阴沟肠杆菌质粒介导耐喹诺酮类药物的机制研究

目的了解深圳地区阴沟肠杆菌中qnrA基因的流行情况、基因定位及其介导喹诺酮耐药性产生的机制。方法收集临床分离的阴沟肠杆菌45株,采用PCR法结合测序的技术筛查qnrA基因,大质粒提取技术、Southern杂交和接合传递试验进行质粒定位,琼脂对倍稀释法进行药物敏感性检测。结果45株阴沟肠杆菌中,7株PCR法及测序证实为qnrA基因。7株菌中6株菌所携质粒被成功提取并进行Southern杂交,qnrA基因定位于80~200kb大小的低拷贝数天然质粒上。4株菌成功进行接合传递试验,使接合子对环丙沙星的MIC值提高了32~64倍。结论质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrA在深圳地区阴沟肠杆菌中具有较高的流行率,可能是导致阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗菌药获得性耐药的重要原因。     

屎肠球菌临床分离株生物膜形成与毒力基因及ST分型之间的关系

目的 研究临床分离屎肠球菌株生物膜形成与ST分型和毒力基因之间的关系。方法 收集深圳市南山医院2011—2017年临床分离的不重复屎肠球菌共122株,采用结晶紫染色法检测细菌生物膜形成能力,对分离株进行多位点序列分型(MLST)分析, PCR方法检测屎肠球菌临床株毒力基因表面蛋白(esp )、透明质酸酶(hyl )、表面聚集蛋白(asa1 )、明胶酶(gelE )、溶细胞素(cylA )等的分布。结果 122株屎肠球菌生物膜形成阳性率为49.2%,其生物膜形成能力主要表现为弱阳性。屎肠球菌毒力基因检测提示esp 和hyl 检出率分别为39.3%(48/122)和15.6%(19/122),所有菌株未检测到asa1 、gelE 、cylA ;其中esp 阳性与生物膜形成能力相关(P <0.05),而hyl 阳性与生物膜形成能力无相关性(P >0.05)。MLST分型提示屎肠球菌临床株主要为ST78及ST18型,分别为26株及18株,其中ST78与ST18之间生物膜形成能力差异无统计学意义(P >0.05),esp 更常见于ST78分离株。结论 临床分离屎肠球菌生物膜形成能力较弱,其毒力基因esp 阳性更容易形成生物膜,而hyl 与生物膜形成能力无明显相关性,ST78与ST18之间生物膜形成能力无明显差异,esp 更常见于ST78分离株。     

深圳市南山区人民医院2011年细菌耐药监测

[目的]了解本院2011年临床住院病人分离菌株对各种常用抗菌药物的耐药性,以指导临床合理用药.[方法]应用微量肉汤稀释法,检测临床分离菌对各种常用抗菌药物的耐药性,参照CLSI2010版判断结果,并用WHONET5.4软件统计分析.[结果]2011年1~12月收集的临床住院病人分离菌共2137株,其中革兰阳性(G+)菌占35.1%,革兰阴性(G-)菌占64.9%.金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中甲氧西林耐药株所占的比例分别为 24.1%和62.6%.葡萄球菌属中甲氧西林耐药株对β-内酰胺类抗生素和其他测试药的耐药率显著高于甲氧西林敏感株,但仍有约50%~80%的菌株对四环素、复方新诺明或利福平敏感,未发现万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药株.肠球菌属中粪肠球菌对大多数测试药物的耐药率低于屎肠球菌,粪肠球菌中发现2株对利奈唑胺耐药的菌株,经使用微量肉汤稀释法鉴定后确认为耐利奈唑胺的粪肠球菌,未发现万古霉素及替考拉宁耐药株.大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株所占比例分别平均为46.6%和25.5%.肠杆菌科细菌中产ESBLs菌株对测试药物的耐药率均比非产ESBLs菌株高.肠杆菌科细菌对碳青霉烯类仍高度敏感,总耐药率小于1.0%.铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为 32.2%和21.9%,不动杆菌属(鲍曼不动杆菌占90.8%)对两者的耐药率均为45.4%.嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明、左氧氟沙星敏感率均在80.0%以上.[结论]2011年本院分离的细菌以G-杆菌为主,细菌多重耐药性严重,利奈唑胺耐药肠球菌和碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌有增多趋势,尤其G-杆菌增多.鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的增加,对临床构成严重威胁.合理选用抗菌药,加强感染控制措施是当务之急,各医院采取有效控制措施刻不容缓.     

1株利奈唑胺耐药粪肠球菌的基因突变检测

目的探讨1株对利奈唑胺耐药的粪肠球菌的耐药机制。方法从广东医学院附属深圳南山医院1例血液病患者痰标本分离出1株对利奈唑胺耐药的粪肠球菌,采用聚合酶链反应(PCR)法,对该菌利奈唑胺耐药的粪肠球菌23S rRNA V区域和23S rRNA 4个拷贝基因片段进行扩增和测序比对分析。结果耐药菌株23S rRNA V区域第2576位核苷酸发生G→U突变(G2576U),4个拷贝基因片段中,除拷贝1外,其他3个拷贝均发生G2576U突变。结论 G2576U点突变是该菌株的耐药机制。     

淋病患者泌尿生殖道沙眼衣原体及解脲支原体感染情况的调查

淋病是一种常见的性传播疾病,混合感染是某些症状持续存在,长期不能治愈的原因之一。为探明其混合感染情况,作者对58例淋病患者同时进行沙眼衣原体及解脲支原体检测,现将结果报告如下:     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的临床分离及耐药机制分析

目的：了解我院耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IRPA）的临床分布情况,并探讨其耐药机制。方法：对2009年1月～2010年12月我院住院患者临床分离的非重复性IRPA的数据资料进行统计分析,采用PCR方法检测金属酶基因和外膜通道蛋白基因。结果：从404株铜绿假单胞菌中共分离出100株IRPA,分离率为24.75%。其中90株（90.0%）IRPA来源于下呼吸道痰液标本;IRPA主要来源于重症医学科（ICU）;IRPA对阿米卡星最敏感率为73.0%（耐药率为27.0%）,其次是哌拉西林/他唑巴坦（敏感率为63.0%）,哌拉西林（敏感率为59.0%）,庆大霉素（敏感率为58.0%）,头孢他啶（敏感率为57.0%）,其余药物的敏感率均〈50.0%。仅1株IRPA检测出IMP基因阳性（1.0%）,测序为IMP-9型金属酶基因,其余金属酶基因均未检出;oprD2基因缺失的IRPA有65株（65.0%）。结论：我院IRPA主要是由于外膜通道蛋白oprD2缺失引起,且已有IMP-9型IRPA在我院流行,需引起重视。     

铜绿假单胞菌耐药性及泛耐药临床因素分析

目的分析某院铜绿假单胞菌感染患者耐药情况及发生泛耐药的相关临床危险因素。方法回顾性分析该院2008年1月1日-2009年5月1日间分离的538株铜绿假单胞菌对18种常用抗菌药物的耐药状况,并对其中泛耐药铜绿假单胞菌感染患者（泛耐药组,28例）的住院资料与同期非泛耐药铜绿假单胞菌感染患者（对照组,48例）进行比较。结果538株铜绿假单胞菌对阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦较为敏感,耐药率分别为18.40%和27.70%;而对亚胺培南、美罗培南、头孢他啶及环丙沙星的耐药率较高,分别为69.52%、56.88%、45.91%和56.88%。检出泛耐药铜绿假单胞菌28株,占5.20%。对泛耐药组与对照组患者的分析表明,泛耐药铜绿假单胞菌感染的危险因素有：气管插管、长时间入住重症监护室（ICU）及长期联合应用抗菌药物。结论铜绿假单胞菌对多种抗菌药物耐药率较高,尤其对亚胺培南耐药率增加,应引起临床高度重视。对于入住ICU及应用多种抗菌药物的患者,尤其是应用机械通气者,应警惕泛耐药铜绿假单胞菌感染。     

喹诺酮耐药基因qnrA的协同耐药分子机制研究

目的探讨喹诺酮类药物耐药基因qnrA介导的耐药性及其协同耐药分子机制。方法采用引物特异性PCR结合测序检测qnrA阳性株及gyraseA和parC基因变异情况,Phe-Aag-β-Naphthylamine(PAβN)抑制试验识别外排机制介导的耐药性,琼脂稀释法测定qnrA阳性株对喹诺酮类抗菌药的MIC值。结果QnrA阳性株对喹诺酮类抗菌药的耐药水平存在明显差异,gyraseA、parC基因变异或AcrAB-TolC外排泵等协同耐药机制存在与否与其关系密切。结论qnrA基因介导的耐药性存在协同机制,并加剧了qnrA阳性株的耐药性,给临床抗感染治疗带来严峻挑战。     

双歧杆菌肠道内调控表达肠道病毒71型VP1蛋白的实验研究

目的构建重组肠道病毒71VP1基因双歧杆菌,制成口服疫苗,用于EV71感染预防。方法扩增EV71病毒VP1基因并将其插入到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pBBAD/Xs中,构建VP1表达载体(pBBADs-VP1),通过Western blot检测VP1蛋白在pBBADs-VP1转化菌中的表达。选取BALB/c小鼠,分为B-VP1组、VP1组、GFP组和生理盐水组,B-VP1组口服pBBADs-VP1-转化双岐杆菌,VP1组腹腔注射大肠埃希菌表达纯化的重组VP1蛋白,GFP组口服pBBADs-GFP转化双岐杆菌,生理盐水组口服生理盐水,观察pBBADs-VP1-转化双岐杆菌口服免疫对EV71感染的免疫反应:包括病毒的中和抗体滴度、抗EV71-VP1抗体以及诱导脾脏和淋巴集结中Th1免疫反应。结果与GFP组及生理盐水组比较,B-VP1组及VP1组中和抗体滴度及抗EV71-VP1抗体水平,均显著增加;口服表达VP1蛋白长双歧杆菌和注射VP1蛋白都会诱导Th1细胞因子免疫反应(P<0.05),表达VP1蛋白长双歧杆菌较易诱导局部肠道的Th1模式,而注射VP1蛋白较易诱导全身性免疫。攻毒试验显示,VPI和B-VP1组新生鼠攻击后第15d(剂量1 000LD50)存活率分别为20.00%和16.67%,对照组无小鼠存活。结论利用长双歧杆菌表达VP1蛋白的口服疫苗可能成功激发针对EV71病毒感染的特异性免疫应答。用表达VP1的重组双歧杆菌免疫母鼠,可以赋予新生小鼠以保护。     

甲型H1N1流行性感冒70例临床特征及转归分析

目的 分析甲型H1N1流行性感冒住院患者的临床特征及治疗转归.方法 回顾性分析本院70例H1N1流行性感冒住院患者的临床资料,探讨其临床表现、实验室检查以及治疗和预后等特点.结果 患者男31例（44.3%）,儿童23例（32.9%）,孕妇7例（10%）.主要临床表现为发热（98.6%）、咳嗽（94.3%）、咳痰（58.6%）、咽痛（40.0%）、头痛（35.7%）、四肢酸痛（25.7%）等,住院发热患者平均热程（4.2±2.8）d.疾病早期白细胞总数正常45例（64.3%）,20例（28.6%）下降,24例（34.3%）淋巴细胞比例升高;血培养均阴性,16例（22.9%）合并其他病毒感染.43例（61.4%）出现肺部影像学改变,主要表现为单侧或双侧斑片状高密度影.29例（41.4%）患者有明确接触史,5例（7.1%）并存其他内科疾病.70例患者经综合治疗后均好转或痊愈出院,其中仅17例（24.3%）给予奥司他韦口服.结论 甲型H1N1流感多数病例病情轻,即使合并肺部感染,经积极综合治疗预后仍良好;奥司他韦应用指征有待进一步探讨.