IRF3 基因干扰对LPS 刺激原代枯否细胞早期细胞因子分泌动态变化的影响

目的:探讨干扰素调节因子3(Interferon regulator factor 3,IRF3)shRNA腺病毒对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)早期细胞因子分泌动态变化的影响。方法:采用在体灌注分离培养大鼠原代KC,以IRF3shRNA腺病毒体外感染KC,48 h后采用LPS刺激细胞,于0、2、4和6 h收集细胞培养上清液,并收集6 h细胞。上清液细胞因子的分泌采用ELISA分析;细胞IRF3基因表达采用RT-PCR和Western blot方法检测。结果:LPS刺激诱导了KC内IRF3 mRNA和蛋白质表达升高,IRF3 shRNA腺病毒的应用抑制了LPS刺激诱导和非刺激组成性IRF3 mRNA和蛋白质的表达;KC受LPS刺激活化后极早期(2 h)IFN-β分泌即上升,4 h达峰值,6 h分泌水平开始下降,但仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激后各时间点IFN-β的分泌,抑制分泌高峰的出现,并使6 h分泌水平趋于正常;KC活化后极早期即分泌大量TNF-α,并于2 h内达到峰值,随后分泌逐渐下降,但6 h仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激各时间点TNF-α的分泌,并抑制了分泌高峰的出现;IL-1β分泌增高出现于LPS刺激4 h后,6 h分泌水平达更高值。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激早期KC对IL-1β的分泌;KC受LPS刺激活化后极早期IL-10分泌即上升,且随着LPS刺激时间延长,其分泌水平逐渐增加。IRF3 shRNA腺病毒的应用促进了LPS刺激后早期各时间点IL-10的分泌。结论:IRF3 shRNA腺病毒可使原代枯否细胞IRF3基因表达沉默;在LPS刺激原代KC,IRF3可促进其下游信号分子IFN-β、前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌,并抑制抑炎细胞因子IL-10分泌。因此,IRF3可能在肝组织免疫炎症性损伤的发生中起中心作用。     

LPS 刺激诱导大鼠原代枯否细胞基因表达谱变化分析

目的:研究脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激原代大鼠枯否细胞(Kupffer cell,KC)基因表达谱的变化情况。方法:胶原酶灌注消化和不连续密度梯度离心分离培养大鼠原代肝脏KC,采用LPS 刺激细胞。OneArray 基因表达谱芯片检测LPS 刺激后,细胞内基因表达谱的变化。采用实时荧光定量PCR 法对表达上调最显著的基因进行验证。结果:基因芯片结果显示LPS 刺激后,原代KC 内基因表达谱发生了明显变化。与正常对照组相比,LPS 刺激组基因表达上调27 个(包括Ces1f、Slc17a3、Slc21a4、Hsd17b2、Sorbs2、Ccdc116、Mgam、Myo5b、Etl4、Fabp1、Kif4b、Fosl1、Cyp4a1、Penk、Tmem221、Rpl5、Nr2f1、Hoxb1、Gpr165、Fam90a13p、Kpna6、Irak1bp1、Kcnh1 和4 个尚未命名基因),表达下调4 个(包括Oc90、Tagln、Arxes2 和Olr830)。其中Ces1f 为上调最显著的基因。实时荧光定量PCR 验证结果显示,LPS 刺激诱导KC 对Ces1f 基因表达水平上调达23.88倍。结论:LPS 刺激可诱导大鼠原代KC 基因表达谱发生变化。其中,Ces1f 基因的上调表达最为显著。     

UII/UT系统对急性肝衰竭小鼠肝组织自噬水平的影响

目的探讨尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ,UⅡ)及其受体系统(urotensin Ⅱ receptor,UT)对急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)小鼠肝脏自噬水平的影响.方法♂Balb/c小鼠随机分为4组(每组6只).A组:健康对照组;B组:预处理对照组;C组:模型组;D组:预处理模型组.B组和D组给予0.6 mg/kg Urantide尾静脉注射预处理.30 min后,C组和D组立即以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)联合D-半乳糖胺(D-galactosamine,D-Gal N)腹腔注射诱导急性肝衰竭.LPS/D-Gal N攻击6 h后采集小鼠血清和肝组织样本.测量血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)水平以评价肝损伤情况.采用实时荧光定量PCR(realtime PCR,RT-PCR)检测Beclin-1、Atg5(autophagy related 5)、Atg7、Sqstm1(sequestosome 1)/p62和LC3 mRNA(microtubule-associated protein 1 light chain 3)水平,采用免疫印记技术(Western blot)检测LC3及p62蛋白质含量.结果模型组和预处理模型组ALT和AST水平与健康对照组和预处理对照组相比较均明显增高(P0.01),其中预处理模型组较模型组明显降低(P0.01).RT-PCR结果显示模型组和预处理模型组小鼠肝组织中Beclin-1、Atg5、Atg7、p62和LC3 mRNA水平均较健康对照组和预处理对照组低(P0.05);而模型组和预处理模型组、健康对照组和预处理对照组各自间比较均无统计学差异(P0.05).Western blot结果也显示,模型组和预处理模型组小鼠肝组织中L C3和p62蛋白水平均较健康对照组和预处理对照组低(P0.05);而模型组和预处理模型组、健康对照组和预处理对照组各自间比较均无统计学差异(P0.05).结论 UⅡ/UT系统对LPS/D-GalN诱导ALF小鼠下调的肝组织自噬水平无明显影响.     

MSCT肝动脉造影在肝移植受体术前评估中的应用

  【摘要】 目的 评估MSCT肝动脉造影诊断肝动脉解剖和变异情况在肝移植受体术前血管评价中的应用价值。方法 选取自2006年7月至2007年1月共75例预行肝移植的晚期肝病患者，均行肝脏动脉期扫描、肝动脉重建。由两位放射科医师对图像进行评估，包括肝动脉解剖和变异类型情况并与手术结果对照，统计分析诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果 75例中接受肝移植手术者共53例，MSCT检查发现肝动脉变异II~X型共15例，与手术结果对照，诊断的灵敏度：92.5％，特异度：100％，假阴性率：7.5％，假阳性率:0％。结论 MSCT是一种快捷、简便、无创、价廉的检查手段，可有效评估肝移植受体术前的肝动脉解剖和变异情况。     

不同免疫状态下的重症腺病毒性肺炎3例

人腺病毒感染引起的腺病毒性肺炎是目前造成婴幼儿肺炎死亡和致残的重要原因之一, 合并慢性基础疾病和免疫功能受损者更易发展为重症。免疫功能正常的人群也能发生重症腺病毒性肺炎, 但目前发生机制尚不清楚, 其原因可能与免疫机制的触发有关。本文介绍3例不同免疫状态下的重症腺病毒性肺炎病例, 通过吸氧、稳定内环境等支持治疗, 以及糖皮质激素或免疫球蛋白调节免疫治疗, 最终均治疗有效, 预后较好。