IL-37 抑制IL-18 在大鼠肺纤维化模型中的表达及意义的探讨

目的:初步研究博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中IL-37、IL-18 的表达水平,探讨其在PF 发生、发展中的表达及意义。方法:将45 只清洁级Wistar 大鼠按随机数字表法分为健康对照组(N 组)、博来霉素组(B 组)、地塞米松治疗组(D组),每组大鼠各15 只,B 组及D 组大鼠给予气管内注射博来霉素4 mg/ kg 制作肺纤维化模型,N 组给予相同体积生理盐水作为对照,D 组大鼠于肺纤维化造模基础上第2 天每日腹腔注射地塞米3 mg/ kg,N、B 组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照。各组大鼠分别于造模后第7、14、28 天处死,HE 染色评价肺组织病理形态学变化,碱水解法及酶联免疫吸附法分别测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)、IL-37 含量,RT-PCR 法测定肺组织中IL-18mRNA 表达量。结果: HE 染色显示B、D 组大鼠肺组织病理学改变由肺泡炎症逐渐发展为纤维化,B、D 组HYP 含量随时间推移逐渐升高,以第28 天为著(P<0.05);于B、D 组IL-37、IL-18mRNA 表达于第7 天升高至最高点,后逐渐降低,至第28 天均高于N 组,差异有统计学意义(P<0.05); D 组IL-37、IL-18mRNA 表达在同一时间均低于B 组(P<0.05)。结论:IL-37、IL-18 在大鼠肺纤维化发病早期起重要作用,可能参与了肺纤维化发生与发展。     

鲨肝刺激物质类似物对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:探讨重组鲨肝刺激物质类似物(r-sHSA)对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用及其作用机制。方法:利用腹腔注射CCl4制备小鼠急性肝损伤动物模型,以血清转氨酶活性以及组织病理变化为指标判断r-sHSA对化学性肝损伤的保护作用,并通过定量RT-PCR方法测定肝组织中相关细胞因子表达量的变化。结果:8~200μg/kg r-sHSA均可显著降低损伤小鼠血清转氨酶的活性,明显减轻肝细胞肿胀,减少中性粒细胞浸润,具有显著的肝保护作用,其机制可能与r-sHSA诱导TNF-α和肝细胞生长因子(HGF)表达,并下调TGF-β1的表达有关。结论:r-sHSA对CCl4致小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与细胞因子的表达调控有关。     

一种简单快速的cDNA文库构建方法

目的:建立一种以LDPCR(longdistancePCR)为基础的cDNA文库的快速构建方法。方法:以鲨鱼再生肝组织为材料获得总RNA,用偶联有Oligo(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含BamHⅠ酶切位点的Oligo(dT)16引物在逆转录酶MMLV的作用下合成cDNA第一链,进而利用末端转移酶在合成的cDNA第一链的3′末端引入polydC尾;以含BamHⅠ酶切位点的Oligo(dT)16和含HindⅢ酶切位点的Oligo(dG)10为引物,利用LDPCR合成双链cDNA,双链cDNA经BamHⅠ和HindⅢ双酶切,通过T4DNA连接酶连接到经相同双酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库,对文库的容量、重组率以及多样性进行分析。结果:通过本方法构建的cDNA文库容量约为5.84×105个/μgdscDNA,重组率为96.7%;对随机提取的30个克隆质粒的插入序列进行分析,共获得25个不同的cDNA序列,且未见重复序列。结论:本法构建的cDNA质粒文库具有快速、简单的特点,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析。     

条斑紫菜藻蓝蛋白抗氧化作用研究

目的研究条斑紫菜藻蓝蛋白的抗氧化作用。方法蓝蛋白对超氧阴离子自由基清除的能力;使用Fenton体系测定其对羟自由基(.OH)清除的能力;使用DPPH法测定其对二苯代苦味酰自由基清除的能力。结果紫菜藻蓝蛋白对超氧阴离子O2-.的清除率为33.79%;对.OH的清除率为92.71%;对二苯代苦昧酰自由基清除能力,其IC50为0.86mg/ml。结论紫菜藻蓝蛋白有较强的体外抗氧化活性,为其下一步活性研究与开发利用提供一定的试验基础。     

IL-35、Th17/Treg细胞失衡在大鼠肺纤维化中的表达及意义

目的研究IL-35、Th17/Treg失衡在大鼠肺纤维化中的表达及意义。方法随机将60只健康雌雄各半Wistar大鼠分为两组:对照组30只(生理盐水组)、肺纤维化组30只(博来霉素组),分别于实验第7天、第14天、第28天处死对照组、模型组各10只大鼠,留取各组大鼠肺组织、肺泡灌洗液,观察大鼠肺组织形态病理学变化(HE染色和Masson三色染色);测定支气管冲洗液及肺组织中Treg、Th17细胞,IL-35、IL-17表达水平,并分析IL-35与Th17/Treg的相互关系。结果 1.肺纤维化组与对照组相比,肺组织炎症程度、肺纤维化程度显著,肺部炎症以造模第7d最明显。2.两组相比,肺纤维化组IL-35、Treg细胞表达水平显著低于对照组,IL-17、Th17细胞表达显著高于对照组,差异均具有统计学意义。3.肺纤维化组IL-35与IL-17表达水平呈明显的负相关(r=-0.378,P0.01),IL-35与Treg细胞表达水平呈正相关(r=0.461,P0.01),IL-35与Th17/Treg细胞表达水平呈负相关(r=-0.386,P0.01)。结论本研究通过对大鼠肺纤维化组、对照组IL-35、IL-17、Th17/Treg细胞表达水平与相关性分析;提示IL-35可能参与肺纤维化Th17/Treg细胞平衡的调节,对IL-35的调控有可能成为肺纤维化治疗的新的靶点。     

NLRP3在博来霉素致大鼠肺纤维化中的作用

目的:探讨NLRP3在博来霉素致大鼠肺纤维化中的作用及意义。方法:将60只清洁级大鼠随机分为对照组(N组)、博来霉素组(B组)、地塞米松组(D组),B、D组大鼠气管内给予4 mg/kg博来霉素制作肺纤维化模型,N组给予相同体积生理盐水作为对照,D组大鼠于肺纤维化造模基础上第2天每日腹腔注射地塞米松3 mg/kg,N、B组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照。各组分别于造模后第1、7、14、28天处死大鼠,HE染色观察大鼠肺组织病理形态学变化,ELISA法测定各组大鼠肺组织不同时间点NLRP3含量。结果:NLRP3在N组呈低表达,B、D组NLRP3含量较N组明显升高,且于第7天达高峰后逐渐降低(P0.05)。结论:NLRP3在肺部炎症及肺纤维化形成密切相关。     

CCR6、Th9细胞、Th17/Treg细胞失衡在大鼠肺纤维化中的表达及意义

目的研究CCR6、Th9细胞、Th17/Treg失衡在大鼠肺纤维化中的表达及意义。方法采取随机分组原则将63只雄性SD大鼠分为三组:生理盐水对照组(N组)、肺纤维化模型组(F组)、地塞米松治疗组(D组),经气管内注入博来霉素制作大鼠肺纤维化模型,分别于第7d、第14d、第28d留取各组大鼠肺组织、肺泡灌洗液,应用HE染色观察大鼠模型肺组织病理改变;免疫组化法评价三组肺组织中CCR6、IL-9表达情况;荧光PCR法检测肺泡灌洗液PU.1mRNA水平,流式细胞术检测Th17、Treg的表达;并分析CCR6、Th9细胞与Th17/Treg的相互关系。结果1.F组、D组与N组相比,肺组织炎症程度、肺纤维化程度显著,肺部炎症以造模第7d最明显。2.对于CCR6、PU.1mRNA、IL-9、Th17,与N组相比较,F、D组大鼠不同时间点表达均明显增高(P0.05),以造模第7d最明显;F、D组大鼠Treg细胞表达水平较对照组降低(P0.05)。3.CCR6、Th9、PU.1mRNA表达水平与Th17有显著正相关性,与Treg有显著负相关(P均0.01)。结论本研究大鼠肺纤维化模型CCR6、Th9细胞与Th17/Treg比值各时间点表达水平较对照组均升高;推断CCR6、Th9细胞可能参与Th17/Treg失衡在肺纤维化免疫炎症的发生过程,进而促进肺组织纤维细胞增殖,在肺纤维化的发生机制中起到重要作用。     

肺一氧化碳弥散功能、D-二聚体与肺血栓栓塞症相关性研究

正近年来PTE作为呼吸科常见急症、危重疾病,其发病率正逐年增高,由于肺血栓栓塞症临床症状无明显特异性~([1]),导致其临床漏诊率高、检出率低。因此,使PTE患者得到早期诊断,提高诊断率,并获得及时正确治疗,可大大降低医院患者病死率,本研     

鲨肝刺激物类似物sHSA原核表达载体质粒稳定性的考察

研究原核表达载体pET-sHSA基因工程菌株传代50代过程中菌种的稳定性.采用LB液体培养基传代的方法考察了传代对菌种稳定性的影响.以菌体和菌落的形态、质粒稳定性(ST)、质粒酶切图谱及表达量等方面进行考察,以评价工程菌的稳定性.结果表明:pET-sHSA工程菌株在传代50代过程中具有较高的质粒稳定性.传代10代内质粒稳定性(ST)高达97%,传50代后质粒稳定性(ST)为82%.且重组产物表达量保持稳定,表达产物可达发酵液可溶性蛋白总量的40%,由此证明了表达载体pET-sHSA工程菌株具有传代稳定性,适合工业化生产.     

支气管哮喘患者呼出气一氧化氮、血清IL-36水平及其相关性

目的研究支气管哮喘患者呼出气一氧化氮(fraction exhaled nitric oxide,FeNO)、血清白细胞介素(IL-36)水平的变化,讨论两者在支气管哮喘患者中的相关性。方法收集自2016年06月-2016年12月佳木斯大学附属第一医院呼吸内科门诊及住院支气管哮喘患者33例(支气管哮喘组),健康体检者30例(对照组),NO分析仪检测FeNO,酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组血清中IL-36表达程度。结果支气管哮喘组FeNO 89.91±56.71ppb,血清IL-36 2.40±2.09ng/L;对照组FeNO 10.93±2.60ppb,血清IL-36 0.40±0.13ng/L。(1)支气管哮喘组FeNO水平显著高于对照组(P0.05)。(2)支气管哮喘组血清IL-36含量高于对照组(P0.05)。(3)支气管哮喘组患者FeNO与血清IL-36含量呈负相关(r=-0.408,P0.05)。结论FeNO在某种程度上反映支气管哮喘患者气道炎症,血清IL-36参与支气管哮喘的发病机制,为进一步分析联合检测FeNO与血清IL-36测定在支气管哮喘诊断中的临床意义提供理论依据。