miR-302 b-3 p靶向AKT1调节皮肤成纤维细胞衰老的作用机制

目的 探讨miR-302b-3p靶向丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)1调节皮肤成纤维细胞衰老的作用及其分子机制.方法 建立复制性细胞衰老模型后,采用real-time PCR法检测细胞miR-302b-3p的表达情况;采用生物信息学软件分析miR-302b-3p的靶基因;分别将miR-302b-3p模拟物(mimic)及抑制剂(inhibitor)转染皮肤成纤维细胞后,β-半乳糖苷酶染色分析细胞衰老情况,qRT-PCR法检测AKT1 mRNA表达水平,Western印迹法检测AKT1蛋白表达情况.结果 与对照组比较,复制性衰老皮肤成纤维细胞中miR-302b-3p显著升高.转染miR-302b-3p mimic后,细胞衰老阳性染色细胞数目显著增加(P<0.01).AKT1为miR-302b-3p的预测靶基因.当细胞上调miR-302b-3p表达时,靶基因AKT1 mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05).反之,当细胞下调miR-302b-3p表达时,靶基因AKT1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05).结论 miR-302b-3p可能通过靶向抑制AKT1表达调节皮肤成纤维细胞的衰老.     

将局解后的头颅制成水平切颅骨标本的方法

【目的】 为了提高医学生操作能力和补充实验教学的需要,利用局部解剖学实验后的头颅标本制成颅骨水平切标本。 【方法】 将局部解剖学实验后的头颅,去除附着在脑颅骨表面的肌肉及软组织,暴露脑颅骨,紧贴两侧眉弓上方、枕外隆凸上2~2.5 cm作一截面,沿此截面锯开颅骨,取出脑组织,剥离脑硬膜。于平舌骨下方将颈部锯开,使颅底与尸体分离。将颅盖和颅底放入不锈钢桶内,加10%碳酸钠溶液煮沸1~2 h,取出颅骨,剔除颅骨表面易除去的组织,摘下眼球,继续煮沸1~2 h,再次取出颅骨,分离出下颌骨、舌骨后剔除颅骨表面剩余组织。将颅骨放入加酶洗衣粉与洗洁精各5%混合液中先浸泡1 h,再煮沸1 h,去除眼眶及鼻腔内的软组织,再煮沸0.5 h,捞出颅底,剔除孔、裂、管处的组织。将颅骨置于流水下用钢丝球擦洗除鼻腔,眼眶外的颅骨表面残留的骨膜。颅骨置于流水下冲洗24 h后沥干。置于丙酮中脱脂,双氧水中漂白。在颞骨、下颌骨和枕骨打孔后,用弹簧、螺丝和线,连接下颌骨,颅盖和颅底,制成水平切颅骨标本。 【结果】 采用上述方法保证了舌骨、下颌骨、颅盖和颅底为同一个体,便于观察颅骨的整体观;翻开颅盖骨,可观察颅内面观的结构;暴露出的额窦,能使学生理解鼻旁窦的概念,解决了教学中的一个难点。 【结论】 整个操作方法简单易行,制成的标本美观,不易霉变,多方面满足了教学的需要;同时学生在标本制作过程中锻炼了思维,提升了动手能力,加深了对颅骨结构的掌握。