新型人肝再生增强因子的分子克隆及其性能研究

新型人肝再生增强因子的分子克隆及其性能研究杨晓明贺福初谢玲胡志远王清明邱兆华吴祖泽解放军军事医学科学院放射医学研究所北京市１００８５０ＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓＬｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＤＮＡＨｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃ...     

Effect on biological behavior of chemotherapy-resistant tumor cells by human wild-type p53, GM-CSF and B7-1 genes via recombinant adenovirus

　Objective To explore the effect on biological behavior of chemotherapy-resistant tumor cells by human wild-type p53, GM-CSF and B7-1 genes mediated via recombinant adenovirus. Methods p53-abnormal KB-v200 (VCR resistant) and KB-s (VCR sensitive) cell lines were used as model tumor cells, which are resistant and sensitive to chemotherapeutic drugs respectively. After infected with recombinant adenovirus carrying human wild-type p53, GM-CSF and B7-1 genes, changes in biological behavior (including drug sensitivity) of these two kinds of gene-transduced cancer cells were observed. Results Both of the cell lines were susceptible to adenovirus, all of three exogenous genes (p53, GM-CSF and B7-1) could be effectively expressed in these cell lines, their growth was suppressed, and apoptosis was induced. The drug-pumping-out function of Pgp glycoprotein on the cytomembrane of drug-resistant KB-v200 cells was markedly affected 48h after transfection of the recombinant adenovirus, revealed by increase of the amount of rhodamine 123 accumulation in the cells. The MTT assay also indicated the reversal of their sensitivity to VCR drugs. In vivo experiment in nude mice it was demonstrated reduction of tumorigenicity of the KB-v200 cells or KB-s cells infected with the recombinant adenovirus, and increase of their sensitivity to VCR. Conclusion The clinical application of this recombinant adenovirus carrying agents might be more effective in treatment of tumors with multidrug resistance (MDR).     

人树突状细胞与K562细胞的融合以及体外诱导p210蛋白特异性CTL的研究

目的：探讨人外周血单细胞来源的树突状细胞（Ｄdndritic cells,ＤＣ）与人白血病细胞 Ｋ５６２融合后，能否诱导同p２１０蛋白特异性的ＣＴＬ，为ＤＣ疫苗的临床应用提供理 论基础。方法：外周血来源的巾附单核细胞，在人ＧＭ－ＣＳＦ（１０００Ｕ/ml）作用下，培养５～７天后，与人白血病细胞Ｋ５６２进行融合，融合细胞再与自体的淋巴细胞共同孵育１０～１４天，采用乳酸脱氢酶释放试验分析其对p２１０蛋白阳性细胞的杀伤效果。     

人类基因组计划及其中国对策

人类基因组计划（ＨＧＰ）是以破译人类基因组的全部遗传信息为目的的国际性研究课题，该文概述了ＨＧＰ的建立背景，研究内容和方法策略，介绍了中国的相应对策。     

腺病毒介导的GM-CSF和B7-1基因表达可提高肝癌细胞的免疫原性

肝癌的发生和发展是一个多阶段的复杂过程,其中可能涉及多种基因[1-4].因此肝癌的基因治疗应针对多种基因[5,6],从多个环节控制肿瘤的发生和发展[7-9].GM-CSF和B7-1是免疫反应中的重要细胞因子和共刺激分子,已经在癌症治疗中有所应用[10-12].     

重组腺病毒介导人野生型p53,GM-CSF和B7-1基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响

目的：探讨重组腺病毒介导人野生型p５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因对肿瘤化疗耐药 细胞生物学行为的影响,为临床使用该重组腺病毒治疗多药耐药的肿瘤提供实验基础。方法：选用p５３异常的ＫＢ-s（ＶＣＲ敏感）和ＫＢv２００（ＶＣＲ耐药）细胞作为肿瘤化疗药物敏感和耐药的模式细胞,感染携带人野生型p５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因的重 组腺病毒后,观察这两种转基因癌细胞的生物学行为（包括药物敏感性０的变化,结果：药     

重组腺病毒载体介导的人野生型p53基因增强肝癌细胞对化疗药物的敏感

目的：观察表达人野生型和p53,GM－CSF和B7－1基因的重组腺病毒载体（BB－102）提高肝癌细胞对化疗药物的敏感。方法：BEL－7402,HLE和HuH-73株肝癌细胞被50MOI的BB－102转染后,Western blot检测p53基因的表达,MTT方法检测肝癌细胞对化疗药物的敏感性。结果：当MOI为50pfu／细胞时,腺病毒载体对3株肝癌细胞的转染的效率均达到80％以上。转染BB－102后,LHE和HuH-7细胞对顺铂的敏感性分别提高11倍和28倍,对丝裂霉素－3的敏感性分别提高3．75倍和20倍,而BB－102的转染对BEL－7402细胞的化疗敏感性没有影响。结论：BB－102腺病毒载体转染后能显著提高p53基因突变的HEL和HuH-7细胞对顺铂和丝裂霉素－C的敏感性,因而增强顺铂和丝裂霉素－C对HLE和HuH-7细胞的杀伤作用。     

重组腺病毒载体介导的人野生型p53基因增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性

目的： 观察表达人野生型p53,GM-CSF和B7-1基因的重组腺病毒载体（BB-102）提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性。方法： BEL-7402,HLE和HuH-7 3株肝癌细胞被50 MOI的BB-102转染后,Western blot检测p53基因的表达,MTT方法检测肝癌细胞对化疗药物的敏感性。结果： 当MOI为50 pfu/细胞时,腺病毒载体对3株肝癌细胞的转染效率均达到80％以上。转染BB-102后,HLE和HuH-7细胞对顺铂的敏感性分别提高11倍和28倍,对丝裂霉素-C的敏感性分别提高3.75倍和20倍。而BB-102的转染对BEL-7402细胞的化疗敏感性没有影响。结论： BB-102腺病毒载体转染后能显著提高p53基因突变的HLE和HuH-7细胞对顺铂和丝裂霉素-C的敏感性,因而增强顺铂和丝裂霉素-C对HLE和HuH-7细胞的杀伤作用。     

重组腺病毒介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因在肝癌细胞中的表达

 目的　观察腺病毒载体对肝癌细胞的转染效率及其介导的人野生型 p5 3、GM CSF和B7 1基因在肝癌细胞中的表达。方法　不同MOI的Ad GFP感染肝癌细胞 ,48h后计算感染效率 ;BB 1 0 2以5 0MOI感染肝癌细胞 ,48h后免疫组化法及westernblot检测 p5 3表达 ,ELISA检测GM CSF的含量 ,FACS测定B7 1的表达。结果　MOI为 5 0 pfu/细胞时对肝癌细胞的转染效率达 80 %以上 ,目的基因均可在肝癌细胞中高效表达。结论　腺病毒载体对肝癌细胞具有较高的转染效率 ,目的基因均可在肝癌细胞中高效表达 ,为进一步研究BB 1 0 2在肝癌治疗中的应用奠定了基础     

基因治疗在血液病中应用进展

随着人类对自身认识的不断深化 ,从人类解剖学开始 ,已经进入了细胞和分子病理生理学研究 ,特别是从基因水平上阐明人类遗传与疾病这一核心本质。基因治疗 (ｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ)的最初含义是指遗传病的基因替代治疗 (ｇｅｎｅ ｒｅ ｐｌａｃｅｍｅｎｔｔｈｅｒａｐｙ) ,即将正常基因通过某种途径转入到由于该基因缺陷而患有某种遗传病的患者体内 ,并表达患者所缺陷的蛋白产物 ,从而达到治疗该遗传病的目的。随着生物医学理论与技术的深入发展 ,基因治疗的涵义也不断扩大 ,目前广义上的基因治疗是指在基因水平上进行活细胞遗传物质的改造…