亚洲带绦虫实验感染对乳猪肝细胞生长抑制率和MAPK通路主要激酶基因表达的影响

本研究旨在探讨亚洲带绦虫实验感染乳猪后不同时间囊尾蚴寄生处肝组织细胞生长抑制率和MAPK通路主要激酶基因表达的变化.将采自贵州省都匀市的亚洲带绦虫孕节解剖后,用生理盐水反复清洗、离心沉淀收集虫卵.20日龄约克二元施格杂交乳猪29头,随机分为实验组15头和对照组14头,实验组以定量虫卵15万个/头灌胃感染.于感染后第15、45和75 d处死乳猪,取实验组囊尾蚴寄生处肝组织和对照组肝组织,采用cck-8法检测各组肝细胞的生长抑制率,并用实时荧光定量PCR检测肝细胞ERK1、JNK1、p38基因mRNA的相对表达量.结果显示,感染后第15、45和75 d,cck-8法测定实验组肝细胞的生长抑制率分别为(23.11±1.26)％、(25.15±1.26)％和(20.72±1.3)％.实时荧光定量PCR检测实验组乳猪肝细胞的ERK1和p38 mRNA表达水平均较对照组上调,而JNK1 mRNA表达水平均较对照组下调,随感染时间延长,ERK1和p38 mRNA表达水平均明显下调.结果表明亚洲带绦虫囊尾蚴感染可明显影响乳猪肝细胞ERK1和p38基因mRNA水平.     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在亚洲带绦虫实验感染乳猪肝组织的表达

目的分析亚洲带绦虫实验感染乳猪后囊尾蚴寄生处肝脏组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cysteine aspartyl proteinase 3,Caspase-3)的表达变化情况,为探讨Caspase-3在亚洲带绦虫感染致乳猪肝损伤中的作用提供基础资料。方法将采自贵州省都匀市良亩乡的亚洲带绦虫孕节解剖后,以生理盐水反复清洗并离心收集虫卵。20d龄约克施格杂交乳猪12头随机分为实验组和对照组各6头,实验组以定量虫卵15万个/头灌胃感染,于感染后第15d和第75d解剖乳猪,取实验组囊尾蚴寄生处肝组织和对照组对应部位肝组织,运用实时荧光定量PCR和免疫印迹方法分别定性定量分析Caspase-3在实验组和对照组中mRNA水平、蛋白水平的表达,并进一步运用免疫组织化学方法对Caspase-3在实验组和对照组中的蛋白表达水平和蛋白表达部位进行分析和定位。结果感染后第15d,实时荧光定量PCR结果显示实验组Caspase-3mRNA水平低于对照组(P=0.011),免疫印迹结果和免疫组化结果均显示实验组Caspase-3蛋白表达量低于对照组(P=0.008,P=0.004);此外,实验组感染后第75d的Caspase-3mRNA水平、蛋白表达量均高于实验组感染后第15d的样本(P=0.018,P=0.003,P=0.002);免疫组织化学结果显示Caspase-3阳性染色主要定位在肝细胞胞质中,呈黄色或棕黄色。感染后第75d实验组和对照组各项结果差异均无统计学意义。结论 Caspase-3在亚洲带绦虫感染早期的乳猪肝组织中低表达,而感染晚期正常表达,提示Caspase-3可能参与了亚洲带绦虫致乳猪早期肝损伤的调节。     

MAPK通路主要激酶抑制剂对亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞生长抑制率和凋亡率的影响

目的 了解MAPK特异性抑制剂干预后亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞MAPK信号通路相关基因表达、细胞活力和细胞凋亡的变化。方法 采集亚洲带绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将乳猪随机分为感染组、三种抑制剂干预组和正常对照组,感染组和抑制剂干预组均以定量虫卵15万个/头灌胃感染,灌胃后将抑制剂干预组乳猪分别腹腔注射U0126、SB203580和SP600125 1 mg/kg,隔天1次,连续7次。感染后第15 d麻醉处死各组乳猪获取肝脏。采用cck-8法和流式细胞仪分别检测肝细胞生长抑制率和肝细胞凋亡率,并用RT-PCR技术检测肝细胞ERK1、p38和JNK1基因mRNA的相对表达量。结果 感染组和U0126、SB203580、SP600125干预组肝细胞生长抑制率分别为(23.1±1.26)%、(12.59±1.2)%、(16.48±0.7)%、(18.3±0.75)%,U0126组与感染组相比(t=9.223,P<0.05)、SB203580组与感染组相比为(t=11.532,P<0.05)、SP600125组与感染组相比(t=6.775,P<0.05),各干预组均较感染组的生长抑制率明显降低。与感染组相比,U0126干预组的肝细胞凋亡率与感染组相比增高 (t=-5.934,P<0.001),SB203580干预组与感染组相比则降低 (t=3.821,P<0.01),SP600125干预组与感染组相比(t=-1.545,P＞0.05)无显著性差异。与感染组相比,U0126干预组(t=3.462,P<0.05)ERK1 mRNA表达量下调;SB203580干预组(t=3.267,P<0.05) p38 mRNA表达量下调;SP600125干预组(t=3.363,P<0.001) JNK1 mRNA的表达量下调。结论 亚洲带绦虫感染乳猪后,MAPK特异性抑制剂可以通过影响乳猪肝细胞MAPK相关基因的mRNA水平减轻肝细胞的生长抑制和凋亡。