保脾手术治疗脾破裂45例临床体会

目的 总结脾损伤后的保脾手术治疗体会.方法 对实施各种保脾手术45例患者的临床资料进行回顾性分析.结果 45例均经保脾手术治愈.结论 保脾手术是一种治疗多种因素造成脾破裂的方法.     

保脾手术治疗脾撕裂伤45例临床体会

目的探讨脾损伤后的保脾手术治疗体会。方法对1998年1月～2006年4月实施各种保脾手术的45例患者临床资料进行回顾性分析总结。结果本组脾损伤45例均经保脾手术治愈。结论保脾手术是一种可治疗多种因素引起脾损伤的有效方法。     

酵母双杂交技术筛选与RIG-Ⅰ相互作用蛋白

目的:筛选人脾细胞cDNA 文库中与维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)所编码蛋白具有相互作用的蛋白基因.方法:通过聚合酶链反应(PCR),以HEK293T细胞RNA为模板扩增RIG-Ⅰ基因的2CARD结构域部分,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒pGBKT7-RIG-Ⅰ2CARD,转化到酵母细胞AH109感受态中,得到阳性克隆AH109[RIG-Ⅰ2CARD].然后将人脾细胞cDNA文库转化进AH109[RIG-Ⅰ2CARD],在含有X-α-半乳糖(X-α-Ga1)四缺营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,提取质粒后转化DH5α大肠杆菌并经氨苄青霉素抗性筛选,挑取单克隆菌落抽提质粒,并进行测序,再进行生物信息学分析.结果:成功构建酵母诱饵蛋白表达质粒pGBKT7-RIG-Ⅰ2CARD,并能在酵母中表达.筛选出阳性菌落59个,经生物信息学分析,最后从脾细胞cDNA文库中筛选出12个与RIG-Ⅰ2CARD 有相互作用的蛋白基因.结论:成功克隆出RIG-Ⅰ2CARD基因,并从脾细胞cDNA文库中筛选出12种能与RIG-Ⅰ2CARD具有相互作用的蛋白基因.     

线粒体抗病毒信号蛋白MAVS真核表达质粒的构建及表达

目的:构建线粒体抗病毒信号蛋白(mitoehondrial antiviral signaling protein,MAVS)真核表达质粒.方法:从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得MAVS的全长cDNA双链片段.经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆进行测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-MAVS.借助脂质体转染peDNA3/flag-MAVS质粒到HEK293T细胞中,用Westem印迹检测目的蛋白的表达.同时用β干扰素的荧光素酶报告基因(IFN-β-luc)检测MAVS蛋白活性.结果:Western印迹实验证明pcDNA3/flag-MAVS可以在HEK293T细胞中表达MAVS,并且能使IFN-β报告基因活性明显增强.结论:构建了重组质粒peDNA3/flag-MAVS,在细胞中表达MAVS后具有刺激IFN-β转录的生物活性.     

仙鹤草多糖的分离纯化及理化性质研究

目的从中药仙鹤草中提取仙鹤草多糖,并对其理化性质进行研究。方法利用水提醇沉法得粗多糖,并依次经纤维素DE-52柱和Superdex-200凝胶柱色谱进行纯化。采用光谱法和色谱法对其总糖含量、单糖组成、相对分子质量等理化性质进行研究。结果分离纯化的仙鹤草多糖HAPⅢ总糖含量、蛋白含量、糖醛酸含量分别为81%,3.4%,45%,由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、岩藻糖、木糖组成,摩尔比为5.65∶2.67∶2.61∶1.86∶1.12∶1.09∶1。其平均相对分子质量为1.90×105。结论仙鹤草多糖HAPⅢ是一水溶性酸性杂多糖。     

人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选

目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株.方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS.用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况.结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性.结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS.筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台.     

As_2O_3联合FuDR、CAP、THP介入治疗中晚期肝癌的疗效对比及意义

目的分析在中晚期肝癌患者采用三氧化二砷(As_2O_3)联合脱氧氟脲苷(FuDR)、卡铂(CAP)、吡柔比星(THP)介入治疗的临床疗效。方法选取我院2014年10月至2015年10月收治的115例中晚期肝癌患者为研究对象。按随机数字表法分为对照组和观察组,对照组57例行常规肝动脉栓塞化疗(TACE)治疗,观察组58例行As_2O_3联合FuDR、CAP、THP介入治疗。治疗4个月后比较两组患者临床疗效、肝功能及不良反应。结果观察组治疗有效率、获益率分别为48.3%、87.9%,明显高于对照组的29.8%、68.4%,差异有统计学意义(P0.05);观察组治疗后肝功能情况明显优于对照组,差异有统计学意义(P0.05);两组不良反应主要为恶心呕吐、肝功能损伤、骨髓抑制、疼痛、发热,两组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论采用As_2O_3联合FuDR、CAP、THP介入治疗中晚期肝癌,可有效提高临床疗效,无严重不良反应,且治疗后的肝功能情况明显优于单纯使用TACE治疗,是一种治疗中晚期肝癌的较佳选择。