CD137-CD137配体对巨噬细胞基质金属蛋白酶9及血管平滑肌细胞钙化形成的影响

目的探讨CD137-CD137配体(CD137L)信号是否通过调控巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达影响血管平滑肌细胞(VSMC)钙化形成。方法采用巯基乙酸盐腹腔灌洗法获取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞(PM),采用组织块贴壁法取3~6代胸主动脉VSMC分为对照组、共培养组、CD137激动组和MMP-9抑制组(n=3)。对照组用重组CD137L蛋白干预VSMC,共培养组用PM和VSMC共培养,CD137激动组和MMP-9抑制组分别用重组CD137L蛋白和MMP-9抑制剂干预PM后,与VSMC共培养,再加入重组CD137蛋白(10μg/ml)干预。采用Western blot检测各组钙化相关的骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx-2)表达,微板法检测钙离子浓度和碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa和茜素红染色检测各组细胞钙化程度。结果CD137激动组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显高于共培养组(P<0.01),而MMP-9抑制组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显低于CD137激动组,差异有统计学意义[0.25±0.27 vs 2.12±0.34,0.30±0.32 vs 2.63±0.41,(1.92±0.09)mmol/g vs(4.99±0.37)mmol/g,(1.11±0.50)KU/g vs(2.63±0.04)KU/g,P<0.01]。共培养组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性与对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。CD137激动组茜素红染色红色颗粒物质沉积和Von Kossa染色黑色颗粒物质沉积明显多于对照组和共培养组;MMP-9抑制组钙化程度显著降低;对照组和共培养组钙化程度则无明显差异。结论CD137-CD137L信号可能通过调控巨噬细胞MMP-9表达影响VSMC钙化形成。     

一种快速建立小鼠心肌缺血再灌注模型的方法

目的: 探讨一种快速高效且不需要借助呼吸机和开胸操作的方法,建立小鼠心肌缺血再灌注模型。方法: 取40只雄性昆明小鼠（6~8周龄,体重18~25 g）,随机分为假手术组、缺血15 min+再灌注24 h组、缺血30 min+再灌注24 h组和缺血45 min+再灌注24 h组,每组10只。给予2%异氟烷气体麻醉,分离胸大肌和胸小肌,于左侧第3、4肋间隙挤出心脏,迅速定位,假手术组仅穿线不结扎,手术组分别结扎冠状动脉左前降支（LAD）15、30和45 min后,松开结扎线24 h以建立心肌缺血再灌注模型。同时在结扎前、结扎后5 min及再灌注24 h后进行心电图检测。再灌注24 h后在结扎部位再次进行结扎,进行伊文思蓝-TTC染色,垂直于心脏长轴切片,检测心肌缺血区和梗死区面积。结果： 至再灌注24 h后,小鼠生存率为90%,心肌缺血再灌注造模成功率86.7%。心电图检测显示LAD结扎5 min后均出现T波高耸,ST段抬高,QRS波增宽。随着再灌注时间延长,ST段逐渐回落。结扎LAD 5 min后,肉眼可见结扎线以下心室壁呈现灰白色,再灌注24 h后可见与周围组织区分明显的白色梗死区,心脏搏动频率和幅度较结扎前明显减弱。心肌组织切片经伊文思蓝-TTC染色呈现界限明显的缺血区、梗死区和正常心肌组织区。缺血45 min+再灌注24 h组小鼠（切片缺血区面积+梗死区面积）/左室总面积比值为（63.8±6.36）%,梗死区面积/(梗死区+缺血区面积)比值为（46.7±5.77）%。结论： 该方法建立小鼠心肌缺血再灌注模型,减少了呼吸机使用所需要的时间,操作快速便捷,造模成功率大于85%。     

CD137和CD137配体信号通过低氧诱导因子1α调控糖酵解影响巨噬细胞吞噬及迁移功能

目的 探讨CD137-CD137配体(CD137L)信号通过低氧诱导因子1α(HIF-1α)调控糖酵解影响巨噬细胞吞噬及迁移功能.方法 通过巯基乙酸盐腹腔灌洗法获取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞(PM),采用混合气体饱和法建立细胞低氧环境.PM分为对照组、低氧组、CD137激动组、HIF-1α过表达组和糖酵解激动组....     

OX40-OX40L相互作用对NFATc1表达及斑块形成的影响

目的探讨OX40-OX40L相互作用对活化T细胞核因子c1(NFATc1)及动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法选取33只载脂蛋白(Apo)E-/-小鼠,分为对照组、OX40刺激组、OX40刺激+沉默NFATc1组,采用颈动脉硅胶圈置入法建立斑块模型;Masson染色检测斑块组成;采用免疫组化检测斑块内NFATc1和CD68分布。细胞实验以小鼠脑微静脉内皮细胞为对象,分为对照组、OX40刺激组和OX40抑制组。斑块及细胞表达NFATc1采用qRT-PCR和Western blot方法检测。结果细胞实验显示,OX40刺激组小鼠内皮细胞NFATc1蛋白及mRNA表达明显高于对照组(P0.05),而OX40抑制组小鼠内皮细胞NFATc1蛋白及mRNA表达低于OX40刺激组(P0.05)。动物实验显示,OX40刺激组Apo E-/-小鼠斑块中NFATc1蛋白及mRNA表达高于对照组(P0.05),而OX40刺激+沉默NFATc1组Apo E-/-小鼠斑块中NFATc1蛋白及mRNA表达低于OX40刺激组(P0.05)。OX40刺激组斑块面积与对照组相比显著增加,斑块内纤维增生明显,而OX40刺激+沉默NFATc1组较刺激组斑块面积明显减少,纤维增生程度减弱。OX40刺激组Apo E-/-小鼠斑块内NFATc1及CD68表达高于对照组,而OX40刺激+NFATc1沉默组小鼠斑块内NFATc1及CD68表达低于OX40刺激组。结论 OX40-OX40L信号调控NFATc1表达并影响动脉粥样硬化斑块的形成。