中药结合介入手段治疗肝癌的研究进展

介入方式治疗肝癌以创伤小、局部作用明显等优势成为非手术治疗肝癌的首选治疗方式。但因药物疗效、肝癌的生物学特性等原因,其疗效不尽如人意。中药与介入手段结合治疗肝癌的研究越来越受到重视。从治疗方式的角度,回顾了近十年来中药结合介入手段治疗肝癌动物实验及临床研究进展,指出中药结合介入手段治疗原发性肝癌具有独特优势。     

Iressa和Gleevec增敏Lexatumumab诱导肝癌细胞凋亡的研究

摘 要：［目的］ 研究酪氨酸激酶抑制剂Gleevec或Iressa增敏DR5激动剂Lexatumumab诱导肝癌细胞凋亡的效果及机制。［方法］ 体外培养肝癌LH86细胞株。分为对照组、TKI处理组、Lexatumumab 处理组、TKI+Lexatumumab处理组。用亚致死剂量的TKI或者Lexatumumab或者TKI+Lexatumumab同时处理细胞,通过荧光显微镜观察对照组和处理组细胞内细胞核凋亡形态变化情况。然后计数凋亡细胞,统计凋亡率。免疫印迹（Western blot）方法检测细胞凋亡标志性蛋白Caspase 3 切割条带在各组中的表达,促凋亡蛋白Bim、Bax以及抗凋亡蛋白在各处理组中的表达,以评估TK抑制作用对死亡受体信号通路诱导细胞凋亡的影响。［结果］在荧光显微镜下,可以观察到Gleevec、Iressa或Lexatumumab单独处理细胞不能够诱导LH86肝癌细胞核出现固缩凝聚现象。抑制剂Gleevec或Iressa 与Lexatumumab联合应用能够显著逆转诱导的肝癌细胞凋亡(Gleevec和Lexatumumab诱导凋亡率：39.23%,P<0.001;Iressa和Lexatumumab诱导凋亡率：37.5%,P<0.0001)。TKI和Lexatumumab诱导的细胞凋亡为Caspase依赖性。TKI和Lexatumumab诱导的细胞凋亡特异性诱导Bcl-2家族蛋白Bim上调。对Bax和Bcl-xl没有影响。［结论］ 肝癌细胞对Gleevec/Iressa或Lexatumumab单一制剂具有凋亡抗性。酪氨酸激酶抑制剂均能够增敏Lexatumumab诱导的细胞凋亡。这种联合诱导的细胞凋亡作用具有Caspase依赖性。TKI增敏的死亡受体介导的凋亡可能与促凋亡蛋白Bim上调有关。     

水通道蛋白在肝纤维化及肝硬化进程中的作用

肝硬化是各种慢性肝脏疾病的最终病理结果,多种细胞、细胞因子和微小RNA参与肝纤维化、肝硬化的发生和进展。肝纤维化与病理性血管生成相互依存、促进,肝纤维化动脉毛细血管增殖的病理生理机制尚不清楚,水通道蛋白不仅转运水而且促使新生血管形成。简述了水通道蛋白在肝胆系统表达及其生理生化特征,总结了水通道蛋白在肝纤维化、肝硬化进程中的作用,以期为水通道蛋白成为肝纤维化、肝硬化治疗靶点提供新的思路和指导。     

斑蝥提取物通过细胞周期G2/M期阻滞诱导人胆管细胞癌QBC939细胞凋亡

目的:研究斑蝥提取物(cantharis extract,CTE)体外诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡作用及其对细胞周期分布的影响。方法:体外培养人胆管细胞癌QBC939细胞,CTE作用于QBC939细胞48小时,利用CCK-8法检测QBC939细胞增殖率并计算半数抑制浓度(IC50);光学显微镜下观察细胞形态的改变;AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡情况;用PI染色检测对QBC939细胞周期分布的影响;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化。结果:CTE显著抑制QBC939细胞增殖,呈浓度及时间依赖性,处理48小时的IC50为4.16μg/ml。经光学显微镜下观察可见随着药物浓度增加,细胞密度减少,游离变圆的细胞明显增多。AnnexinⅤ/PI双染流式凋亡检测示,随着药物浓度的增加,凋亡细胞数量逐渐增加,药物处理组(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml)的细胞凋亡率分别为(9.52±1.01)%、(15.62±1.88)%、(46.03±4.88)%,与对照组(4.59±0.43)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。PI检测细胞周期示,CTE能将QBC939细胞周期阻滞在G2/M期,随药物浓度增加而增加,G2/M期细胞比例逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义,而G1期细胞比例逐渐减少。Western blot检测示,CTE处理组细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)表达降低,相对蛋白表达量与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2家族蛋白Bax和Bid表达增加,而Bcl-2、Mcl-1表达降低,抑制凋亡蛋白家族蛋白Survivin表达显著下降,凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达下降,与对照组比较CTE处理组上述相对蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);CTE处理组细胞周期相关蛋白Chk1表达无显著改变,相对蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05),磷酸化的Chk1蛋白及p53蛋白表达逐渐增加,相对蛋白表达量与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CTE显著抑制QBC939细胞增殖,诱导QBC939细胞凋亡,其可能机制与CTE调节凋亡相关蛋白表达,同时调节肿瘤细胞周期相关。     

~(125)I放射性粒子持续照射抑制HepG2肝癌细胞增殖的作用机制

目的探讨~(125)I放射性粒子持续照射抑制HepG2人肝癌细胞增殖的作用及诱导凋亡的可能潜在机制。方法以HepG2人肝癌细胞为研究对象,用~(125)I放射性粒子体外照射装置进行持续照射。初始剂量率为5.32 c Gy/h,分别给予0、2及4 Gy照射。通过光镜及Hoechst33258染色观察形态学改变;采用克隆形成实验计算克隆形成率;利用划痕实验检测细胞迁移能力的变化;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。用Western Blot法检测凋亡相关蛋白表达。2组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果经0、2、4 Gy~(125)I放射性粒子照射HepG2细胞后,用光学显微镜发现4 Gy组细胞密度减少,球形游离死亡细胞数目增多;经Hoechst33258染色后发现4 Gy组可见核固缩、碎裂及边集等凋亡细胞的典型特征。克隆形成实验发现对照组、2Gy组和4Gy组的克隆形成数分别为(120.00±3.61)%、(112.00±2.00)%、(45.00±3.61)%,3组比较差异有统计学意义(F=508.90,P0.001)。划痕愈合实验示,对照组、2 Gy组和4 Gy组的细胞迁移率分别为(21.24±4.36)%、(19.93±3.37)%和(11.42±0.65)%,3组细胞迁移率比较差异有统计学意义(F=8.29,P0.001)。流式凋亡检测示,对照组、2Gy组及4Gy组的HepG2细胞凋亡率分别为(4.33±0.67)%、(6.90±1.31)%和(17.03±1.43)%,3组比较差异有统计学意义(F=110.01,P0.001)。Western Blot检测结果示,~(125)I粒子照射组显著抑制肿瘤增殖相关蛋白PCNA、凋亡蛋白Survivin及Bcl-2的表达,增加促凋亡蛋白Bak、Bax的表达。结论~(125)I放射性粒子通过促进HepG2细胞凋亡,抑制增殖及迁移,从而抑制HepG2细胞的生长,其可能机制与凋亡相关蛋白表达抑制等因素相关。     

丙酮酸激酶M2在肝癌发病及诊疗中的作用

近几年研究发现,丙酮酸激酶(PK)M2在多种肿瘤组织细胞中表达显著增加,在肿瘤细胞内起到信号分子的作用,参与肿瘤细胞增殖相关基因的表达、调控、细胞自噬以及细胞周期进程等过程。总结了PKM2在肝癌组织及肝癌细胞系中的表达情况,分别阐述了PKM2在肝癌细胞增殖、分化、转移以及临床预后评价中的作用,认为其在肝癌临床诊断、治疗以及预后评价中具有潜在价值。     

细胞凋亡在结肠癌治疗中作用的研究进展

摘 要：在中国,结肠癌发病率仅次于胃癌。对结肠癌目前仍没有有效的治疗方法。早期手术切除后易复发和放化疗无效是目前亟待解决的问题。细胞凋亡（细胞程序性死亡）异常通常被认为是人类恶性肿瘤发生的根源所在,也是导致结肠癌对放化疗不敏感的重要因素。因此,探明结肠癌细胞内凋亡异常信号通路,找到关键调节靶分子,将有助于结肠癌的预防、诊断和治疗。本文通过归纳分析当前已报道结肠癌相关凋亡调节因子以及相应药物制剂的研究进展,以期为结肠癌临床细胞凋亡治疗提供有价值的线索和思路。     

索拉非尼对宫颈癌细胞的增殖抑制作用及对PCNA、Survivin表达的影响

目的 探讨索拉非尼对宫颈癌细胞株增殖和凋亡的影响。方法体外培养宫颈癌HeLa、SiHa细胞株,实验分为空白对照组、阴性对照组（DMSO）和索拉非尼（0、25、5、10、20 μmol／L）处理组。光学显微镜观察各组细胞形态学改变;Hoechst荧光染色观察凋亡细胞核的形态学变化;采用MTS法检测索拉非尼对HeLa和SiHa细胞的增殖抑制作用;免疫细胞化学法检测索拉非尼（10 μmol／L）处理HeLa、SiHa细胞48 h后Survivin蛋白的表达;Western blotting检测索拉非尼对宫颈癌HeLa、SiHa细胞PCNA、Survivin蛋白表达的影响。结果不同浓度索拉非尼作用48 h后,HeLa、SiHa细胞出现了凋亡形态学改变;Hoechst染色显示,HeLa、SiHa细胞的胞核变小、固缩,荧光明显增强。MTS检测显示,索拉非尼可抑制宫颈癌HeLa、SiHa细胞增殖,并呈浓度依赖性（P＜0.05）。免疫细胞化学法检测显示,阴性对照组Survivin在HeLa和SiHa细胞中的平均光密度值分别为0.19±0.05和0.17±0.07,与索拉非尼处理组的0.13±0.01和0.13±0.03比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Western blotting检测显示,索拉非尼在蛋白水平上能够降低PCNA、Survivin表达,且这种下调作用具有浓度依赖性。结论索拉非尼能诱导HeLa、SiHa细胞凋亡,抑制其增殖且呈浓度依赖性,其机制可能与下调癌基因 PCNA、Survivin表达有关。     

MAPK信号通路在肝癌发生发展及治疗中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的异常活化与肝癌的发生、发展、转移密切相关。介绍了MAPK通路蛋白在肝癌中的表达及其在肝癌增殖、分化、转移中的作用,阐述了MAPK信号通路在肝癌治疗及预后评价中的价值。认为MAPK信号通路在肝癌的发生发展及治疗中发挥非常重要的作用,是肝癌治疗及预后评价的潜在分子靶点。