c-jun siRNA的构建及其对胃癌细胞株SGC7901中β3GnT8基因表达的影响

目的 构建c-jun干扰载体,有效沉默胃癌SGC7901细胞株中的c-jun基因表达,研究其对胃癌SGC7901细胞株中β3GnT8基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对c-jun基因的靶序列设计合成四条siRNA,将四条siRNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的c-jun siRNA载体质粒pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1949、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1050、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1111、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1276通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染SGC7901细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,通过RT-PCR法检测c-jun和β3GnT8基因mRNA的表达.结果 ①成功构建了四条正确的c-jun siRNA表达质粒;②成功筛选出一条对c-jun有明显抑制作用的siRNA干扰质粒,阻断c-jun表达后,糖基转移酶β3GnT8的表达受到明显抑制.结论 构建的c-jun siRNA表达质粒可以有效抑制胃癌SGC7901细胞株的c-jun基因表达,同时抑制糖基转移酶β3GnT8的表达,为研究胃癌的分子机制提供了一定的理论基础.     

Pol ι表达水平对行食管癌术后辅助放疗患者的生存影响

目的：探讨DNA 聚合酶 ι（DNA polymerase ι,Pol ι）表达水平对行食管癌术后辅助放疗患者的生存影响。方法：采用免疫组化方法检测97例行术后辅助放疗的食管癌患者组织中Pol ι的表达情况,分析Pol ι表达水平对这些患者生存的影响。结果：20例食管癌患者组织中Pol ι呈低表达,77例食管癌患者组织中Pol ι呈高表达;生存曲线显示Pol ι表达水平与行术后辅助放疗的食管癌患者生存呈负相关;COX回归分析显示Pol ι表达水平是影响食管癌根治术后辅助放疗患者生存的独立预后因素。结论：Pol ι可能是判断行食管癌术后辅助放疗患者预后的潜在分子标志物。     

协同刺激分子B7-H3在结肠癌细胞株中的表达水平及其分布特征

目的研究协同刺激分子B7-H3在结肠癌细胞株中的表达及其细胞内亚细胞结构的分布特征。方法分别采用Real-time PCR、Western Blot方法检测B7-H3在三株结肠癌细胞SW620、SW480、DLD-1中mRNA和蛋白质的表达水平;激光共聚焦显微镜观察B7-H3分子在三株结肠癌细胞中的亚细胞定位。结果 SW620、SW480、DLD-1 Real-time PCR的B7-H3 mRNA△Ct值分别为21.11±0.07、21.18±0.39、21.45±0.18,F=1.3497,P=0.309;Western Blot检测B7-H3蛋白的表达水平无明显差别;B7-H3分子细胞核内的表达比例分别为0.462±0.07、0.329±0.039、0.411±0.025。SW480细胞B7H3核内分布比例与另两株细胞有明显差异(P<0.05)。结论不同结肠癌细胞株中B7-H3 mRNA与蛋白的表达水平无明显差异,细胞核内有部分B7-H3分子表达,且不同细胞株之间B7-H3的核内表达有一定差异。     

血清癌胚抗原、糖链抗原153与异常糖链糖蛋白在乳腺癌诊断中的应用

目的:探讨肿瘤异常糖链糖蛋白(tumor abnormal protein,TAP)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)与糖链抗原153(carbohydrate antigen 153,CA153)在乳腺癌早期诊断中的临床价值.方法:收集45例乳腺癌患者为研究组,49例正常体检人群为对照组,比较各肿瘤志记物的敏感度、特异度、准确度等指标.结果:在乳腺癌组患者中,TAP,CEA,CA153检测敏感度分别为80.00％,8.89％,6.67％;特异度分别为100.00％,97.96％,100.00％,准确度分别为90.42％,55.32％,55.32％.结论:肿瘤TAP检测优于肿瘤标志物CEA和CA153检测,可作为乳腺癌的早期筛查指标.     

食管癌根治术后三维放疗患者预后的影响因素分析

目的探讨食管癌根治术后行三维放疗患者生存的影响因素。方法回顾分析2005年1月至2009年12月常州市第一人民医院收治的食管癌根治术后行三维放疗的114例患者的临床资料。采用 Kaplan Meier 生存分析法和log rank统计检验各临床病理特征与食管癌根治术后辅助放疗患者预后的相关性。结果114例患者术后放疗后3、5年总体生存率分别为57%和42%;Kaplan Meier生存分析法和log rank统计检验方法分析显示淋巴结转移阳性、淋巴结转移区域数目较多、TNM分期越高、脉管癌栓阳性和Ki 67高表达的食管癌根治术后放疗患者的预后较差,反之则患者预后较好。结论淋巴结转移、淋巴结转移区域数目、TNM分期、脉管癌栓和Ki 67表达是食管癌术后放疗患者生存的影响因素。     

结肠癌SW480细胞中miR-142-3p靶基因的确定及意义

目的 确定结肠癌SW480细胞中miR-142-3p的靶基因,探讨miR-142-3p与其靶基因的相互作用.方法 通过miRNA数据库预测可能与miR-142-3p相互作用的靶基因,构建miR-142-3p及阴性对照序列;将miR-142-3p、对照序列、TCF7的3'非翻译区(3'UTR)以及突变的TCF7 3'UTR分别克隆到表达载体上,共转染SW480细胞,36 h后检测绿色荧光蛋白的表达水平;Trizol抽提RNA,RT-PCR检测TCF7 mRNA表达水平;Western blot检测TCF7蛋白表达水平.结果 生物信息学方法预测TCF7可能为miR-142-3p的靶基因,进一步双荧光素酶报告实验验证了miR-142-3p可以与TCF7的3'UTR结合,阻断TCF7蛋白翻译过程,从而下调TCF7的蛋白水平.结论 TCF7可能为miR-142-3p的靶基因,miR-142-3p通过转录后负调控靶基因TCF7蛋白的表达.     

DNA聚合酶Iota(Polι)与食管鳞癌淋巴结转移的相关性研究

目的 :探讨DNA聚合酶Iota(Polι)与食管鳞癌淋巴结转移的关系。方法 :采用实时荧光定量PCR方法检测Polι基因在食管鳞癌组织中的表达,并使用Mann-Whitney U检验方法分析Polι与食管鳞癌淋巴结转移之间的关系;利用免疫组织化学染色法检测Polι及Nm23蛋白在食管鳞癌组织中的表达,并使用Spearman相关分析研究食管鳞癌中Polι与Nm23表达的相关性。向食管癌细胞TE-1和ECA-109转染Polι表达载体,上调细胞中Polι的表达,Realtime-PCR检测Polι和Nm23 m RNA的表达水平,并通过Transwell侵袭实验分析细胞的侵袭能力。结果:在食管鳞癌临床组织标本中,Polι表达与淋巴结转移相关(P<0.01),与Nm23蛋白表达呈负相关(R=-0.481,P<0.05)。上调Polι的表达增强了TE-1和ECA-109细胞的侵袭能力,差异有统计学意义(P均<0.05),同时抑制了细胞中Nm23 m RNA的表达,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Polι的表达与食管鳞癌的转移密切相关,其可能通过下调Nm23的表达来促进肿瘤转移。     

60Coγ射线照射人胶质瘤细胞U251对糖基转移酶β3GnT8及多聚乳糖胺糖链的影响

目的 研究60Coγ射线照射胶质瘤细胞U251对β3GnT8及多聚乳糖胺糖链的影响,为治疗恶性肿瘤和研究高效、低毒的辐射防护剂奠定实验基础.方法 采用0Gy、1Gy、5Gy和8Gy剂量的60Coγ射线辐照胶质瘤细胞U251,Western blotting检测60Coγ射线对β3GnT8蛋白水平表达的影响;流式细胞术分析60Coγ射线对多聚乳糖胺糖链表达水平的影响.结果 随着60Coγ射线辐照剂量的增加,β3GnT8蛋白和细胞表面多聚乳糖胺糖链表达水平逐渐降低.结论 60Coγ射线照射胶质瘤细胞U251对β3GnT8和多聚乳糖胺糖链表达均有影响,为研究高效、低毒的辐射防护剂奠定一些实验基础.     

β3GnT2、β3GnT8真核表达载体的构建及胃癌AGS、胶质瘤U251细胞株中β3GnT8cDNASNP的分布

目的 β3GnT2和β3GnT8的克隆及真核表达载体的构建.方法 RT-PCR法检测β3GnT2、β3GnT8在胃癌、胶质瘤、乳腺癌三类癌细胞株中的表达;PCR扩增带酶切位点β3GnT2、β3GnT8全长编码片段并构建真核表达载体pEGFP-C1-β3GnT2、pEGFP-C1-β3GnT8.结果 β3GnT2、β3G...