中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1 第16- 17 区基因和MSP2 基因的分子克隆与鉴定

目的: 为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法: 根据MAD20 株裂殖子表面蛋白1 (MSP1) 和FC27 株裂殖子表面蛋白2 (MSP2) 基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物, 应用多聚酶链反应(PCR) 技术对5 例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕分离株CMH/YN 和云南省盈江县农场CYJ/YN 分离株基因组DNA MSP1 第13- 17 区基因和MSP2 基因进行扩增, 并将扩增产物分别经EcoRI 和KpnI, BamHI 和HindIII 双酶切后, 分子定向克隆M13mp18 和M13mp19 载体, 转染大肠杆菌(E. coli) TG1, 从含X-gal 和IPTG 的LB平板上, 将随机筛选得到的单个无色噬菌斑经E. coli JM 103 扩增, 用碱裂解法抽提重组子复制型DNA (RFDNA ) 后, 再分别经EcoRI 和KpnI, BamHI 和HindIII 双酶切鉴定。结果: 证实重组子为编码脑型疟患者恶性疟原虫CMH/YN 和CYJ/YN 分离株MSP1 第16- 17 区基因和MSP2 基因分子克隆M13 载体。结论: 首次报道确证脑型疟患者恶性疟原虫CMH/YN 和CYJ/YN 分离株MSP1 第16- 17 区基因和MSP2 基因分别与MAD20 株MSP1 和FC27 株MSP2 相应基因完全一致。这些发现对研究预防人脑型疟疫苗和建立一种新型脑型疟恶性疟原虫检测方法具有重要意义。     

临沧市2012年高效抗反转录病毒治疗失败的AIDS患者耐药基因变异分析

目的：了解临沧市2012年经高效抗反转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy, HAART）失败的AIDS患者耐药基因的变异情况。方法调查HAART失败AIDS患者的流行病学特征,检测CD4＋T淋巴细胞计数和病毒载量,对HIV RNA＞1×10^3 copies/ml的患者行HIV-1耐药基因检测。结果66例中有53例检出基因耐药突变。最常见的核苷类反转录酶抑制剂耐药突变位点为M184V、D67N和K70R,非核苷类反转录酶抑制剂耐药突变位点为K103N、G190A和V179D。仅发现3个蛋白酶抑制剂突变位点,分别为D33F、M46I和L76V。结论临沧市AIDS患者出现较多反转录酶抑制剂突变位点是一线抗反转录病毒治疗失败的主要原因。在选择二线治疗方案时,增加蛋白酶抑制剂可避免多重耐药导致的治疗失败。     

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1第16-17区基因和MSP2基因的分子克隆与鉴定

目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法 :根据 MAD2 0株裂殖子表面蛋白 1( MSP1)和 FC2 7株裂殖子表面蛋白 2 ( MSP2 )基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物 ,应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕分离株 CMH/ YN和云南省盈江县农场 CYJ/ YN分离株基因组 DNA MSP1第 13- 17区基因和MSP2基因进行扩增 ,并将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切后 ,分子定向克隆 M13mp18和 M13mp19载体 ,转染大肠杆菌 ( E.coli) TG1,从含 X- gal和 IPTG的 LB平板上 ,将随机筛选得到的单个无色噬菌斑经 E.coli JM10 3扩增 ,用碱裂解法抽提重组子复制型DNA ( RFDNA)后 ,再分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切鉴定。结果 :证实重组子为编码脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株 MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分子克隆 M13载体。结论 :首次报道确证脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分别与 MAD2 0株 MSP1和 FC2 7株 MSP2相应基因完全一致。这些发现对研究预防人脑型疟疫苗和建立一种新型脑型疟恶性疟原虫检测方法具有重要意义。     

脑型疟患者红细胞膜蛋白分子的表达

目的： 为研究脑型疟发病机制及防治提供理论依据。方法： 应用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳 （ＳＤＳ－ＰＡＧＥ） 技术, 对云南省１９ 例脑型疟患者感染红细胞 （ＰＥ） 表达的红细胞膜蛋白１（ＰｆＥＭＰ－１） 进行分析, 并分别与４３ 例恶性疟、９ 例间日疟患者ＰＥ表达的ＰｆＥＭＰ－１和ＰｖＥＭＰ－１及６ 例健康人红细胞膜蛋白（ＥＭＰ） 进行比较。结果： 脑型疟患者ＰＥ存在高表达的高分子量ＰｆＥＭＰ－１, 分子量为２６０～３２０ ｋＤａ。恶性疟及间日疟患者ＰＥ不表达２６０ ｋＤａ 以上的高分子量ＰｆＥＭＰ－１,分别测到分子量最大为２４０ｋＤａ 的ＰｆＥＭＰ－１和１８０ ｋＤａ的ＰｖＥＭＰ－１。健康人对照组ＥＭＰ分子量为１４０ ｋＤａ。结论： 脑型疟患者ＰＥ高表达的不同高分子量ＰｆＥＭＰ－１ ２６０～３２０ ｋＤａ, 与脑血管内皮细胞（ＥＣ） 不同受体蛋白ＣＤ３６、血小板反应蛋白 （ＴＳＰ）、细胞间粘附分子１ （ＩＣＡＭ－１）、血管细胞粘附分子１ （ＶＣＡＭ－１） 和内皮白细胞粘附分子１（ＥＬＡＭ－１） 及硫酸软骨素Ａ （ＣＳＡ） 的结合是脑型疟发病的分子基础, 可导致脑型疟患者发生昏迷。     

Antigenic variation and cytoadherence of PfEMP1 of Plasmodium falciparum-infected erythrocyte from malaria patients

Objective To approve a theoretical basis for the molecular pathogenesis of human cerebral malaria and treatment with prevention.Methods The blood samples were collected from 24 patients with cerebral malaria, 143 wit h falciparum malaria, 34 with vivax malaria and 20 healthy controls from the end emic areas of Yunnan Province, China. Using the sodium dodecyl sulfate-polya crylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) technique, we determined the molecular mass (Mr) of these Plasmodium falciparum (P. falciparum) erythrocyte membr ane protein 1 (PfEMP1) molecules. Results Our findings indicate that higher molecular mass (260 kDa-320 kDa) forms of Pf E MP1 were expressed on parasitized erythrocyte (PE) from human cerebral malaria p a tients. Compared with PfEMP1 expressed on PE from human cerebral malaria patien ts, the expression of PfEMP1 and Plasmodium vivax (P. vivax) erythrocyte me mbrane protein 1 (PvEMP1) on PE from falciparum malaria patients and vivax malar ia patients did not have multiple bands of PfEMP1 of ≥260 kDa, but had a PfEMP 1 with molecular mass of 240 kDa and a PvEMP1 with molecular mass of 180 kDa b and separately. Healthy controls expressed an EMP of molecular mass of 140 k Da.Conclusion Results confirm the antigenic variation of higher molecular mass of PfEMP1 whos e molecular mass is equal to or exceeds 260 kDa-320 kDa on PE of patients with cerebral malaria. Our results show that the binding of large antigenic variabi lity PfEMP1 molecular mass of 260 kDa-320 kDa on PE from human cerebral malari a patients with diverse receptor molecules on the endothelial cell (EC) of the c erebral microvessels may be involved in the molecular pathogenesis of cerebral m alaria.     

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白…

目的：为设计研制安全和的人脑型疟疫苗提供进一步科学依据。方法：应用多聚酶锭反应＊（ＰＣＲ）技术对中国５例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕ＣＭＨ／ＹＮ分离株和云南省盈江县农场ＣＹＪ／ＹＮ分离株基因组ＤＮＡ裂殖子表面蛋白（ＭＳＰ１）第１３－１７区基因进行扩增，，将扩增产物分别经ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎＩ双酶切后，回收的ＭＳＰ１第１６－１７区基因分子定向克隆Ｍ１３ｍｐ１８和Ｍ１３ｍｐ１９载体，按Ｓａｎｇｅ     

消化性溃疡8398例胃镜分析和流行病学分析

为探讨昆明地区消化性溃疡(pepciculcet，PU)的流行病学特点及临床意义。本对我院1973年12月至2000年12月间胃镜检查的80517例经确诊为PU的8398例，分别以其发病与性别、年龄、季节、部位、并发症的关系进行了胃镜分析和流行病学分析，现将结果报告如下。     

超大剂量东莨菪碱抢救中毒性细菌性痢疾一例报告

1 临床资料 患儿,男,3岁半,因高热、腹泻18h于1988年5月7日入院。入院时体温39℃,脉搏160次/min,神志恍惚,呼吸浅快,面色苍白,四肢厥冷,颈软,腹胀明显,肝脾未及,肠鸣音亢进。眼底检查见眼底动脉痉挛变细,动静脉比1:3。Hb90g/L,WBC2.1×10~9/L,N0.45,L0.5。血清K~+3.4mmol/L,Na~+137mmol/L,Cl~-96mmol/L,CO_2CP 16.5mmol/L。大便常规,RBC5个/HP,WBC20个/HP,大便培养连续3次为福氏痢疾     

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1第16—17区基因的分子克隆及序列分析

目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供进一步科学依据。方法 :应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对中国 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕 CMH/YN分离株和云南省盈江县农场 CYJ/YN分离株基因组 DNA裂殖子表面蛋白 1( MSP1)第 13— 17区基因进行扩增 ,将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I双酶切后 ,回收的 MSP1第 16— 17区基因分子定向克隆M13mp18和 M13mp19载体 ,按 Sanger双脱氧链终止法进行 DNA序列测定 ,并与 MAD2 0、K1和Wellcome株原型基因进行同源性分析比较。结果 :发现脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/YN和 CYJ/YN分离株 MSP1第 16— 17区基因之间的序列完全相同 ,全长为 918bp,编码 30 6个氨基酸 ,含 12个半胱氨酸组成的 2个表皮生长因子 ( EGF)单体结构域 ;除了在核苷酸第 4 869位缺失 1个碱基和散在分布 5个碱基点突变之外 ,与 MAD2 0、K1和 Wellcome株相应基因之间的核苷酸同源性分别为 98.6%、2 3.3%和 2 2 .8%。结论 :本研究在世界上首次报道脑型疟患者恶性疟原虫分离株MSP1第 16— 17区 DNA序列测定分析结果 ,确证该基因与 MAD2 0株高度同源性 ,并发现在1691— 170 1位氨基酸存在 TCTEEDSGSSR表位。