PI3K／Akt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化调控中的作用

目的：研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,加入PI3K抑制剂LY294002（1、10μmol/L）,应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7d,采用碱性磷酸酶（ALP）染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析,Westernblot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、Runx2、OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72h,LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强（P＜0.05）。ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组（P＜0.05）。成骨诱导培养3和7d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组（P＜0.05）。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7d也显著高于1μmol/L组（P＜0.05）。Westernblot检测结果证实成骨诱导可激活Akt磷酸化蛋白表达,但LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、Runx2、OPN、Osterix4种基因mRNA表达（均P＜0.05）。结论PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。     

间充质干细胞通过CCL5/CCR5信号途径促进骨肉瘤Saos-2细胞迁移和生长

目的 研究人间充质干细胞(hMSC)对骨肉瘤Saos-2 细胞迁移与增殖的影响及其机制.方法 取传代培养的hMSC 和Saos-2 细胞,分别制备hMSC 条件培养基(MSC-CM)和Saos-2 细胞条件培养基(Saos-2-CM).采用免疫荧光细胞化学方法 和双抗体夹心ELISA 方法 分别检测hMSC CCL5 趋化因子的表达及其表达水平,蛋白质免疫印迹方法 检测Saos-2 细胞CCR5 因子的表达.按条件培养基的不同将Saos-2 细胞分为4 组:含10% 胎牛血清的α-MEM 培养基(阴性对照)、Saos-2-CM(阳性对照)、MSC-CM、含24 ng/ml 兔抗人CCL5 抗体的MSC-CM(MSC-CM/anti-CCL5 Ab),应用Transwell实验和噻唑蓝(MTT)法分别检测hMSC 对Saos-2 细胞迁移与增殖能力的影响.实验均重复3 次.结果 免疫荧光细胞化学方法 和双抗体夹心ELISA 检测显示,hMSC CCL5 因子表达阳性且其表达水平为3.68 pg/ml.蛋白质免疫印迹检测显示,Saos-2 细胞CCR5因子表达阳性.Transwell 实验和MTT 检测结果 显示,MSC-CM 能明显促进Saos-2 细胞的迁移与增殖,而MSC-CM/anti- CCL5 Ab 组Saos-2 细胞的迁移与增殖能力均明显下降,2 组间差异均有统计学意义(分别为P < 0.01,P < 0.05).结论CCL5/CCR5 信号途径在hMSC 促进Saos-2 细胞迁移与增殖过程中发挥关键作用,抑制CCL5 趋化因子的表达可明显降低Saos-2 细胞的迁移与增殖能力.     

Expression and Significance of Plasminogen Activator Inhibitor in Osteoarthritis Synovial Membrane

目的探讨两种纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)在骨关节炎的发生发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测滑膜组织中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA),组织型纤溶酶原激活物(tPA),PAI-1,PAI-2的表达。结果骨关节炎滑膜中PAI-1,PAI-2的阳性表达比例高于正常滑膜(P<0.05),骨关节炎滑膜中PAI-1与uPA、tPA蛋白表达阳性细胞百分比呈直线正相关关系。结论 PAI可能与骨关节炎软骨退变表现为长期慢性过程有关。     

脑卒中后髋部骨折的特点及治疗体会

目的分析治疗过的脑卒中后偏瘫发生髋部骨折的患者,总结其特点及治疗效果。方法比较偏瘫侧与健侧的髋部骨折发生率,对骨折进行分型,分析其分布特点,术后的随访临床疗效。结果患者左、右二侧髋部骨折发生率无显著性差异(P>0.05),偏瘫侧髋部骨折发生率显著高于健侧(P<0.05)。所有股骨粗隆间骨折均在伽马钉内固定术后获得愈合。股骨颈骨折患者均在行人工股骨头置换术后2周在助行器保护下站立或行走。结论脑卒中后偏瘫侧髋部骨折发生率显著高于健侧。伽马钉内固定术对脑卒中后股骨粗隆间骨折有良好的疗效。人工股骨头置换术对脑卒中后股骨颈骨折具有良好的疗效。     

直接前方入路髋关节置换术治疗老年骨质疏松股骨颈骨折的疗效分析

目的 探讨直接前方入路(DAA)全髋关节置换术(THA)治疗老年骨质疏松股骨颈骨折的疗效。方法 选取2020年6月至2022年6月40例老年骨质疏松股骨颈骨折患者,随机分为直接前方入路(DAA)组,传统后外侧入路(PLA)组,每组各20例。比较两组患者切口长度、术中出血量、手术时间、术后24 h引流量、术后首次下地时间、术后住院时间、炎症指标[白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、肝素结合蛋白(HBP)、血沉(ESR)]、肌肉损伤指标[肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)、乳酸脱氢酶(LDH)]、视觉模拟评分(VAS)、双侧下肢长度差值、Berg平衡量表(BBS)、髋关节功能评分(HHS)、牛津髋关节评分(OHS)及术后并发症发生率。结果 与PLA组相比较,DAA组切口长度、术中出血量、术后24 h引流量、术后首次下地时间、术后住院时间、炎症指标、肌肉损伤指标、VSA评分均低于PLA组(P<0.05);DAA组术后1、3、6个月HHS、BBS、OHS评分均高于PLA组(P<0.05)。结论 与PLA全髋关节置换术相比,DAA具有手术创伤小更小,术后炎症反应更轻...     

全自动酶免分析仪在肝炎酶联免疫吸附试验中的应用评价

目的 比较国产全自动酶免分析系统与进口酶免分析系统及手工操作方法三者间检测性能方面的差异。 方法 2016年于杭州市第一人民医院随机收集的乙型肝炎、丙型肝炎阴性血清标本各196份,乙型肝炎、丙型肝炎阳性血清标本各20份。1套珠海丽珠公司乙肝检测试剂盒和1套北京康彻斯坦公司抗HBV国家标准物质,1套北京万泰丙肝试剂盒和1套北京康彻斯坦公司抗HCV国家标准物质,分别于国产全自动酶免分析系统、雅培i2000SR和手工操作平行试验,测定吸光度值,计算3种方法的灵敏度、精密度、准确率、特异度,并利用SPSS 17.0统计软件对3种数据进行分析。 结果 雅培i2000SR系统灵敏度明显高于Addcare ELISA 600系统和手工法,Addcare ELISA 600系统灵敏度高于手工法,比较差异有统计学意义(P<0.05)。乙肝五项和丙肝抗体的标准物质手工操作、国产全自动酶免分析系统和雅培i2000SR系统的试验CV相互比较分别为14.5%>12.3%>2.1%、17.0%>12.5%>3.5%、10.8%>8.4%>3.0%、24.4%>19.6%>4.4%、20.0%>19.4%>2.0%、12.7%>11.1%>3.2%,手工操作法的CV大于国产全自动酶免分析系统的CV大于雅培i2000SR系统的CV,比较差异有统计学意义(P<0.05),3种方法对抗HBV和抗HCV试剂盒阳性、阴性参考品检测符合率为100.0%。3种方法对176份阴性标本的特异度均为100.0%。 结论 国产全自动酶免分析系统和雅培i2000SR系统与手工操作相比,重复性更好,且三者的诊断符合率、特异度均一致,国产全自动酶免分析系统可以替代手工操作用于临床常规标本检测。      

穴位埋线结合温针灸治疗膝骨关节炎的疗效研究

  目的  探讨穴位埋线结合温针灸治疗膝骨关节炎的疗效及对血清IL-1、IL-6、TNF-α水平的影响。  方法  选取2018年9月—2020年7月在杭州市第一人民医院就诊的膝骨关节炎患者120例,按随机数字表法分为对照组和观察组,各60例。对照组给予双氯芬酸钠缓释片,观察组给予穴位埋线结合温针灸治疗,2组疗程为4周。比较2组患者视觉模拟评分(VAS)、Lysholm量表(LKSS)评分、WOMAC评分、中医临床症状评分、临床疗效、血清IL-1、IL-6、TNF-α水平。  结果  治疗后,观察组VAS评分[(1.36±0.17)分]、WOMAC评分[(2.72±0.34)分、(0.94±0.14)分、(15.40±2.22)分]以及LKSS评分[(76.13±8.46)分]明显优于对照组[(2.81±0.43)分、(4.31±0.52)分、(1.65±0.22)分、(20.38±2.46)分、(62.01±7.75)分,均P＜0.001],中医临床症状评分优于对照组(均P < 0.001)。观察组总有效率显著高于对照组(P＜0.05)。治疗后,观察组患者血清IL-1[(8.21±1.25)ng/L]、IL-6[(33.61±4.46)ng/L]、TNF-α[(12.09±1.77)ng/L]改善显著优于对照组[(12.13±1.65)ng/L、(54.81±6.03)ng/L、(15.40±2.51)ng/L, 均P＜0.001]。  结论  穴位埋线结合温针灸治疗膝骨关节炎的疗效显著,值得在临床推广使用。      

Zeste基因增强子同源物2基因对于人多发性骨髓瘤细胞的影响及其机制

目的研究Zeste基因增强子同源物2(EZH2)在人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226中的作用和分子机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测3株人多发性骨髓瘤细胞和20名多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中EZH2的表达水平。以RPMI8226细胞为代表,采用小干扰RNA(siRNA)沉默EZH2基因,蛋白质印迹法(Western blot)检测EZH2沉默后RPMI8226细胞中EZH2的表达水平,RT-qPCR法检测EZH2的mRNA表达水平,确定基因沉默的效果。EZH2沉默组分别设置对照组(Control)、siRNA阴性对照组(siRNA-NC)和EZH2 siRNA组(siRNA-EZH2)。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期的改变及凋亡水平,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡抑制蛋白(Survivin)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3/7(Caspase-3/7)、基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)的表达水平。组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),并用Bonferoni校正的t检验进行组间两两比较。结果3株人多发性骨髓瘤细胞中EZH2的表达水平显著高于正常人骨髓细胞(分别为0.38±0.08、0.25±0.05、0.22±0.06和0.12±0.03),而多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中EZH2的水平也显著高于正常人骨髓细胞的水平(4.25±0.85比0.15±0.05)。在EZH2沉默的实验中发现siRNA-EZH2组的细胞活力显著低于Control组细胞(0.02±0.01比0.41±0.01)。siRNA-EZH2组细胞S期的比例为(10.22±3.21)%,显著低于Control组细胞[(52.31±3.33)%,t=16.310,P<0.01],差异有统计学意义。siRNA-EZH2组细胞存活率为(49.15±2.11)%,显著低于Control组细胞[(98.22±1.22)%]。siRNA-EZH2组细胞侵袭能力相比Control组显著降低(106.78±5.62比358.63±7.90),且siRNA-EZH2组细胞中Survivin、MMP-2/9的蛋白水平显著低于Control组(分别为0.86±0.12比2.15±0.15、3.61±0.07比1.06±0.02和2.24±0.11比0.47±0.08),Caspase-3/Caspase-7的水平显著高于Control组(分别为2.98±0.03比0.67±0.04和1.96±0.24比0.42±0.02)。结论EZH2在人多发性骨髓瘤中高表达,其作用与增强人多发性骨髓瘤细胞生长、抗凋亡、促侵袭有关。     

自体骨髓联合脱钙牙基质治疗骨折不愈合

2006年3月～2008年12月,我科采用自体骨髓移植联合脱钙人牙基质材料(骨又生,decalcified dentin matrix,DDM)治疗骨折延迟愈合或不愈合患者19例,取得了良好的疗效.     

脑卒中后髋部骨折误诊为脑卒中再发5例分析

目的:分析脑卒中后髋部骨折误诊为脑卒中再发的原因,总结经验.方法:回顾性分析5例脑卒中后髋部骨折的临床资料,分析误诊原因.结果:5例患者均有脑率中病史,因一侧下肢无力及活动不利就诊.头颅CT及MRI检查未见新鲜脑出血或梗死病灶.患髋X线检查示髋部骨折.从初诊到确诊历时4 ～ 9 d,平均(6.6 ± 1.9)d.确诊后患者均行手术治疗,术后患髋关节功能恢复良好.结论:脑卒中后髋部骨折容易误诊为脑卒中再发.脑卒中后患者出现下肢无力或活动不利,应对其进行全面体格检查,必要时行患髋X线检查,以防漏诊.