弓形虫及弓形虫病研究进展

<正> 1前言 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)致成弓形虫病(Toxoplasmosis),是动物源性疾病。感染阶段主要是卵囊和包囊,蝇类携带是重要的传播方式之一。该病呈世界性分布,在我国自从1964年发现第一例患者后,陆续发现我国分布很广、感染率很高,逐渐重视起来,因它危害胎儿的正常发育,这关系着优生优育、计划生育的基本国策。现将病原体、致病、诊断、流行、防治及研究进展简叙之。     

弓形虫P30基因非融合蛋白表达的研究

目的构建弓形虫主要表面抗原P30基因的原核表达载体并在E.coli中进行表达.方法采用定向克隆的方法,将PCR扩增得到的P30片段,插入原核表达质粒pBV220上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,于氨苄LB培养平板上筛选阳性克隆,经过酶切及PCR扩增鉴定重组子.将含阳性重组子pBV220-P30的工程菌经温度诱导表达,SDS-PAGE电泳及免疫印迹分析.结果成功构建了pBV2200-P300重组质粒;SDS-PAGE电泳及Western-blot显示表达P30非融合蛋白的分子量为29kD,且能被弓形虫高免鼠血清识别.结论从弓形虫基因组DNA中获取P30基因,并成功构建了pBV220-P30重组质粒,诱导表达了P30非融合蛋白.对弓形虫病基因疫苗研制奠定了基础.     

弓形虫致密颗粒蛋白GRA2真核表达质粒的构建与体外表达

目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA2的真核表达重组质粒。方法设计合成GRA2引物，运用PCR方法扩增其基因片段，经克隆至pMDl8-T载体后，亚克隆至真核表达质粒pcDNA3．1（-）而构建重组表达质粒pcDNA3．1-GRA2。脂质体法将构建的重组质粒转染HFF细胞，RT—PCR法检测转染细胞中GRA2的表达情况。结果PCR扩增GRA2基因序列正确，构建的重组表达质粒pcDNA3．1-GRA2经PCR、EcoRⅠ／HindⅢ双酶切和测序鉴定正确；转染GRA2基因的细胞，RT—PCR可见目的条带。结论成功获得真核表达重组质粒pcDNA3．1-GRA2，为进一步研究弓形虫疫苗的免疫保护性奠定基础。     

藏胞牛带绦虫感染的诊治研究

藏胞牛带绦虫感染的诊治研究李瑛禹卉古钦民韩玉敏代高升黄勇何深一郭淑玲袁方曙山东医科大学寄生虫学教研室（济南２５００１２）牛带绦虫（Ｔａｅｎｉａｓａｇｉｎａｔａ）又称牛肉绦虫、肥胖带绦虫或无钩绦虫。在我国古医书中称为白虫或寸白虫，呈世界性分布，我国２０...     

含弓形虫复合抗原基因的真核表达质粒在哺乳动物细胞中的表达

目的研究弓形虫复合抗原真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B在哺乳动物细胞中的表达情况。方法利用脂质体介导的转染技术,将真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B和空载体pcDNA3.1分别转染He-la细胞,400μg/mlG418加压筛选和200μg/mlG418维持筛选,获得稳定转染的Hela细胞。采用SDS-PAGE和West-ern-blot方法对复合基因P30-P22-CTXA2/B的表达产物进行鉴定。结果SDS-PAGE结果显示,重组质粒转染Hela细胞后的表达产物分子质量单位为64ku,Western-blot显示此蛋白条带能被抗P30抗体识别。结论构建的真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B能在哺乳动物细胞中成功表达插入基因所编码的融合蛋白,为进一步动物实验提供了实验依据。     

以溶剂沉积法手工制备马来酸依那普利胶囊

目的：提高手工制备马来酸依那普利胶囊的含量均匀度和溶出度。方法：将以溶剂沉积技术手工制备的胶囊与乳钵研磨后递加稀释法手工制备的胶囊进行含量均匀度，溶出度测定比较和显微镜下晶体大小观察比较，并观察两者的流动性。结果：采用溶剂沉积技术手工制备的马来酸依那普利胶囊的含量均匀度及其体外溶出度得到提高，马来酸依那普利晶体明显减少。结论：采用溶剂沉积技术将马来酸依那普利溶于乙醇中，喷洒于溶粉表面，干燥后增加了药物的表面积，从而提高了含量均匀度和溶出度。     

弓形虫表面抗原P30、P22与霍乱毒素A2／B复合基因真核表达质粒的构建

目的选择弓形虫 RH 株主要表面抗原 P30、P22的有效基因片段和霍乱毒素 A_2/B 亚基共同构建在同一真核表达载体 pcDNA3.1(-)上,并保证其连接方向和开放读码框的正确。方法用PCR 技术分别从弓形虫 RH 株基因组 DNA 和 pUAB024-CTXA_2/B 质粒中扩增编码 P30、P22基因片段和 CTXA_2/B,定向重组入 pUC18克隆载体,然后酶切释放 P30-P22-CTXA_2/B 复合基因片段,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,再经含氨苄青霉素的 LB 培养基筛选、酶切及测序鉴定。结果酶切产物经电泳显示条带清晰,P30、P22和 CTXA_2/B 基因片段的泳动位置分别在786bp、492bp、512bp 的位置,与预计结果一致;测序结果表明插入的基因片段方向及序列均正确。结论成功地构建了真核表达重组质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B,保证了三个基因连接方向,序列及开放读码框的正确,为下一步融合蛋白 P30-P22-CTXA_2/B 在哺乳动物细胞中的表达及动物实验奠定了基础。     

贝那普利对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1和Smad4表达的影响

目的:研究贝那普利对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1和Smad4表达的影响.方法:用链脲佐菌素诱导的Wistar糖尿病大鼠为模型,随机分为N组、DM组和DM-B组3组,于给药8周后处死,检测各组大鼠的平均动脉压、血糖、肾功能指标及24小时尿蛋白.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1及Smad4 mRNA表达水平.采用免疫组织化学方法检测TGF-β1及Smad4蛋白定位的表达,并用彩色病理图像分析系统进行定量分析.结果:与对照组相比,糖尿病大鼠平均动脉压、血糖、肾功能指标及24小时尿蛋白排出均增加;肾小球细胞外基质(ECM)明显增多、系膜区扩大(PAS染色);TGF-β1及Smad4 mRNA表达上调;TGF-β1及Smad4蛋白的表达明显增加.贝那普利治疗后上述指标明显减轻(P＜0.01).结论:TGF-β/Smad通路在糖尿病肾病时是激活的,贝那普利治疗可延缓肾脏损害.     

贝那普利对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的探讨贝那普利(benazepril)对糖尿病大鼠肾脏病变的保护机制。方法采用健康雄性Wister大鼠42只,随机分为正常组、糖尿病组和贝那普利治疗组。实验结束后,取大鼠的尿、血、肾组织标本,行生物化学和聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)检测。结果大鼠体质量、肾质量/体质量、血压、血糖,24h尿蛋白定量、血肌酐,尿素氮各组间均有统计学意义(P<0.05);肾组织降钙素基因相关肽(calcitoningene relatedpeptide,CGRP)和内皮素(endothelin,ET)mRNA表达均有统计学意义(P<0.01)。结论贝那普利通过抑制血管紧张素转化酶(angiotensin convertingenzyme,ACE)而减少ET1分泌,促进CGRP合成,从而减轻CGRP与ET1的失衡,对大鼠糖尿病肾脏病变有明确的保护作用。     

碳粒免疫试验(CIA)检测实验家兔弓形体抗体的研究

碳粒免疫试验(Carbon immunoassay——简称CIA)是一种直接的血清学方法。本文首次报道在国内应用CIA法对实验家兔弓形体抗体进行检测。共检测25只实验弓形体感染家兔的血清(55份),24只实验弓形体感染家兔的血滴(53份),两者弓形体抗体阳性率均为100％,无假阴性。血清抗体滴度高者可达1:5120,血滴抗体滴度高者可达1:64;前者几何平均滴度为1527,后者几何平均滴度为11.27。用正常家兔作对照,共检测正常家兔血清39份,正常家兔滤纸干血滴16份,结果均为阴性,未发现假阳性。还应用CIA法检测了10只实验家兔弓形体感染1周的血清和血滴,其弓形体抗体滴度均已能检出,而用酶联金葡菌A蛋白酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA法)检测,10只兔中有1只尚未能检测出,提示前法似较后法敏感。另用同一份阳性和阴性血清分别进行PPA-ELISA法检测,两种方法的阳性符合率为98～100％,阴性符合率为100％。本文认为,CIA法是一种比较简便、经济、快速、灵敏的弓形体抗体检测方法,有推广应用的价值。