、下载和被引、学科与基金标注为对象,加以授予年度和学位类型进行整理与统计分析。结果：检索到符合条件的学位论文共7 909篇,硕士学位论文多于博士学位论文,病原生物学论文多于神经生物学论文;下载和被引次数博士论文较硕士论文多且变化大,上浮明显时博士论文先于硕士论文、病原生物学论文先于神经生物学论文发生变化;被引明显偏低,且0次被引现象普遍存在;与神经生物学论文比,病原生物学论文学科交叉保持上升态势且受硕士论文跨学科选题影响更大;基金标注数病原生物学论文多于神经生物学论文,但标注率仅病原生物学博士论文较硕士论文升高。结论：病原生物学和神经生物学专业的研究生学位论文被引次数均明显偏低,但进行学位论文研究时大多偏爱跨学科选题,尤其是病原生物学相关的博士学位论文更注重跨学科研究。     

儿童及青少年肥胖的干预

近20年来,儿童及青少年肥胖的发生率在世界范围内均明显升高,肥胖相关的危害更为引人瞩目.目前公认的儿童及青少年肥胖干预方法主要通过调整生活方式,包括饮食控制、增加运动、心理认知行为干预等.大量的证据表明,上述措施有确切的短期减重效果,然而长期效果尚未明确.即使彻底调整生活方式,仍有一部分人群减重效果不理想,因此,学者们致力于开辟有效安全的新途径,包括药物、手术,以及肥胖疫苗,以期控制儿童、青少年肥胖及其相关疾病的发生.     

糖尿病肾病的诊断与评估

糖尿病肾病（diabetic nephropathy）是糖尿病最常见的慢性血管并发症之一,大约有20％～40％的糖尿病患者会出现糖尿病肾病,占慢性肾脏疾病的25％-50％,是引起终末期肾病（end—stage renal disease）的主要原因。糖尿病肾病在1型及2型糖尿病患者均可发生,以出现持续微量白蛋白尿及不同程度肾功能损害为主要临床表现,并且以出现蛋白尿作为诊断的金标准。     

冰冻对弓形虫GT1速殖子体外感染力的影响北大核心CSCD

目的探讨冰冻不同时间对弓形虫GT1速殖子体外感染力的影响。方法用HFF细胞传代GT1速殖子3次,刮净培养物,取2.0 mL充分破碎后计数。将剩余培养物中速殖子调至10000个/mL,分装至1.5 mL离心管(100μL/管),并随机分成3组。上述样品放置于4℃,分别在0、12、24、36、48、60 h时取出样品,5管/组,再置于4℃、-20℃或-80℃保存。待首批冰冻72 h时取出全部样品,于室温(约22℃)完全融化后全量加入预先铺有HFF细胞的6孔培养板内,继续培养。于10倍物镜下随机选取3个视野,观察并记录感染3、5、7 d时的噬斑形成数,若噬斑总数为0,则进行全视野扫描检测。盲传感染7 d仍未检测到噬斑形成的培养物,用全视野扫描盲传7 d时各瓶内的噬斑。结果随机观察3个视野,复苏前4℃放置的GT1速殖子仅在感染3 d时形成的噬斑清晰可辨,且各孔间无明显不同;-20℃和-80℃冰冻均能减弱GT1速殖子的体外感染力。盲传后观察,经-20℃和-80℃冰冻24 h的GT1速殖子仍能在感染HFF细胞7 d时形成噬斑,且-80℃较-20℃冰冻组形成的噬斑数更多;冰冻36 h及以上的GT1速殖子未形成噬斑。结论以1000个速殖子/孔的剂量感染6孔培养板内的HFF细胞,4℃放置不超过72 h对GT1速殖子体外毒力无显著影响,-20℃或-80℃冰冻36 h及以上能减弱弓形虫GT1速殖子体外感染力。     

地方医学院校开展健康科普教育的实践与探索

健康科普教育对疾病预防和健康促进具有重大意义,因此日益受到社会的关注。地方医学院校开展健康科普教育具有得天独厚的优势,本研究以桂林医学院为例,对地方医学院校加强健康科普教育持续性和有效性的路径进行初步探讨。地方医学院校应通过提升健康素养理念,建立和完善科普专家库,统筹健康科普教育传播平台,深化科普教育内容等措施,提高健康科普教育的长效性,为健康中国的建设做出贡献。     

原发性肝癌患者不同糖代谢异常状态的临床分析

目的探讨原发性肝癌（HCC）患者在不同糖代谢异常状态下的临床特点。方法回顾性分析2003年1月至2007年12月在汕头大学第一、二附属医院住院的698例HCC患者不同糖代谢状态的临床资料。根据糖代谢状态将患者分为4组：糖代谢正常组（472例）、低血糖组（20例）、糖尿病前期组（76例）和糖尿病组（130例）。用方差分析比较各组年龄差异，Kruskal-WallisH检验分析各组血脂代谢等实验室检查的差异。结果纳入本研究698例HCC患者中男性563例，女性135例，平均年龄（55±13）岁。糖尿病前期及糖尿病组患者年龄均高于糖代谢正常组，差异均有统计学意义[分别为（58±13）、（60±13）和（53±15）岁，均P〈0．05]；低血糖症组年龄[（51±14）岁]小于糖尿病组，差异有统计学意义（P〈0．05）。HCC患者糖尿病状态下总胆固醇（TC）水平较糖代谢正常组低，差异有统计学意义[（4．7±1．7）比（4．0±1．7）mmol／L，t=2．266，P〈0．05]。结论HCC合并糖尿病较糖代谢正常组和低血糖症组的年龄大，且HCC合并糖尿病组患者Tc水平较糖代谢正常组低。     

刚地弓形虫VEG株速殖子感染宿主细胞最优接种比的曲线拟合分析

目的 探讨不同浓度梯度的刚地弓形虫速殖子体外感染对侵蚀宿主细胞能力的影响及二者之间的最优接种比。方法 依照耗材规格和建议上液量,将宿主Vero细胞依次铺入96孔、24孔、12孔、6孔细胞板和25T培养瓶后培养12 h;常规纯化和计数VEG株速殖子并倍比稀释出8个梯度,分别用来感染上述细胞,使首个感染量与宿主细胞铺入数相等;继续培养4 d后全量收集培养物,经DNA提取和Real-time PCR定量检测,以7种回归模型对所得速殖子数的均值进行拟合分析(n=3),选出最佳函数类型并求极值,以此明确弓形虫感染与宿主细胞间的接种关系。结果 Real-time PCR定量结果显示,VEG株速殖子最初感染量及所用耗材培养规格对弓形虫侵蚀宿主细胞的能力均有影响,并且四次多项式函数为弓形虫感染宿主细胞4 d时的最佳拟合曲线方程;经求导和求极值发现,同种耗材培养条件下,弓形虫VEG株速殖子感染数与宿主Vero细胞间存在最优接种比例关系。结论 96孔、24孔、12孔、6孔细胞板和25T培养瓶内弓形虫速殖子与宿主细胞间的接种比例依次为1/7.20、1/5.32、1/4.53、1/4.03和1/43.02。