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1.
袁正宏 《复旦学报(医学版)》2000,27(1):12
目的 探讨DNA载体结构及接种途径对DNA疫苗免疫效果的影响。方法 分别构建插入HBV表面抗原编码基因的表达载体pcDNA1.1/SA(无抗性基因)和pcDNAI/Amp/SA(含氨苄青霉素抗性基因),肌注小鼠后比较其诱生特异性免疫应答的能力;同时比... 相似文献
2.
目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynueleotides,CpG- ODN)能否预防或减轻慢性哮喘小鼠气道炎症的发生。方法40只雌性C57BL/6小鼠随机均分为4组,A组(慢性哮喘组)、B组(CpG-ODN干预组)和C组(GpC-ODN对照组)分别腹腔注射卵蛋白致敏,然后用卵蛋白雾化吸入激发以制作慢性哮喘模型,D组(生理盐水对照组)用生理盐水进行致敏和激发。B组在致敏同时(d1, d14)和激发阶段(每2周1次)分别给予60μg/mLCpG-ODN腹腔注射,共6次。C组将CpG替换为鸟嘌呤-磷酸-胞嘧啶(GpC)作为对照。在末次激发24 h后,取血测嗜酸粒细胞(eosinophil,EOS)数,血清IgE、IgG1和IgG2α;收集支气管肺泡灌洗液(bronehoalveolar lavage fluid,BALF)作细胞分类计数;测定肺组织中白介素-4 (interleukin-4,IL-4)、白介素-13(interleukin-13,IL-13)和γ-干扰素的mRNA(interferon-γ,IFN-γ)表达量;以及肺组织病理学检查。结果A组外周血EOS数[(89±10)×10^4/mL]、血清IgE值[(279±53)ng/mL)、IgG1(A值2.151±0.628)、IgG2α(A值0.772±0.245)、BALF中EPS(6.3±1.3)]×10^5/mL)及百分比[(18.1±3.0)%]较D组明显增高(P〈0.01);且肺组织中IL-4、IL-13和IFN-γ等细胞因子mRNA表达量[(分别为(5.72±3.89)×10^-2、(9.45±5.91)×10^-2和(3.23±1.69)×10^-2)]也明显高于D组(P〈0.05)。用CpG-ODN干预后(B组),除IgG2α(A值1.186±0.414)和IFNγmRNA表达量[(18.91±9.85)×10^-2]增高外(P〈0.05),其余指标均低于A组(P〈0.05)。C组的上述各指标与A组相比差异均无显著性(P〉0.05)。结论CpG- ODN对小剂量OVA反复激发所致的慢性气道炎症有一定的预防作用。 相似文献
3.
ADAM33基因在慢性哮喘小鼠气道重塑中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究ADAM33(a disintegrin and a metalloproteinase 33)mRNA在慢性哮喘小鼠模型气道重塑中的表达.方法:20只雌性C57BL/6小鼠随机分为2组,每组10只.A纽(慢性哮喘组)分别于第1、14天小鼠腹腔注射1 mL致敏液,从第21天开始雾化吸入2.5%的卵蛋白(OVA)溶液,每次30 min,每周3次,连续8周.(2)B组(生理盐水对照组)给予生理盐水进行致敏和激发.在末次激发24 h后,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)做细胞分类计数.用实时定量反转录多聚酶链反应(real-time RT-PCR)法测定肺组织中ADAM33、白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13)mRNA表达量.取左肺组织分别行苏木紫-伊红(HE)染色和Masson's Trichrome染色,用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体行免疫组化染色.结果:A组BALF中嗜酸粒细胞[(6.3±1.3)×105/mL]及百分比[(18.1±3.0)%)]、肺组织中ADAM33、IL-4和IL-13等mRNA表达量[分别为(1.41±0.93)×10-2(5.72±3.89)×10-2、(9.45±5.91)×10-2)]与B组相比明显增高(P<0.01).而且Masson's Trichrome染色示上皮下胶原纤维沉积增加、α-SMA免疫组化示气道平滑肌层明显增厚.结论:ADAM33 mRNA在小剂量OVA反复激发复制的慢性哮喘小鼠模型中表达增加,可能参与气道重塑的发生和发展. 相似文献
4.
尽管高效的乙型肝炎预防性疫苗已经普及了30多年,但HBV感染仍在继续蔓延。每年约有90万人死于暴发性肝炎(急性肝功能衰竭)和慢性HBV感染导致的肝硬化(肝脏瘢痕形成)、肝功能衰竭和肝细胞癌(HCC)等。HCC作为一种主要由HBV慢性感染所导致的癌症,其发病率在世界范围内也在逐步上升。 相似文献
5.
柯萨奇B组病毒3型VP1基因疫苗免疫效果的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。 方法 以带有CVB3P1、P2区核酸序列的pGEM质粒为模板,用PCR方法克隆CVB3VP1基因cDNA,插入真核表达载体pcDNA3中的HindⅢ和XbaI位点之间,构建成重组质粒。经大量扩增纯化后,肌肉注射免疫BALB/c小鼠3次,用CVB3毒株攻击小鼠,取血及脾细胞检测其免疫效果。 结果 小鼠经3次免疫后,虽未测出明显免疫应答指标,但诱导了T 相似文献
6.
质谱 (massspectrometer,MS)分析是分析化学中进行物质成分和结构分析的主要技术之一 ,其基本原理是将分析样品在特定的条件下转变为高速运动的离子 ,这些离子根据质量、电荷比的不同在静电场和磁场的作用下得到分离 ,然后用特定的检测器记录各种离子的相对强度并形成质谱图。质谱仪的核心是离子源和分析器。目前分析器的类型主要有四极杆 (quadrupole)、离子阱 (iontrap)、飞行时间 (timeofflight,TOF)、离子回旋共振 (ionconvolutionresonance ,ICR)等。离子源也多种多样 ,有工作在真空状态下的如电子轰击源 (electronbombardment,EB)… 相似文献
7.
8.
本文建立了用ELISA法测定HepG2 2215细胞培养液中人白蛋白的方法,其线性测定为0.16~40ng/ml,各种阴性对照P/N值均小于2.1。批内变异系数为3.4%,批间变系数为8.5%。本实验结果说明,在利用Hepg2 2215细胞系研究抗乙肝病毒药物和免疫因子的作用时,应注意这些药物或因对细胞代谢有无毒性作用,细胞培养液中人白蛋白的测定可作为检测细胞毒性的一项指标。 相似文献
9.
目的:建立肠道病毒71型(EV71)快速培养鉴定方法,并应用于EV71感染的早期诊断。方法:1.以不同滴度的EV71临床分离株,低速离心接种于人横纹肌肉瘤细胞(RD)96孔板内,设定时间梯度培养后用间接免疫荧光技术检测EV71早期抗原,以优化快速培养鉴定方法的条件。2.采集上海地区2010年手足口病例患者的咽拭子、大便标本50份,以EV71快速培养鉴定方法检测,并与病毒分离培养比较。结果:病毒滴度为106TCID50/0.1 ml的EV71临床分离株系列稀释后培养3 d,至最高稀释度10-10能100%检测到病毒抗原。检测咽拭子标本5份、大便标本45份,病毒分离检测阳性26份,出现CPE平均时间为9.8d±2.098,阳性率为52.0%;快速培养鉴定方法3 d检出阳性30份,阳性率为60.0%。结论:在96孔板上开展离心培养结合免疫荧光技术应用于EV71感染的早期诊断,缩短了病原体检出时间、敏感性高、特异性强,操作更为简便,是快速诊断EV71感染的可靠方法。 相似文献
10.
目的探讨宿主细胞蛋白质乙酰化修饰对HBV复制的影响。方法采用去乙酰化酶抑制剂制滴菌素A(TSA)和尼克酰胺(NAM)刺激HBV复制细胞模型Hep G2.2.15和Hep AD38,并检测细胞内的HBV复制指标。采用Western Blot检测广谱乙酰化蛋白和乙酰化组蛋白H3的表达水平。结果 TSA和NAM刺激细胞会引起细胞内蛋白质的乙酰化水平升高,且乙酰化修饰水平增高呈时间和浓度依赖的变化趋势。两种细胞受TSA和NAM刺激的影响,培养上清中的HBs Ag水平降低,而HBV DNA水平升高,且呈时间和浓度依赖关系,而两种细胞培养上清中的HBe Ag和细胞内核心颗粒DNA的表达水平变化趋势不明显。结论宿主蛋白质的乙酰化可能参与和影响了细胞内HBV的复制过程,进一步深入分析和鉴定影响HBV胞内复制的宿主乙酰化蛋白质将有助于加深对HBV复制调控的认识,为开发特异性抗病毒策略提供新思路。 相似文献