T淋巴细胞检测对非结核分枝杆菌病的诊断价值

目的 分析应用流式细胞学检测T淋巴细胞在非结核分枝杆菌(NTM)病诊断中的价值。方法 收集2013年1月至2019年3月西安市胸科医院经临床综合诊断确诊的162例NTM肺病(NTM组)、143例菌阳肺结核(肺结核组)、146例结核性胸膜炎(结核性胸膜炎组)、81例结核性脑膜炎(结核性脑膜炎组)、175例其他肺部疾病(对照组,包括细菌性肺炎101例、支原体肺炎58例、支气管扩张症11例、尘肺5例)患者的T淋巴细胞流式细胞检查结果并进行比对分析,总结流式细胞学检测NTM肺病患者T淋巴细胞的特点。应用SPSS 23.0软件进行统计学方析,非正态分布的计量资料以中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]表示,采用非参数Kruskal-Waills H检验比较5组患者,以及NTM组分别与其他4组患者T淋巴细胞流式细胞检查结果的差异,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 NTM组、肺结核组、结核性胸膜炎组、结核性脑膜炎组、对照组患者的总T淋巴细胞计数分别为1276.00(987.00,1563.00)、907.00(661.00,1231.25)、793.00(556.50,1080.75)、574.00 (296.00,883.00)、1904.00 (1611.50,2093.50)个/μl,CD4 ⁺T淋巴细胞计数分别为868.00(599.00,997.00)、546.00(384.75,744.00)、445.00(301.75,645.00)、294.00 (134.00,462.00)、1497.00 (925.50,1757.50)个/μl,CD8 ⁺ T淋巴细胞计数分别为369.00(252.00,573.00)、289.50(192.00,400.75)、303.50(206.75,441.00)、243.00(119.00,427.00)、417.00(279.50,644.50)个/μl,CD4 ⁺CD8 ⁺ T淋巴细胞计数分别为11.00(7.00,18.00)、6.00(4.00,11.00)、8.00(6.00,13.00)、5.00(2.00,9.00)、9.00(6.00,12.50)个/μl,各组数据均以对照组最高,NTM组次之,各结核病组最低;且5组间及NTM组与肺结核组、结核性胸膜炎组、结核性脑膜炎组、对照组患者在总T淋巴细胞、CD4 ⁺ T淋巴细胞、CD8 ⁺T淋巴细胞数值的差异均有统计学意义(H=339.898、5.291、6.968、8.323、-7.662,P值均=0.000;H=384.960、5.973、8.777、10.128、-6.641,P值均=0.000;H=66.345、4.632、3.503、5.530、-0.897,P值均<0.05), 5组间及NTM与肺结核组、结核性胸膜炎组、结核性脑膜炎组患者在CD4 ⁺CD8 ⁺ T淋巴细胞差异均有统计学意义(H=59.508、5.453、3.189、6.824,P值均=0.000)。 结论 NTM肺病患者T淋巴细胞计数低于其他肺部疾病(对照组)患者,高于3组结核病患者,可辅助判断患者免疫状况,具有一定的辅助诊断价值。     

结核分枝杆菌利福平基因型药敏和表型药敏检测结果不一致原因分析

目的: 探讨荧光PCR探针熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)与微孔板法检测利福平药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果不一致的原因,为临床基因型与表型药敏结果不一致提供解释。 方法: 收集2019年8月至2020年9月西安市胸科医院收治的分枝杆菌培养阳性的结核病患者资料,共2562例,筛选同时进行利福平熔解曲线法耐药基因检测和微孔板法表型药敏试验且结果不一致的菌株1294株。通过对rpoB基因测序,分析不一致结果与rpoB基因突变位点的相关性。 结果: 54例(4.17%,54/1294)熔解曲线法与微孔板法检测结果不一致的患者中,45例为熔解曲线法检测突变型而微孔板法检测敏感,8例为熔解曲线法检测野生型而微孔板法检测耐药,1例熔解曲线法检测出异质性耐药,未纳入分析。其中rpoB基因在507~512位密码子发生突变时,其与微孔板法结果不一致率最高,为70.59%(24/34),且不一致的菌株在微孔板法中最低抑菌浓度(MIC)的测定值多分布在≤1μg/ml。Leu511Pro是观察到不一致菌株最多的突变位点,占45.28%(24/53),其次观察到较多的突变位点是Leu533Pro,占所有不一致菌株的15.09%(8/53),Asp516Tyr 和His526Asn突变率均为5.66%(3/53)。8例熔解曲线法检测敏感而微孔板法检测耐药的菌株进行测序,结果显示rpoB基因区域未发生突变。结论: rpoB基因Leu511Pro、Leu533Pro、Asp516Tyr和His526Asn位点突变是造成临床结核分枝杆菌基因型与表型药敏结果不一致的主要原因,但其是否与低水平耐药机制有关还需要进一步研究。     

新型国产改良Middlebrook液体培养试剂对结核分枝杆菌培养效果的评价

目的: 评价新型国产改良Middlebrook液体培养试剂用于临床样本中结核分枝杆菌培养的效果。方法: 采集2021年3—4月西安市胸科医院诊治的疑似肺结核患者痰液和肺泡灌洗液标本,对其中质量合格的89份痰液标本和61份肺泡灌洗液标本进行分枝杆菌改良试剂培养(改良试剂法)和BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)培养。比较两种方法检测分枝杆菌的阳性率、报阳时间和污染率差异,并以MGIT 960培养结果为参照标准,评价改良试剂法的检测效能。结果: 改良试剂法检测痰液和肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌的总阳性率[44.7%(67/150)]和报阳时间[中位数(四分位数):13.0(8.5,17.0)d]与MGIT 960培养结果[分别为42.7%(63/150)和13.0(8.0,17.5)d]相比,差异均无统计学意义(χ²=0.571,P=0.453;Z=-1.344,P=0.179)。两种方法检测肺泡灌洗液标本均未出现污染,但改良试剂法检测痰液标本的污染率[12.4%(11/89)]明显高于MGIT 960培养[4.5%(4/89)],差异有统计学意义(χ²=4.000,P=0.039)。 改良培养试剂的成本[(49.6±10.5)元/份]仅约为MGIT 960培养试剂[(75.4±15.8)元/份]的60%。以MGIT 960培养结果为参照标准,改良试剂法检测痰液和肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌的总敏感度为96.9%(62/64)、总特异度为94.2%(81/86),Kappa值为0.905,一致性好。结论: 分枝杆菌改良Middlebrook液体培养试剂检测痰液和肺泡灌洗液标本与MGIT 960培养诊断结核病的一致性好,但应注意痰液标本检测污染率较高的问题。     

IS6110基因缺失结核分枝杆菌感染的肺结核一例

分子生物学检测方法因其具有检测敏感度高、特异性强和时效性高等特点,成为结核病快速诊断的重要检测手段。对于分子生物学检测,寻找检测效率高且存在特异性的靶基因尤为重要,分子检测靶基因的种属特异性和多拷贝序列是确保检测结果准确性和高效性的重要因素。     

荧光PCR探针熔解曲线技术检测涂阳患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的价值

目的 评估荧光PCR探针熔解曲线(MeltPro)技术检测涂阳患者痰标本中MTB耐药性的效能。方法 收集2016年9月至2018年8月西安市胸科医院500例痰涂片阳性患者的痰标本,分别进行痰涂片镜检、GeneXpert MTB /RIF检测、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)液体培养、表型药物敏感性试验(简称“药敏试验”),并应用MeltPro法检测痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼、二线注射类和氟喹诺酮类等抗结核药物的耐药性,并以表型药敏试验为标准,评价MeltPro法的检测效能。结果 以表型药敏试验结果为标准,MeltPro法检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为98.7%(76/77)和94.2%(343/364),检测对异烟肼耐药性的敏感度和特异度分别为82.3%(102/124)和96.2%(304/316),检测对阿米卡星耐药性的敏感度和特异度分别为8/9和99.5%(432/434),检测对卷曲霉素耐药性的敏感度和特异度分别为6/7和99.1%(432/436),检测对左氧氟沙星耐药性的敏感度和特异度分别为90.6%(48/53)和99.2%(386/389),检测对莫西沙星耐药性的敏感度和特异度分别为88.1%(37/42)和96.5%(386/400)。以表型药敏试验结果为标准,GeneXpert MTB/RIF检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为94.8%(73/77)和94.0%(342/364)。GeneXpert-MTB/RIF和MeltPro法与表型药敏试验结果一致性均较好(Kappa值分别为0.81和0.84),但MeltPro法检测效能与表型药敏试验检测结果的一致性更高。结论 MeltPro法检测涂阳患者痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼,以及二线注射类和氟喹诺酮类抗结核药物耐药性有较好的效能。     

荧光PCR探针熔解曲线法与微孔板法检测MTB耐药性的临床应用比较

目的 分析荧光PCR探针熔解曲线法与微孔板法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)检测结核分枝杆菌(MTB)对抗结核药品耐药性结果的一致性及MTB基因突变与耐药的相关性,为临床诊疗优化提供参考。方法 搜集2019年1—12月分离自西安市胸科医院就诊患者并经鉴定确认的343株MTB临床分离株,菌株均进行了微孔板法药敏试验和荧光PCR探针熔解曲线法检测。以微孔板法药敏试验结果为参照,评价荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、莫西沙星和左氧氟沙星耐药性的检测效能,并分析荧光PCR探针熔解曲线法检测的MTB基因突变与微孔板法药敏试验最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)的相关性。结果 以微孔板法药敏试验结果为参照,荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、莫西沙星和左氧氟沙星耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为:96.20%(76/79)、95.28%(242/254)、0.88;93.62%(44/47)、94.58%(279/295)、0.79; 96.88%(62/64)、94.96%(264/278)、0.86;93.33%(14/15)、95.37%(309/324)、0.61;92.31%(24/26)、97.16%(308/317)、0.80;91.18%(31/34)、99.35%(307/309)、0.92。荧光PCR探针熔解曲线法检测结果与微孔板法表型药敏试验检测结果不一致的菌株中,发生异烟肼AhpC启动子区(-44~-30及-15~3位点),利福平rpoB基因507~512位点,链霉素rrs基因905~908位点多位点突变和乙胺丁醇embB基因406位点突变的菌株,表型药敏试验耐药率较低,分别为1/5、1/5、1/10和1/5;而发生异烟肼KatG基因315位点、利福平rpoB基因529~533位点、链霉素rpsL基因43位点突变的菌株,表型药敏试验耐药率较高,分别为92.42%(61/66)、92.31%(36/39)和95.74%(45/47)。结论 荧光PCR探针熔解曲线法与微孔板法药敏试验检测MTB对抗结核药品耐药性结果具有较好的一致性;MTB对异烟肼、利福平、链霉素的耐药与其部分基因突变具有一定相关性。     

应用低温等离子技术灭活体外结核分枝杆菌效果的初步研究

目的:初步探讨低温等离子技术在体外实验中对不同类型结核分枝杆菌的杀灭效果,旨在为结核分枝杆菌的杀灭提供新的技术和方法。方法:将结核分枝杆菌标准株(H37Rv)、广泛耐药结核分枝杆菌(extensive drug-resistant Mycobacterium tuberculosis,XDR-MTB)、耐多药结核分枝杆菌(multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis,MDR-MTB)菌液接种在培养基上,于培养3周内配置成0.5麦氏浓度的菌悬液,再倍比稀释为试验用菌悬液,分别取2.0 ml菌悬液样品置于无菌试管中;分别采用低温等离子系统PLACOAG(止血、凝固)模式对菌悬液行0、3、6、9、12、15 s处理,随后放入培养箱,21 d后分别计算各组不同作用时间存活的菌落数、杀菌对数值及杀菌率。结果:(1)H37Rv菌株(F=20.313,P=0.003)、XDR-MTB菌株(F=13.956,P=0.006)及MDR-MTB菌株(F=20.355,P=0.006)不同作用时间杀菌对数值差异均有统计学意义;3种菌株在作用9 s时杀菌对数值比...     

DNA实时荧光恒温扩增法联合检测对结核性胸膜炎的早期诊断价值

目的:分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称“恒温扩增法”)联合腺苷脱氨酶(adenosine deaminase, ADA)、外周血结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测对结核性胸膜炎患者早期诊断的价值。方法:采用回顾性研究方法,选取2020年1月至2021年12月西安市胸科医院收治的不明原因胸腔积液患者427例作为研究对象。所有研究对象均进行胸腔积液恒温扩增法、胸腔积液ADA、胸腔积液结核分枝杆菌培养和外周血T-SPOT.TB检测。以临床综合诊断作为参考标准,评价恒温扩增法联合ADA、外周血T-SPOT.TB对结核性胸膜炎的早期诊断价值。结果:427例研究对象中,279例(65.3%)确诊为结核性胸膜炎(结核性胸膜炎组),148例确诊为非结核性胸膜炎(非结核性胸膜炎组)。ADA的最佳诊断界值为19.5 U/L。单一检测方法中,恒温扩增法的特异度为100.00%,敏感度为31.54%,与结核分枝杆菌培养类似(分别为100.00%和30.11%)。胸腔积液ADA和外周血T-SPOT.TB检测的敏感度分别为74.91%和84.95%,特异度分别为87.16%和74.91%。ADA+...     

实时荧光RNA恒温检测在气管支气管结核疗效监测中的应用价值

目的:分析实时荧光RNA恒温检测技术(SAT-TB)和实时荧光定量PCR检测技术(qRT-PCR)在气管支气管结核患者治疗早期对抗结核治疗效果的监测作用。方法:收集2021年1—12月在西安市胸科医院完成治疗的168例初治气管支气管结核患者,分析其中每2周做1次气管镜的94例病原学阳性患者的初入院(基线)及治疗2、4、6、8、10和12周时支气管肺泡灌洗液标本的分枝杆菌MGIT 960培养、SAT-TB和qRT-PCR的检测结果;并以MGIT 960培养结果为参照标准,分析SAT-TB和qRT-PCR检测结果的动态变化规律及检测效能。最后对168例患者培养阴转时间与首次SAT-TB法测定的探测时间(dt值)之间的关系进行分析。结果:分析每2周做1次气管镜检查的94例患者检测结果显示,MGIT 960培养在基线至治疗12周检测的阳性率从87.23%(82/94)下降至1.06%(1/94),下降幅度为98.78%(81/82);qRT-PCR从92.55%(87/94)下降至29.79%(28/94),下降幅度为67.81%(59/87);SAT-TB法从93.62%(88/94)下降至...