自制电泳凝胶干燥器

凝胶电泳后凝胶的干燥是一个困难的问题,我们参照中山医科大学的凝胶干燥器样本加以改进,自制了凝胶干燥器,使用效果满意。1.组装 打开凝胶干燥器上盖,在底盘中间放一块有孔铝薄片(图d),薄片上铺放大小一致的四层尼龙网及二层湿滤纸,再放一张湿玻璃纸。凝胶标本放在玻璃纸上,凝胶与玻璃纸之     

恶性疟原虫保护性单克隆抗体的分离和纯化

为制备亲和吸附剂,提取恶性疟原虫保护性抗原,我们用ProteinA亲和吸附柱,自小鼠腹水中提取抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。腹水上柱后,用0.1M PBS洗涤杂蛋白,用0.1M醋酸洗脱吸附的McAb。洗脱液经透折。浓缩后,用SDS—PAGE鉴定纯度,免疫荧光及双扩散试验检测其活性。 四个杂交瘤株(9_4D_1,9_4C_3,9_2D_4,9_3A_3)的腹水共60.3ml,过柱后收获McAb153.9mg,平均每毫升腹水可得2.25mg McAb,SDS—PAGE电泳图谱上显示二条区带,     

用抑制性单克隆抗体对恶性疟原虫裂殖体和裂殖子表面抗原的鉴定

根据体外抑制试验证明,94D_1,94C_3,92D:,9_3A_3,9 B和9_3D_4等6株McAb对恶性疟原虫的增殖有明显的抑制活性,为了分析这些McAb相应的靶抗原以及进一步的提取和纯化。我们首先对上述靶抗原的理化特性作了初步鉴定。用葡萄球菌A蛋白(SPA)免疫吸附柱自小鼠杂交瘤腹水中提取纯化抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。纯化后的单克隆抗体与溴氰活化的琼脂糖珠(Sepharose 4B)制备免疫吸附柱。将~(125)I—标记的恶性疟原虫tritonX—100提取物通过上述亲和层析柱,洗脱物经透析浓缩后,用SDS—PAGE—放射自显影鉴定与保护性McAb对应的靶抗原的分子量。同时用提纯后的McAb与恶性疟原     

疟疾抗原抗体常量交叉免疫电泳分析

本文利用交叉免疫电泳技术对诺氏疟原虫可溶性抗原进行了分析。实验系采用100×100×3mm~3琼脂糖玻璃板和含Ca~(2 )的巴比妥缓冲液、第一向电泳所用电压为8V/cm,电泳1小时,第二向电泳所用电压为2V/cm,电泳6—8/小时。电泳后经压片、洗绦、再压片、干燥、染色、脱色和再干燥步骤后观察结果。实验结果表明,作为标准对照的卵白蛋白抗原和人血清抗原分别与相应的抗血清形成许多沉淀峰,而且其抗原的浓度与沉淀峰高度明显相关。在待测抗原的分析中,诺氏疟原虫可溶性表面抗原能与相应的抗血清形成6条沉淀峰,由于所用抗原预先用同位素进行了标记,因而通过放射自显影提高了敏感性和分辨力。     

重组人白细胞介素－3在大肠杆菌中表达及纯化研究

将化学合成的人白细胞介素－３（ｈＩＬ－３）基因与表达质粒ｐＫＫ２２３－３重组并转化大肠杆菌ＪＭ１０５，重组菌在摇瓶中发酵并诱导表达，表达产量达菌体蛋白质总量的５３％以上。发酵菌经超声破碎后得到包含体，经洗涤处理使包含体纯度达９０％以上。用８ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍溶解包含体后直接透析复性，复性液经Ｓｅｐｈｏｒｏｓｅ－ＳＰ离子交换层析，得到纯化的重组ｈＩＬ－３，纯度达９８％。用ＴＦ－１细胞进行体外检测活性，比活达到１０８单位／ｍｇ蛋白质。本研究为重组人白细胞介素－３的大规模生产提供了条件。     

大鼠肝多聚核糖体及其mRNA的分离和鉴定

利用超速离心法分离大鼠肝多聚核糖体,进一步用Oligo(dT)-Cellulose柱层析法从中直接分离出mRNA。紫外分光光度及蔗糖密度梯度分析均显示此多聚核糖体有较高的纯度。在兔网织红细胞体外翻译系统中,此多聚核糖体表现出较高的生物活性。     

用葡萄球菌蛋白A(SPA)菌体试剂免疫沉淀诺氏疟原虫裂殖体(裂殖子)靶抗原(摘要)

本文参考Kessler和Howard等报道的方法,用金黄色葡萄球菌CowanI株(SPA)菌体试剂免疫沉淀诺氏疟原虫裂殖体(裂殖子)表面抗原,获得了较为满意的结果。 用乳过氧化物酶催化的~(125)Ⅰ标记诺氏疟原虫裂殖体(裂殖子)表面抗原,后将用Tri-ton X-100提取出的标记抗原和SPA菌体试剂在室温孵育60分钟;后取100μl~(125)Ⅰ标记的诺氏疟原虫表面抗原加入到100μl的兔抗诺氏疟原虫免疫血清中,在4℃孵育18小时,使其形成免疫复合物。在室温下将100μl预先用TNT缓冲液(0.15M NaCl、10mM Tris,pH7.5,0.25%TritonX-100)洗过3次的10%SPA菌     

恶性疟人群免疫血清靶抗原的分析

本文报告利用乳过氧化物酶(LPO)催化的~(125)I放射性标记法,标记恶性疟原虫裂殖体(裂殖子)表面抗原。将标记的原虫制成TritonX—100提取物,然后分别与采自流行区的11份病人血清和非疟疾流行区正常人血清进行免疫沉淀,通过十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和放射自显影分析恶性疟患者血清的靶抗原。 结果指出,恶性疟裂殖体(裂殖子)的TritonX—100提取物中存在20多种表面膜抗原。分子量为270、240、183、160、137、104、98、74和63KD的多肽系免疫沉淀中的主要靶抗     

恶性疟原虫保护性抗原的鉴定和纯化

用~(125)Ⅰ—乳过氧化物酶法标记恶件疟原虫裂殖体(子),TritonX—100提取疟原虫表面标记抗原。抗恶性疟单克隆抗体9_4D_1与上述恶性症原虫膜抗原提取物作免疫沉淀分析,并用单克隆抗体9_4D_1制备免疫吸附剂,通过亲和层析自恶性疟原虫提取物中分离纯化相应的靶抗原。结果表明,免疫沉淀的靶抗原分子量为55kd,48kd和25kd的多肽,与亲和层析纯化出的靶抗原基本一致.