反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。     

p27kip1基因在人胆管癌细胞化疗增敏效应中的作用

目的 探讨外源性p27^kip1在人胆管癌细胞系QBC939中高表达对胆管癌细胞化疗敏感性的影响。方法 通过携带人p27^kip1基因的重组腺病毒载体Ad-p27mt转染人胆管癌细胞系QBC939。经逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测p27^kip1在胆管癌细胞中的表达；经MTT比色法及流式细胞术检测5-氟尿嘧啶（5-FU）、丝裂霉素（MMC）、环磷酰胺（CTX）对转染p27^kip1前后的QBC939细胞生长抑制及凋亡的影响。结果 Ad-p27mt转染后5-FU、MMC和CTX对QBC939细胞生长抑制率，分别由转染前的41．89％、45．59％和38．91％显著增加为56．15％、55．65％和51．69％；凋亡率也由13．76％、11．76％和10．46％，明显升高为41．39％、35．94％、34．46％，差异均有显著性意义（均P〈0．05）。结论 p27^kip1在QBC939细胞中高表达，能显著增强胆管癌细胞对化疗药物的敏感性，为基因联合化疗药物治疗胆管癌提供了参考依据。     

甲状腺手术中显露喉返神经以避免喉返神经损伤的临床意义

目的探讨甲状腺手术中显露喉返神经(RLN)对预防RLN损伤的临床意义。方法回顾性分析2006年9月至2011年8月期间我院行甲状腺全切除术和次全切除术1 723例患者的临床资料,其中行显露RLN术式914例,共显露RLN 1 203条;行不显露RLN术式809例,共行1 013侧甲状腺腺叶切除手术。比较术后RLN损伤情况及术后6个月声带恢复情况。结果显露组与不显露组RLN损伤发生率分别为0.91%(11/1 203)和2.07%(21/1 013),2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。术后随访6个月,显露组与不显露组分别有0例和13例(61.9%,13/21)永久性RLN损伤,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论在甲状腺全切除和次全切除术中,显露并注意保护RLN能最大程度地避免RLN损伤,尤其是永久性RLN损伤。     

缝隙连接蛋白43对双自杀基因系统旁观者效应的影响

Objective： To observe the influence of connexin 43 （Cx43） on the bystander effect induced by cytosine deaminase （CD） and herpes simplex virus thymidine kinase （HSV-tk） coexpression suicide genes system in human cholangiocarcinoma QBC939 cells and transplantation tumors in nude mice. Methods： In vitro, the CD＋tk＋ and CD＋tk＋Cx＋ cells were respectively treated with 5-fluorocytosine （5-Fc） and Ganciclovir （GCV）. The cytotoxic effect was evaluated by MTT method. In order to investigate the influence of Cx43 on the bystander effect, the size of transplantation tumors of the CD＋tk＋ and CD＋tk＋Cx＋ cells was measured before and after application of 5-Fc and GCV. Results： CD and tk genes were stably expressed in transfected QBC939 cells. The increased expression of Cx43 was determined by testing for the presence of Cx43 mRNA by RT-PCR and the presence of Cx43 protein by Western Blot in CD＋tk＋Cx＋ cells. The killing effect of 5-Fc and GCV on CD＋tk＋Cx＋ cells was more effective than that on CD＋tk＋ cells both in vitro and in vivo. Conclusion： Double suicide genes system CD/5-Fc＋tk/GCV could induce remarkable killing effect on cholangiocarcinoma cells in vitro and transplantation tumors in vivo. The cotransfection of Cx43 gene could enhance the bystander effect and hence the inhibition of carcinoma cells.     

突变型p27kip1过表达对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨外源性突变型p27^kip1高表达，对人源性胆管癌细胞增殖及凋亡的影响。方法通过携带人突变p27^kip1基因的重组腺病毒载体Ad-p27mt和重组腺病毒Ad-LacZ，转染人胆管癌细胞系QBC9。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印记，检测p27^kip1在胆管癌细胞系中mRNA和蛋白的表达水平；噻唑蓝（MIT）比色法、克隆形成试验及流式细胞术（PCM），检测p27^kip1过表达对胆管癌细胞生长抑制、细胞周期和凋亡的影响。结果Ad-p27mt能显著抑制胆管癌细胞的生长，诱导G0／G1期阻滞和细胞凋亡。结论携带人突变p27^kip1基因的重组腺病毒对QBC939细胞的增殖有明显的抑制作用，并诱导强烈的G1期阻滞和细胞凋亡，是胆管癌基因治疗的新途径。     

反义MBD1基因真核表达载体转染对人胆管癌细胞MBD1基因表达的影响

目的：探讨反义MBD1基因真核表达载体转染对人胆管癌QBC 939细胞中MBD1基因表达的影响，为进一步研究该基因的作用提供依据。方法：构建反义MBD1基因真核表达载体，通过脂质体转染入人胆管癌细胞株QBC 939中，以G418进行筛选得到稳定转染细胞株，用PCR鉴定外源性neoR基因在转染细胞中的表达以确定转染成功。半定量RT PCR观察转染前后MBD1基因mRNA水平的变化，流式细胞术检测转染前后MBD1蛋白的变化。 结果：人胆管癌QBC 939细胞中MBD1基因的mRNA水平从0.912±0.022降低至0.215±0.017，转染前后的差异有显著性(P＜0.01)；MBD1蛋白水平从(80.19±5.05)％降低到(35.11±4.05)％，转染前后的差异有显著性(P＜0.01)。 结论：反义MBD1基因转染能降低人胆管癌QBC 939细胞中MBD1基因的表达水平，提示MBD1基因在胆管癌的发生发展中具有重要作用，反义MBD1基因转染有可能成为胆管癌治疗的一种新方法。     

谷氨酰胺加强的静脉营养对小儿术后早期炎性肠梗阻的治疗评价

目的 探讨加用谷氨酰胺的肠外营养对小儿术后早期炎性肠梗阻的治疗效果和对蛋白质合成及肠黏膜屏障功能的影响。方法 将加用谷氨酰胺肠外营养的患儿（观察组）与未加用谷氨酰胺肠外营养的患儿（对照组）进行对比研究。结果 与对照组相比,给予静脉营养12 d后观察组血浆白蛋白、前白蛋白水平有所提高（P<0.05）,感染发生率降低（P<0.05）,血二胺氧化酶（DAO）水平降低（P<0.05）。结论 谷氨酰胺加强的肠外营养能提高术后早期炎性肠梗阻患儿的蛋白质合成水平、降低感染发生率并能较好地保护肠粘膜屏障功能。     

尾侧联合中间入路与中间入路腹腔镜右半结肠癌根治术的Meta分析

目的:比较尾侧联合中间入路与中间入路腹腔镜右半结肠癌根治术的安全性及临床疗效.方法:计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、万方、中国知网、维普数据库比较尾侧联合中间入路与中间入路腹腔镜右半结肠癌根治术的随机对照试验或临床对照试验文献,检索日期截至2021年7月,对符合标准的文献提取相关...