特异性克隆编码多肽合成酶还原结构域基因的PCR方法

目的 采用基因组扫描的手段发现新型还原性多肽合成酶基因,并指导具有新型结构的还原性多肽抗生素的发现.方法 根据NRPS的PCP和RE结构域的保守氨基酸序列设计引物,采用PCR扩增的方法克隆还原性多肽合成酶潜在基因.结果 成功地克隆了与抗肿瘤抗生素阿嗪霉素B生物合成相关的NRPS基因I;对实验室保存的15株不同细菌菌株进行了基因组扫描,获得了5个新型的还原性多肽合成酶潜在基因.结论 建立了一种特异性克隆还原性多肽合成酶基因的PCR方法.     

H_2O_2体外抗棘阿米巴作用研究

目的检测H_2O_2的抗棘阿米巴(Acanthamoebaspp.)作用。方法自角膜炎患者角膜刮片分离获得棘阿米巴复合体(AcanthamoebaLugdunensis-Acanthamoebaquina)。于培养基(PYG)培养传代。实验前将棘阿米巴用新鲜的PYG培养1d使其活化,配成2.5×10~6/ml细胞悬液加入细胞培养板,实验组各孔分别加入不同浓度H_2O_2,对照组加等量PYG,28℃24h后实验组更换新鲜PYG继续培养3d。取细胞悬液滴片,瑞氏染色,观察细胞形态变化。用定量培养法作棘阿米巴生长曲线,观察其增殖速率。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,观察H_2O_2对棘阿米巴成活率的影响。用乳酸脱氢酶(LDH)测定法测定H_2O_2对棘阿米巴的损伤。结果棘阿米巴滋养体在0.125％H_2O_2作用下,不可逆转地成为包囊,20～120h增殖率为0;1％H_2O_2可使其破裂。结论H_2O_2具有较强的抗棘阿米巴作用,有可能成为预防棘阿米巴角膜炎的理想药物。     

天然产物的生物合成和组合生物合成研究进展

天然产物一直在药物的发现和发展过程中发挥着重要作用.化学合成作为增加天然产物结构多样性的传统方法,工艺繁杂.组合生物合成正逐渐成为药物研发的重点,与化学合成相比,其目标产物可以由重组菌株发酵大量生产,因而降低了生产成本和环境污染.本文综述了以生物合成为基础的组合生物合成研究策略,并以几种天然产物的研究为例介绍了相关的研究进展.