血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及苦碟子注射液的干预研究

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的诱导作用,及苦碟子注射液的干预作用。方法:体外培养HUVECs,用AngⅡ(在10-6mol/LAngⅡ的DMEM培养液中48h)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组和苦碟子注射液组(给予AngⅡ刺激前1h先加用10%苦碟子注射液)。采用CCK-8法检测细胞存活率,以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力;利用Western印迹法检测小凹蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)的表达。结果:与对照组比较,AngⅡ诱导组细胞存活率明显下降,β-gal阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,Cav-1蛋白表达水平明显上调,表明AngⅡ成功诱导了HUVECs衰老,而给予苦碟子注射液干预后上述变化改善。结论:苦碟子注射液可以延缓AngⅡ诱导HUVECs衰老,其作用机制可能与下调Cav-1蛋白表达有关。     

整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中的变化

目的观察整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老中的变化。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组。以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力;利用Western印迹法分析AngⅡ诱导HUVECs 0、12、24、36、48 h的整合素αvβ3表达的时间效应关系。结果与对照组相比,10-6 mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(81.80±0.92)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0～G1,证实细胞衰老;AngⅡ呈时间依赖性上调整合素αvβ3表达。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与上调衰老细胞整合素αvβ3表达有关。     

灵芝多糖对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞衰老的干预研究

目的探讨灵芝多糖保护血管内皮细胞、抑制血管内皮细胞衰老的作用。方法采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立衰老模型,分为对照组、AngⅡ诱导组和灵芝多糖组(给予AngⅡ刺激前1 h先给予100 mg/L灵芝多糖)。采用CCK-8法检测细胞存活率,采用免疫化学染色方法检测衰老相关β-半乳糖苷酶活性,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力。结果与对照组比较,AngⅡ诱导组细胞存活率明显下降,β-半乳糖苷酶阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,表明AngⅡ成功诱导了HUVECs衰老,而给予灵芝多糖干预后上述变化改善。结论灵芝多糖具有抑制内皮细胞衰老、保护血管内皮功能的作用。     

小凹蛋白1在血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中的变化

目的 观察小凹蛋白1 (caveolin-1,Cav-1)在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老中的变化.方法 体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,分为对照组、AngⅡ...     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞衰老的诱导作用及对端粒酶活性的影响*

目的观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endo-thelial cell,HUVECs)衰老的诱导作用及对端粒酶活性的影响。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6mol/L)干预,分为对照组和AngⅡ诱导组。β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力;用聚合酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)检测端粒酶活性。结果与对照组比较,10-6mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(71.10±6.81)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期多停滞于G0/G1期[(84.11±7.92)%],证实细胞衰老;与对照组相比,10-6mol/L AngⅡ诱导组端粒酶活性明显下降(P<0.01)。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与抑制衰老细胞端粒酶活性有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及对细胞骨架的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老及对细胞骨架的影响。方法体外培养HUVEC,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ干预,分为对照组、10mol/LAngⅡ诱导组(AngⅡ组)。主要观察衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力。β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞增殖能力;考马斯亮蓝染色显示内皮细胞骨架,利用Western blot印迹法分析波形蛋白表达的变化。结果与10~(-6)mol/L AngⅡ细胞存活率(77.15±6.83)%比较,10~(-5)mol/L AngⅡ存活率(55.61±7.92)%明显降低(P<0.01);AngⅡ组β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数目明显增加(P<0.001),流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0/G1期[(80.11±7.92)%];AngⅡ组细胞骨架及波形蛋白较对照组明显降解。结论 AngⅡ可以诱导HUVEC衰老,其分子机制可能与细胞骨架蛋白裂解有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及对炎症因子分泌的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老及对白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的影响,进一步探讨AngⅡ在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生、发展过程中所发挥的作用. 方法 体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6 mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组.以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力2种衰老标志物为主要观察指标,其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力;酶联免疫吸附法(E LISA)检测培养液中IL-6、TNF-α浓度. 结果 与对照组相比,AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)％;(81.80±0.92)％的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0-G1[(89.4±3.4)％],证实细胞衰老;IL-6、TNF-α分泌增加(P均＜0.01). 结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与IL-.6、TNF-α分泌增加有关.