肺癌基础研究的几个热点

肺癌是严重危害人类生命健康的疾病,在发达国家和我国大城市肺癌已占恶性肿瘤死亡的首位。以北京为例,10年间肺癌病死率快速增长,男性增长26.85％,女性增长35.96％。虽然30年来手术方法、化疗及放疗不断进步,但肺癌5年生存率仅达到13％,因而人们对肺癌的诊断及生物治疗寄予厚望。目前的研究热点很多,现将我们能有所作为的概述如下。     

干扰COX-2基因表达对人肺腺癌A2细胞体外恶性增殖的影响

背景与目的 COX-2在多种肿瘤组织中高表达,参与了肿瘤的发生发展,RNA干扰(RNAi)技术是一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段.本研究应用RNAi技术研究干扰COX-2基因表达的抑制效果及抑制COX-2基因表达对A2细胞体外恶性增殖的影响.方法 以COX-2为靶点,构建3个带有人U6启动子的COX-2小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)表达载体.用脂质体lipofectamine介导,分别将3个siRNA表达载体及空载体转染到COX-2表达阳性的A2细胞,建立转染细胞株.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测COX-2表达水平的变化.通过细胞生长曲线、集落形成试验研究干扰COX-2基因表达对A2细胞体外增殖的影响.结果 经过PCR扩增、内切酶鉴定、DNA测序和BLAST比对证实3个siRNA和U6启动子序列正确并准确克隆到pEGFP载体.转染细胞株分别命名为A2-3、A2-7、A2-10和A2-P.转染后24 h、48 h、72 h,A2-P细胞均有绿色荧光表达,而A2-3、A2-7、A2-10细胞均未观察到绿色荧光.RT-PCR和Western blot结果显示,3个siRNA表达载体均发挥作用,COX-2表达受到抑制.与A2细胞比较,A2-3、A2-7、A2-10细胞的COX-2 mRNA表达量分别降低15.6%、20.4%和64.2%,COX-2蛋白表达量分别降低23.7%、36.7%和60.2%.细胞生长曲线、集落形成试验的结果显示,A2-10细胞生长减慢,集落形成率减少,而A2-3和A2-7细胞生长没有明显的改变.结论 应用RNAi技术熄灭COX-2基因表达对A2细胞的体外恶性增殖有明显的抑制作用.     

外源性野生型p53基因对人肺癌细胞生长的抑制

目的观察外源性野生型ｐ５３基因对有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法用多聚酶链反应单链构象多态性及ＤＮＡ测序，选择ｐ５３基因突变的人肺巨细胞癌系８０１Ｄ为受体细胞。构建野生型ｐ５３表达质粒ＰＺＩＰｎｅｏＳＶｐ５３。用基因枪介导外源基因。建立转染细胞系８０１Ｄｐ５３。用聚合酶链反应检测外源基因，观察转染细胞恶性生长的变化。结果转染细胞系８０１Ｄｐ５３体外长期传代有ｎｅｏ基因及外源ｐ５３基因存在，转染细胞生长明显受到抑制，克隆形成抑制率达９６％，裸鼠异种移植致瘤性降低，肿瘤生长明显缓慢。结论外源性野生型ｐ５３经基因枪导入有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞后可长期存在于转染细胞中，且明显抑制转染细胞的恶性生长     

肺结核患者血清中MMP-9、VEGF的水平及其意义的探讨

目的通过检测肺结核患者血清中的MMP-9、VEGF水平．讨论二者与肺结核临床特点的关系。方法采用ELISA方法检测活动性肺结核患者、肺癌患者及健康人血清MMP-9、VEGF水平。结果①肺结核患者血清MMP-9、VEGF水平显著高于健康人（P〈0．001），但显著低于肺癌患者水平（P〈0．001）；②痰菌阳性结核组血清中MMP-9、VEGF水平较痰菌阴性结核组明显增高（P〈0．05）；肺内病变广泛组血清MMP-9、VEGF水平较肺内病变局限组明显增高（P〈0．05）：肺内病变有空洞组血清MMP-9水平较肺内病变无空洞组明显增高（P〈0．05）。而血清VEGF水平在两组间无明显差别：③血清MMP-9、VEGF水平诊断活动性肺结核的敏感性和特异性均较高。结论活动性肿结核患者血清MMP-9、VEGF水平与肺结核临床特点密切相关．是具有较高价值的标志物．     

肺癌患者血清基质金属蛋白酶-9、内皮抑素、血管内皮生长因子的变化及其临床意义

目的 测定肺癌患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、内皮抑素(endostatin,ES)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,探讨其在肺癌中的特异性及其与化疗的关系.方法 应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定3种因子在144例肺癌患者血清中的表达.结果 肺癌患者血清MMP-9、ES、VEGF分别为(678.06±38.79)ng/ml、(124.90±3.33)ng/ml及(809.81±129.43)pg/ml,显著高于对照组的(90.07±13.55)ng/ml、(61.0±5.15)ng/ml及(368.68±5.82)pg/ml,以及肺良性病变者的(228.96±15.39)ng/ml、(91.43±4.44)ng/ml及(490.14±14.58)pg/ml(P＜0.001);肺癌患者血清MMP-9、ES及VEGF水平与肿瘤组织类型、有无远处转移、临床分期及原发肿瘤大小相关(P＜0.05);化疗后3种因子分别为(569.23±100.08)ng/ml、(141.36±14.51)ng/ml及(680.94±130.47)pg/ml,与化疗前的(726.28±94.11)ng/ml、(127.86±13.24)ng/ml及(1415.01±587.22)pg/ml相比有显著性差异(P＜0.001);肺癌患者血清MMP-9与ES水平呈正相关(r=0.260,P=0.012).结论 肺癌患者血清MMP-9、ES、VEGF水平明显升高,在肺癌的病理疾病过程中有特殊意义,可作为预测肺癌恶性度和治疗反应的良好指标.     

原发性肺癌GSTM1基因多态性与化疗效果关系的研究

背景与目的GSTM1参与环境污染物如苯丙芘和其它多环芳烃及抗癌药等的代谢,其多态性是否会影响肺癌患者的化疗效果及预后,国内相关研究比较少,本研究旨在揭示GSTM1多态性是否与化学药物治疗的敏感性有关以及对患者预后的影响。方法采用聚合酶链反应技术,检测接受化学药物治疗的137例原发性肺癌患者GSTM1基因型频率分布情况。结果137例肺癌患者GSTM1缺陷型频率为58.4%（80/ 137）,功能型频率为41.6%（57/137）;化疗有效组GSTM1缺陷型频率为69.05%（58/84）,化疗无效组GSTM1缺陷型频率为41.51%（22/53）,二者有统计学差异（P=0.001）。采用铂类化疗方案的患者,化疗有效组GSTM1缺陷型频率为65.43%（53/81）,化疗无效组GSTM1缺陷型频率为42%（21/50）,二者有统计学差异（P= 0.0025）。对于进展期患者化疗有效组GSTM1缺陷型频率为70.13%（54/77）,化疗无效组GSTM1缺陷型频率为41.51%（22/53）,二者有统计学差异（P=0.001）。当化疗有效时携带GSTM1功能型的鳞癌、小细胞癌患者生存时间（中位生存期分别为42个月和14个月）比携带GSTM1缺陷型的鳞癌、小细胞癌患者长（中位生存期分别为6个月和7个月）（P〈0.05）;而腺癌患者,携带GSTM1功能型和缺陷型的生存时间（中位生存期分别为13个月和11个月）差异无统计学意义（P〉0.05）。对于化疗无效的患者,不论GSTM1为何种基因型、病理分型如何,患者中位生存期均比较接近,生存时间没有统计学差异（P〉0.05）。结论GSTM1缺陷型的患者接受化学药物治疗的效果比GSTM1功能型的患者好;采用铂类化疗方案时GSTM1缺陷型的患者化疗效果比GSTM1功能型的患者好。当化疗有效时,患者生存时间与病理分型、GSTM1基因型相关。