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目的采用温孵法构建脂多糖/脂多糖结合蛋白(LPS/LBP)复合物,研究LPS炎症信号通路。方法将LPS与LBP按15︰1、10︰1、5︰1的比例混匀。把LPS/LBP混合物、LBP(浓度分别为200μg/ml、100μg/ml和50μg/ml)、LPS(浓度分别为100μg/ml、50μg/ml)过夜孵育。将孵育后的LPS/LBP混合物、LBP、LPS行凝胶电泳,经考马斯亮蓝染色后将各染色条带切取,行蛋白回收,并测定内毒素。结果凝胶电泳后,LPS/LBP复合物、LBP泳道于相对分子质量52×10~3处可见考马斯亮兰染色的条带。样本中LBP浓度越高、条带染色越浓,LPS泳道对应于相对分子质量52×10~3处无染色条带出现。各浓度比例的LPS/LBP复合物电泳后凝胶条带回收物中均能检测出内毒素。10︰1 LPS/LBP复合物组、15︰1 LPS/LBP复合物组复合物内毒素浓度显著高于5︰1 LPS/LBP复合物组内毒素浓度(P0.05)。10︰1 LPS/LBP复合物组与15︰1 LPS/LBP复合物组内毒素浓度无统计学差异(P0.1)。各浓度LBP组均未检出内毒素,各LPS组内毒素检测也为阴性。结论 LPS︰LBP为10︰1是较为合理的构建LPS/LBP复合物的比例,通过温孵及凝胶电泳可获得纯度较高的LPS/LBP复合物。 相似文献
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