两个山丘型疫区牛血吸虫病疫情动态纵向观察

目的了解山丘型血吸虫病疫区牛血吸虫病流行动态,为正确评估防治效果、制订防控对策提供参考依据。方法选择两个有代表性的山丘型疫区仁美和大仓作为观察点,采用毛蚴孵化法检查牛血吸虫感染情况,比较不同年龄牛感染率;入户调查家畜放牧行为,每年4、9月调查野粪和钉螺分布及感染率。结果与1993年比较,2007年仁美和大仓观察点牛血吸虫感染率分别下降98.4%和93.8%;感染度亦呈下降态势,至2007年基本以低感染度为主。1995年以后仁美观察点野粪阳性率为0,大仓点至2007年处于较低徘徊状态;活螺密度和阳性螺密度呈下降趋势。结论山丘型血吸虫病流行区由于自然环境特殊,疫区往往呈点状或带状分布,加大查治病和扩大化疗力度可迅速降低血吸虫病疫情。要彻底阻断血吸虫病传播还必须加强钉螺孳生环境改造和家畜血吸虫病传染源管理。     

血吸虫反向疫苗学理论与技术的研究现状与展望

【提要】 近年发展起来的反向疫苗学,以“序列-结构-功能”思想为依据,以免疫信息学、计算机预测设计以及高通量的各种组学（包括基因组学、 转录本组学、 蛋白质组学等）综合集成技术为核心,可能为血吸虫疫苗候选分子的发现提供一条新途径。本文简要介绍了反向疫苗学常用的理论预测和实验方法;概述了应用反向疫苗学理论与技术筛选和鉴定血吸虫候选疫苗分子（保护性抗原或表位）的进展情况;最后,讨论了通过模拟辐照致弱血吸虫疫苗或人群获得性免疫的效应机制等来发展血吸虫反向疫苗学的可能的研究方向。     

日本血吸虫Wnt受体蛋白Fz5编码基因的克隆及其在不同发育时期虫体的表达差异

目的克隆含开放阅读框（ORF）的日本血吸虫SJCHGC08304全基因序列,分析此基因编码蛋白的Wnt受体种类,了解该基因在血吸虫不同发育阶段的mRNA表达差异。方法采用RACE技术从日本血吸虫7d肝期童虫和42d成虫组织中扩增获得日本血吸虫SJCHGG08304全基因序列,通过生物信息学工具分析该基因的完整ORF;同源性分析该基因编码蛋白的种类和功能;运用荧光定量PCR技术分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达情况。结果获得日本血吸虫新基因,该基因ORF含2604bp,编码867个氨基酸,理论分子量为98．264kD。实时定量分析该基因在18d童虫表达量最高,其他依次为14d童虫、42d雄虫、32d成虫、虫卵、23d成虫、27d成虫,而在42d雌虫中没有检测到该基因。结论该基因的氨基酸序列具有典型Wnt受体家族蛋白特征,生物信息学方法同源性分析表明与非洲爪蟾Fz5蛋白的同源性最高,通过比较分析推测为编码日本血吸虫Wnt受体Fz5蛋白基因,命名该基因为sjFz5基因（GenBank登录号：EU370926）,其在血吸虫的不同发育时期中有不同程度的差异表达。     

血吸虫受发育调节的相关蛋白及其功能的研究

血吸虫生活史各阶段可作为血吸虫疫苗和药物介入的靶阶段。对血吸虫不同发育阶段蛋白分子和基因表达的动态变化的了解 ,有助于探索其生长发育的机制 ,为研制有效的阻断传播的疫苗和新的药物提供科学指导。本文就血吸虫受发育调节而呈阶段性表达的蛋白及其功能方面进行综述     

东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关靶基因筛选

目的 寻找东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关靶基因。方法利用东方田鼠血清以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库，将所得阳性克隆进行测序及生物信息学分析，确定目的基因。结果经3轮筛选，特异性噬菌体得到有效富集（857倍），随机挑取58个克隆进行序列测定，获得了10条表达序列标签（EST）序列，其中7条与GenBank中登陆的日本血吸虫基因序列具有99％～100％同源性，1条与类人猿锌指蛋白基因有82％同源性。功能预测结果表明，大部分EST编码蛋白或多肽的功能主要是参与血吸虫基因表达调控。结论发现了多个可能与东方田鼠抗血吸虫抗性相关的靶基因，为进一步阐述东方田鼠抗血吸虫病的分子机理奠定了基础。     

3种保虫宿主日本血吸虫特征性差异表达基因的筛选与验证

目的筛选日本血吸虫3种重要保虫宿主来源虫体的特征性差异表达基因,寻找可以用于鉴别这3种宿主来源虫体的遗传标记。方法日本血吸虫尾蚴人工感染黄牛、水牛和山羊,收集感染后49 d成虫,分别抽提RNA,逆转录成cD NA,体外转录为cRNA并进行片段化;采用定制的血吸虫芯片分别进行杂交,筛选每种宿主来源虫体的特征性差异表达基因。采用实时定量PCR法对所筛选差异表达基因的表达水平做进一步测定,验证芯片数据的结果,并对这些特征性差异表达基因进行验证。结果通过芯片杂交,分析筛选获得实验黄牛组来源虫体特征性差异表达基因3个,水牛组来源虫体4个,山羊组来源虫体7个。其中黄牛组2个、水牛组3个、山羊组5个特征性差异表达基因在另一批次3种宿主来源虫体的重复试验中得到验证。结论芯片杂交筛选出10个3种宿主来源虫体的特征性差异表达基因,这些基因可能可以作为这3种不同宿主来源虫体的遗传标记。     

恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶falcipain-1非红内期疟原虫所必需

恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶falcipains是抗疟化学药物的新靶标之一。Falcipains由红内期疟原虫表达,包括falcipain-1,falcipain-2和falcipain-3。对falcipain-2和falcipain-3的功能研究表明,二者均是食物泡血红蛋白酶,参与降解恶性疟原虫滋养体的血红蛋白。由于缺乏合适的表达系统,falcipain-1的功能尚未研究清楚。Puran等应用基因敲除技术获得falcipain-1基因敲除恶性疟原虫,通过比较观察falcipain-1的抑制剂YA29(据报道能特异地阻止裂殖子的红细胞入侵)和其他蛋白酶抑制剂对野生型疟原虫(WT)和falcipain-1基因敲除疟原虫的抑制作用,来评…     

日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

目的 克隆、表达日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因(SjTOM34),并对其生物特性进行初步研究。方法 应用RT-PCR方法从42 d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因,并进行生物信息学分析。应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达状况。构建了SjTOM34基因重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,Western blotting分析了重组抗原的免疫原性及该蛋白在不同发育阶段虫体中的表达情况,利用免疫组化方法观察了该蛋白在虫体内的分布情况。结果 获得了SjTOM34的基因序列,其开放阅读框(ORF)为1 083 bp。该基因在所检测的不同发育阶段童虫和成虫中均有表达,其中在35 d虫体中的表达量略高于其他时期的虫体。成功构建了重组的原核表达质粒并且在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白在上清和沉淀中都有存在,并且具有较好的免疫原性,在所检测的各时期虫体中均可检测到该蛋白的存在,并且主要分布在虫体的实质组织中。结论 获得了日本血吸虫SjTOM34基因,初步明确了该基因在日本血吸虫童虫和成虫中的表达情况,及在成虫中的分布。     

日本血吸虫童虫期体被蛋白Th细胞表位预测及初步鉴定

目的预测并鉴定日本血吸虫童虫体被蛋白分子的Th细胞表位。方法利用在线服务器分别对有关序列进行跨膜区与信号肽的预测分析;采用结合基序扫描与计分矩阵等算法,以及基于多种分子动力学算法的配体受体相互对接的分子建模方法等进行Th细胞表位预测;人工合成肽采用以多聚赖氨酸为核心的含4个表位肽分支臂的复合抗原多肽;表位肽刺激免疫鼠脾淋巴细胞增殖效果的鉴定采用改良的MTT法。结果从373条日本血吸虫肝期童虫体被蛋白序列中筛得14条具有开放阅读框及信号肽结构的序列;预测得到至少与小鼠的1个MHCⅡ类分子结合的5个15肽表位序列;淋巴细胞增殖试验初步鉴定获得了1个SSLVISYSTVDRLVC（AY815893）候选体被蛋白Th细胞表位。结论初步鉴定了1个潜在的体被蛋白Th细胞表位,为进一步筛选抗血吸虫保护性Th细胞表位提供了理论和实验依据。     

血吸虫受发育调节的相关蛋白及其功能的研究

血吸虫生活史各阶段可作为血吸虫疫苗和药物介入的靶阶段。对血吸虫不同发育阶段蛋白分子和基因表达的动态变化的了解，有助于探索其生长发育的机制，为研制有效的阻断传播的疫苗和新的药物提供科学指导。本文就血吸虫受发育调节而呈阶段性表达的蛋白及其功能方面进行综述。