安宁包缺氧体系用于构建乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的研究

目的采用安宁包缺氧体系构建SD乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,评估其实验条件,为开展心肌缺血/再灌注损伤的分子机制研究奠定基础。方法采用安宁包缺氧体系分别处理SD乳鼠原代心肌细胞指定时间(3 h、4 h、6 h、12 h),再进行复氧24 h,并采用AnnexinV/PI双染-流式细胞术检测细胞凋亡率与坏死率。结果与正常组相比,安宁包缺氧体系处理6 h、12 h分别诱导心肌细胞坏死率上升29.82%和44.19%,差异具有统计学意义(P<0.01);与正常组相比,安宁包缺氧体系处理4 h后复氧24 h诱导心肌细胞凋亡率上升35.8%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论采用安宁包缺氧体系处理SD乳鼠原代心肌细胞4 h后复氧24 h为较合适的缺氧/复氧损伤模型实验条件。     

葡萄糖/葡萄糖氧化酶诱导H9c2心肌细胞凋亡模型的建立

目的 研究不同浓度高糖（glucose,G）/葡萄糖氧化酶（glucose oxidase,GO）对H9c2细胞凋亡的影响,以确定建立H9c2细胞因糖自氧化所致凋亡模型的合适浓度.方法 在含33 mmol/L葡萄糖的高糖培养液中以不同浓度的GO干预H9c2细胞12h,MTT比色法检测H9c2细胞的存活率;光学显微镜下观察H9c2细胞形态学;AnnexinV/PI结合流式细胞仪检测凋亡率;2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）探针检测细胞内活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平.结果 （1）随G/GO浓度增加,H9c2细胞的存活率逐渐降低,其中1.6 mU/mL、2 mU/mL、2.4 mU/mL和2.8 mU/mL组存活率显著低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中G（33 mmol/L）/GO（2 mU/mL）的存活率为49.3％±6.7％.（2）随G/GO浓度增加,H9c2细胞的细胞凋亡率逐渐升高,细胞呈现典型的凋亡特征,其中1.6 m U/mL、2 mU/mL、2.4 mU/mL和2.8 mU/mL凋亡率显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中G（33 mmol/L）/GO（2 mU/mL）的细胞凋亡率为44.56％±3.02％.（3）G（33 mmol/L）/GO（2 mU/mL）作用H9c2细胞12h时,ROS含量显著高于对照组,差异有统计学意义（荧光强度：47.70％±2.09％ vs.17.59％±0.75％,P＜0.05）.结论 G/GO引起的H9c2细胞氧化应激所致的凋亡有剂量依赖性,G（33 mmol/L）/GO（2 mU/mL）是建立H9c2心肌细胞凋亡模型的合适浓度.