紫杉醇和微小RNA对非小细胞肺癌的协同抑制作用

目的探讨表皮生长因子受体抑制性微小RNA和紫杉醇在非小细胞肺癌中的协抑制效应。方法人非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827进行体外培养过程中,将miR-545前体转染入细胞,转染48 h后,以不同浓度的紫杉醇处理细胞72 h,以MTT法检测细胞生长抑制。结果紫杉醇对A549和HCC827非小细胞肺癌细胞的增殖均表现出显著的抑制作用。在0.1⁵.0 nmol/L的剂量区间内,抑制效应随剂量的增加表现出近乎线性的同步增加。miR-545对紫杉醇的细胞生长抑制作用具有增强效应,在HCC827中的增效(IC50减少41.6%)高于A549(IC50减少27.3%)。结论在非小细胞肺癌中,miR-545对紫杉醇生长抑制作用具有协同加强效应,为改善非小细胞肺癌化疗的耐药问题提供新的探索途径。     

微小RNA在心肌细胞氧化应激中的特征性变化

目的研究微小RNA(microRNA,简称miRNA)与心肌细胞氧化应激的关系,作为探讨缺血再灌注损伤分子病理生理的基础。方法培养中的H9c2(2-1)心肌细胞以过氧化氢处理产生氧化应激,然后收集心肌细胞提取miRNA。选取miR-210和miR-24进行逆转录,再进行定量实时聚合酶链式反应。结果心肌细胞以过氧化氢处理2h后,与对照相比,miR-210显著降低至对照水平的47.07%(P=0.013),而miR-24的水平则大幅升高,达到了对照水平的344.48%(P=0.002)。结论 miRNA与心肌细胞氧化应激反应具有明显的相关,提示miRNA可能在心脏缺血再灌注损伤的病理损害和创伤修复中具有重要作用。     

血管紧张素转化酶的微小RNA调控及其在冠心病治疗中的应用

目的研究微小RNA对血管紧张素转化酶(ACE)基因细胞表达水平的调节及其在冠心病治疗中的意义。方法根据"种"序列原理预测出对ACE基因具有调节作用的微小RNA,基于种系稳定性进行进一步筛选。调节ACE的候选微小RNA在培养中的大鼠心肌细胞中进行增强和抑制处理;同时,利用蛋白印迹杂交实验观察ACE基因蛋白表达水平的变化,以此验证候选微小RNA和ACE的关系。结果 miR-27a和miR-27b被预测为对ACE具有调节作用的最佳候选微小RNA,因此对其实施实验验证。以miR-27a和27b增强处理心肌细胞48 h后分别使ACE蛋白水平降低了30.32%(P=0.027)和36.35%(P=0.008);同时,以miR-27a和27b拮抗剂处理心肌细胞48 h分别导致ACE蛋白水平升高了42.06%(P=0.026)和65.39%(P=0.001)。结论 miR-27a和miR-27b对心肌细胞ACE水平具有显著的调节作用,并与之呈现负相关特性。提示miR-27a和miR-27b在冠心病治疗中具有潜在的运用价值。     

微小RNA对心肌细胞C反应蛋白功能水平的调节

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)基因调节机制对冠心病标志性分子C反应蛋白(CRP)的调节。方法以大鼠心肌细胞H9c2(2-1)为实验对象,在培养中进行miR312的增强和抑制处理:加入Pre-miR-132作为miR-132增强剂,Pre-miR miRNA前体分子阴性对照1号作为增强处理的对照;加入Anti-miR-132作为miRNA-132抑制剂,Anti-miR miRNA抑制剂阴性对照1号作为抑制处理的对照。用iFect转染后培养48 h,收集细胞进行CRP的蛋白免疫印迹杂交。结果大鼠心肌细胞株H9c2(2-1)在增强剂Pre-miR-132处理48 h后,CRP蛋白水平明显下降(t-检验,P=0.013 21);与此同时,抑制剂Anti-miR-132处理48 h后,CRP蛋白水平出现了明显上升(t-检验,P=0.012 40)。结论微小RNA miR-132对大鼠心肌细胞CRP功能水平具有显著的调节作用,二者呈负相关关系。     

ERK信号传导调节脑缺血再灌注中脑源性神经营养因子介导的神经保护作用

目的研究大脑缺血再灌注中脑源性神经营养因子(BPNF)神经保护效应的机制以及细胞外调节激酶信号通路在其中的作用。方法 SD大鼠被随机分为A、B、C三组,每组6只,所有的大鼠均经历大脑中动脉阻断诱发的脑局灶性缺血再灌注过程,此过程持续45 min。B组给予BDNF以产生神经保护,C组采用选择性Raf-1信号分子抑制剂Bay 43-9006抑制细胞外调节激酶信号通路。脑损伤用甲酚紫染色加图像分析评估,细胞外调节激酶1和2的磷酸化水平采用免疫印迹杂交测定。结果经过缺血再灌注过程,额叶脑组织的损伤比例为(16.48±5.72)%;在使用BD-NF预处理的情况下,脑组织损伤比例显著降低至(6.32±3.08)%(P=0.039)。使用Raf-1抑制剂之后,细胞外调节激酶的磷酸化水平显著降低,包括细胞外调节激酶1(P=0.0084)和细胞外调节激酶2(P=0.029)。与此同时,BDNF的神经保护效应明显减弱,与对照相比没有显著差异。结论在大鼠脑缺血再灌注中,BDNF可以抵抗损伤,细胞外调节激酶信号通路是BDNF这种抗损伤效应的关键信号调节通路。     

转化生长因子β1在呼吸道感染中的抗炎机理

目的：探索转化生长因子β1（transforming growth factor ?茁1,TGF?茁1）的信号通路与呼吸道感染性炎症反应的关系以及对呼吸系统免疫功能的影响。方法：采用2级符合清洁动物标准的BACB/C小鼠建立铜绿假单胞菌感染模型,以LY364947 （4-[3-（2-嘧啶基）-1氢-吡唑-4-基]-喹啉） 阻断TGF?茁1,在TGF?茁1阻断和非阻断状态下观察感染动物模型的炎症反应以及肺组织的病理变化,同时以Western blot分析细胞因子CD4和CD8含量的变化。结果：阻断TGF?茁1后,小鼠肺组织中p38激酶的磷酸化减至对照组10%以下,实验动物感染模型的炎症有所增强,CD4水平显著升高（P=0.004）,而CD8的水平无显著变化。结论：TGF?茁1在呼吸道感染的炎症反应中具有抑制性调节作用,TGF?茁1阻断可能会使呼吸道感染的免疫调节功能有所增强。     

补充钙剂及维生素D对快速老化小鼠学习记忆能力的影响

目的：观察补充钙剂及维生素D对快速老化小鼠（senescence accelerated mouse,SAM）P8学习记忆能力的影响。方法：3月龄雄性SAMP8,随机分为3组,钙剂（治疗）组、尼莫地平（阳性对照）组、模型（SAMP8）组,每组各9只;另选9只同月龄雄性SAMR1为正常对照组。治疗12周末应用老化度评分比较各组小鼠的老化征象;应用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力。结果：（1）老化度评分显示：钙剂组、尼莫地平组、正常对照组小鼠比模型组小鼠的老化度评分低,差别有统计学意义（P<0.05）,钙剂组、尼莫地平组、正常对照组小鼠的老化度评分之间差别无统计学意义（P >0.05）;（2）学习记忆能力检测结果提示：Morris水迷宫定位航行实验,钙剂组、尼莫地平组与模型组相比逃避潜伏期明显缩短,差异有统计学意义（P<0.05）,与正常对照组相比逃避潜伏期延长,差异有统计学意义（P<0.05）,钙剂组与尼莫地平组相比逃避潜伏期无明显差别（P >0.05）。空间探索实验结果提示钙剂组及尼莫地平组穿越平台次数较模型组增加,差异有统计学意义（P<0.05）,提示钙剂组及尼莫地平组的记忆保持能力较模型组提高。结论：补充钙剂及维生素D可以减轻SAMP8的老化度,并改善SAMP8的学习记忆能力,效果与应用钙通道阻滞剂尼莫地平接近。提示干预钙代谢紊乱能减轻SAMP8的老化度并改善SAMP8的学习记忆能力,钙代谢紊乱可能是SAMP8学习记忆能力下降的病理生理机制之一。     

冠心病候选基因β2肾上腺素能受体基因相关微小核糖核酸let-7i的实验研究

目的:β2肾上腺素能受体(ADRB2)基因是冠心病最重要的候选基因之一,本研究探讨微小核糖核酸(miRNA)对ADRB2基因的调控及其在冠心病中的意义。方法:根据"种子区"原理预测对ADRB2具有调节作用的miRNA,按种系恒定性以及与冠心病的关系程度进一步筛选。对候选miRNA在大鼠心肌细胞H9c2(2-1)中进行增强和抑制处理,验证候选miRNA对ADRB2基因的调控。增强处理为加入相应miRNA的前体分子以提高其功能水平,抑制处理采用经化学修饰的变异体作为竞争性拮抗剂以抑制其活性水平。增强和抑制实验分别以miRNA自身序列随机化所产生的阴性分子作对照。前体或抑制剂经转染导入细胞,48 h后对ADRB2蛋白进行免疫印迹杂交分析。结果:研究结果表明,let-7i是冠心病背景下对ADRB2最具调控意义的miRNA之一。ANOVA统计分析显示,以let-7i增强剂处理心肌细胞48 h后使ADRB2蛋白水平降低了61.83%(P=0.0012),同时,以let-7i拮抗剂处理心肌细胞48 h导致ADRB2蛋白水平升高了48.49%(P=0.0071)。结论:let-7i对心肌细胞ADRB2水平具有显著的调节作用,并与之呈负相关,研究提示ADRB2的miRNA调控机制在冠心病病因学及治疗学中具有重要意义。     

N-ras mutations in 43 Chinese cases of acute myeloid leukemia.

Ｎ－ｒａｓｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎ４３ＣｈｉｎｅｓｅｃａｓｅｓｏｆａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａＧｕｏＷｅｉｚａｏ郭威早，ＴａｎｇＢａｎｇｘｉ唐邦熙，ＸｕＳｕｆｅｎ徐素芬，ＹａｏＹｉｎｄｏｎｇ姚荫东ａｎｄＹｅＤａｘｉｏｎｇ叶大雄Ｄｅｐａｒｔｍ...