v银染RNA AP-PCR差示法克隆人胃癌转移相关基因

目的：以改进的银染RNAAP-PCR法分析原发性及转移性胃癌标本,鉴定和克隆胃癌转移相关基因。方法：以原发性转移灶胃癌标本总RNA为研究对象,首先以T12MN“锚定”引物进行逆转录合成cDNA第一链,再以10核苷酸任意引物进行PCR扩增,5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物后银染显示并回收差异条带。经RNA点杂交验证,克隆测序后进入GenBank数据库检验同源性。结果：经银染RNAAP-PCR法分析,获得系列差异表达片段,对其中MGA1（662bp)和PGA1（589bp)两个片段进行验证和测序,结果显示,MGA1与胃癌转移相关,并与编码人巨噬细胞集落刺激因子受体（macrophage colony-stimulating factor receptor,CSF-1R)的原癌基因c-fms100%同源;而PGA1则属胃癌转移抑制基因,与编码肿瘤转移抑制基因KAI-1完全同源。结论：银染RNAAP-PCR法适用于分析和克隆差异表达基因,具有快速,直观,假阳性率低等优点。提示CSF-1R及KAI-1与胃癌转移表型相关,为进一步研究CSF-1R功能提供了新的线索。     

银染RNA AP-PCR差示法克隆人胃癌转移相关基因

目的:以改进的银染RNAAP-PCR法分析原发性及转移性胃癌标本,鉴定和克隆胃癌转移相关基因。方法:以原发及转移灶胃癌标本总RNA为研究对象,首先以T12MN“锚定”引物进行逆转录合成cDNA第一链,再以10核苷酸任意引物进行PCR扩增,5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物后银染显示并回收差异条带,经RNA点杂交验证、克隆测序后进入GenBank数据库检验同源性。结果:经银染RNAAP-PCR法分析,获得系列差异表达片段。对其中MGA1(662bp)和PGA1(589bp)两个片段进行验证和测序,结果显示,MGA1与胃癌转移相关,并与编码人巨噬细胞集落刺激因子受体(macrophagecolony-stimulatingfactorreceptor,CSF-1R)的原癌基因c-fms100%同源;而PGA1则属胃癌转移抑制基因,与编码肿瘤转移抑制基因KAI-1完全同源。结论:银染RNAAP-PCR法适用于分析和克隆差异表达基因,具有快速、直观、假阳性率低等优点;提示CSF-1R及KAI-1与胃癌转移表型相关,为进一步研究CSF-1R功能提供了新的线索。     

乙型肝炎的抗病毒药物治疗

乙型肝炎是一种发病高、对人类危害极大的传染病 ,它容易形成慢性肝炎、肝硬化甚至肝癌。对HBV感染者进行治疗 ,减少感染者数量是迅速控制乙型肝炎蔓延的最有效手段。当前临床应用的以干扰素、拉米夫定为代表的药物治疗并非令人满意。随着对HBV相关研究的深入 ,以及分子生物学、分子药理学的迅猛发展 ,越来越多的药物和方法可以用来阻断HBV生活史 ,诱导机体清除病毒 ;其中DNA疫苗更因其能对清除HBVcccDNA发挥作用而颇受重视。一、免疫调节药物1 HBV抗原 :多肽疫苗或DNA疫苗能激发保护性免疫应答 ,包括特异性细胞毒性T淋巴细胞 (C…     

巢式RT-PCR扩增Keration19诊断胃癌淋巴结微转移方法及应用

[目的]建立RT PCR扩增Keratin19mRNA的方法 ,评价其应用前景。[方法]采用Keratin19cDNA的套式引物建立巢式RT PCR扩增体系 ,以酶切分析及DNA点杂交法鉴定扩增产物的特异性 ,逆转录产物系列稀释法分析检测敏感性 ,并对51例临床胃周淋巴结样品作初步检测。[结果]该扩增体系具有较好的扩增特异性 ,检测敏感性达1pgRNA ,相当于从105 个淋巴细胞中检出1个胃癌细胞 ;对临床样品检测结果显示该法较病理检查法敏感性高。[结论]该扩增体系具有较好的特异性、敏感性和较高的可靠性。