沉默SND1重组慢病毒制备及其对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

  目的   探讨沉默葡萄球菌核酸酶结构域包含蛋白1（Staphylococcal nuclease domain containing 1,SND1）表达对乳腺癌细胞系MCF-7增殖和侵袭迁移的影响。   方法   制备可介导SND1靶向沉默的重组慢病毒,感染MCF-7细胞建立沉默SND1的稳定亚细胞系;用qRT-PCR和Western blot检测SND1沉默效果;用噻唑蓝（MTS）染色法、细胞划痕和transwell实验,检测沉默SND1后MCF-7细胞增殖及侵袭迁移能力的变化。   结果   成功构建了表达靶向SND1shRNA及对照shRNA的重组慢病毒质粒,经包装获得重组慢病毒（LV-SH1、LV-SH2、LV-SH3和LV-NC）;用上述慢病毒感染MCF-7细胞,筛选出SND1沉默效果最佳的稳定亚细胞系MCF-SH3;增殖与侵袭迁移检测结果显示,MCF-SH3的增殖活性及侵袭迁移能力显著低于对照组细胞,差异有统计学意义（P < 0.01）。   结论   SND1可以促进乳腺癌细胞增殖及侵袭迁移,沉默SND1表达可抑制其增殖及侵袭迁移,提示SND1表达异常与乳腺癌密切相关,可能通过影响细胞增殖及侵袭迁移在乳腺癌的发生发展中起重要作用。      

CDK5介导的PPARγ磷酸化在动脉粥样硬化泡沫细胞形成过程中的作用

摘要：目的 探讨细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDK5）介导的过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）磷酸化在 动脉粥样硬化中的作用。方法 常规培养小鼠Raw264.7巨噬细胞,实验设对照组（C组）、氧化低密度脂蛋白（oxLDL）组（O组,50 mg/L ox-LDL）、Roscovitine+ox-LDL组（R组,15 μmol/L Roscovitine+50 mg/L ox-LDL）。待细胞融合 至70%左右,R组加入15 μmol/L Roscovitine预处理30 min,之后O组和R组分别加入50 mg/L ox-LDL继续培养24 h, 使其转化为泡沫细胞;C组不作处理。利用Western blot检测各组pPPARγ、tPPARγ、p35和CDK5蛋白表达的变化,油 红O染色和异丙醇萃取实验分析各组细胞内脂质聚积情况,酶法测定细胞内胆固醇含量,反转录PCR（RT-PCR）检 测各组ox-LDL摄取相关基因CD36、SR-A1和胆固醇外流相关基因ABCA1、ABCG1的mRNA表达水平。结果 oxLDL诱导后,O组pPPARγ/tPPARγ比值、p35/CDK5比值、细胞内脂质聚积、总胆固醇含量、游离胆固醇含量、胆固醇 酯/总胆固醇比值均较 C 组明显升高（P＜0.05）;CDK5 抑制剂干预后,R 组上述指标均较 O 组降低（P＜0.05）。RTPCR结果显示,ox-LDL诱导后,O组ox-LDL摄取相关基因CD36、SR-A1的mRNA表达水平升高,而胆固醇外流相关 基因ABCA1、ABCG1的mRNA表达水平降低（P＜0.05）;CDK5抑制剂干预后,上述指标变化与O组呈相反趋势（P＜ 0.05）。结论 CDK5/pPPARγ途径参与动脉粥样硬化泡沫细胞的形成。     

小檗碱抑制内质网应激炎症通路对2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤的探讨

目的观察小檗碱(BBR)对2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤半影区内质网应激相关炎症通路的影响。方法72只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,采用高脂饮食和链尿佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型,数字抽签随机将糖尿病大鼠分为假手术组(Sham组)、糖尿病大鼠+BBR治疗组(BBR组)、糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型组(MCAO组)、糖尿病大鼠MCAO+BBR治疗组(MCAO+BBR组),纳入研究每组6只。治疗组在术前48 h、24 h和术后6 h经胃灌注给予相应剂量药物。采用线拴法制备大鼠MCAO模型,进行神经缺损评分,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的表达;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调控蛋白78(GRP78)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、胰腺内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、核因子(NF)-κB p65表达情况。结果在脑缺血半影区,缺血2 h再灌注24 h后,MCAO组大鼠神经功能缺损评分(2.83±0.41)分,高于MCAO+BBR组大鼠(1.67±0.52)分(P<0.05),促炎因子TNF-α和IL-1β和内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、PERK和NF-κB p65的表达水平亦增高(P<0.05)。BBR治疗亦可降低脑缺血再灌注半影区促炎因子(TNF-α和IL-1β)和内质网应激相关炎症通路蛋白(GRP78、PERK和NF-κB p65)的表达水平。结论BBR可通过抑制内质网应激相关炎症通路降低2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤的炎症反应,发挥神经保护作用。     

代谢综合征合并心肌梗死大鼠模型的建立及 氧化应激相关机制的探讨

目的 建立一种稳定、易复制、符合临床实际的代谢综合征（MS）合并心肌梗死（MI）大鼠模型,并探讨MS 对心肌梗死的影响。方法 OLETF大鼠用于建立MS模型,给予高脂饲料喂养;LETO大鼠作为对照,给予标准饲料 喂养。MS模型造模成功后,将对照大鼠和模型大鼠分别给予假手术处理（sham组,MS-Sham组）和心肌梗死造模（MI 组,MS-MI组）。心肌梗死造模采用结扎大鼠心脏左前降支方法制作心肌梗死模型,假手术处理只开胸穿线不结扎 左前降支。超声心动图测量大鼠左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室短轴缩短率 （LVFS）、左心室射血分数（LVEF）。酶联免疫吸附试验（ELISA）测定心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总抗 氧化能力（T-AOC）、髓过氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）水平;免疫印迹和RT-PCR法检测心肌组织硫氧还原蛋白 （TRX）和硫氧还原蛋白相互作用蛋白（TXNIP）的蛋白和 mRNA 水平。结果 MS 和 MI 对大鼠的 LVEDD、LVESD、 LVFS、LVEF均有影响（P＜0.05）,两者交互效应对大鼠的LVEDD、LVFS、LVEF有影响（P＜0.05）。MS和MI对大鼠心 肌组织的GSH-Px、T-AOC、MPO、MDA及TRX和TXNIP蛋白和mRNA水平均有影响（P＜0.05）,两者交互效应对大鼠 心肌组织的T-AOC、MDA和TXNIP mRNA水平有影响（P＜0.05）。结论 本研究建模方法简便、实用性强,符合MS 合并心肌梗死临床发病实际。TRX系统稳定性被破坏可能是MS加重心肌组织氧化应激水平及左室功能下降的内 源性机制之一。MS在MI中发挥影响左室功能的作用机制仍需进一步探讨。