Annexin—A1模拟肽Ac2—26抑制小胶质细胞释放炎性介质的作用研究北大核心CSCD

目的观察Annexin—A1模拟肽Ac2—26对小胶质细胞炎性介质肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和一氧化氮（NO）释放的影响及其对Toll样受体2（TLR2）的调控作用。方法根据处理不同将大鼠来源的原代小胶质细胞随机分为Aβ1-42组（给予Aβ1-42刺激组）、Aβ1-42＋对照乱序肽组（在给予Aβ1-42刺激的同时加入氨基酸乱序组处理）、Aβ1-42＋Ac2—26（在给予Aβ1-42刺激的同时加入Ac2—26处理）及空白对照组。经上述处理24h后,收集各组小胶质细胞。用CCK-8法检测细胞存活率,采用倒置相差显微镜观察细胞形态,收集各组细胞上清液采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定TNF-α、IL-1β、IL-6和NO的浓度,采用Western blot法测定TLR2的蛋白水平。结果Aβ1-42和Ac2—26对小胶质细胞存活率没有影响,与空白对照组比较差异无统计学意义。Aβ1-42作用后,小胶质细胞形态发生明显变化,由静息的苎麻状变成激活的阿米巴状巨噬细胞样;Aβ1-42组、Aβ1-42＋对照乱序肽组、Aβ1-42＋Ac2—26及空白对照组上清TNF-α浓度分别为（125．17±7．13）ng／L（118．78±7．28）ng／L、（24．02±2．62）ng／L和（20．89±1．82）ng／L,IL-1β浓度分别为（117．61±8．73）ng／L（108．90±6．53）ng／L、（27．06±3．32）ng／L和（24．58±3．45）ng／L,IL-6浓度分别为（108．67±5．86）ng／L（102．67±4．85）ng／L（25．94±2．83）ng／L和（19．68±2．66）ng／L,Aβ1-42＋Ac2-26组上清液TNF-α、IL-1β和IL-6浓度明显低于Aβ1-42组、Aβ1-42＋对照乱序肽组（P〈0．05）,与空白对照组比较差异无统计学意义。Aβ1-42＋Ac2—26组上清液NO浓度为（20．27±2．53）mmol／L,低于Aβ1-42组（75．68±6．14）mmol／L、Aβ1-42＋对照乱序肽组（69．25±4．50）mmol／L,与空白对照组（16．39±2．96）mmol／L比较差异无统计学意义。Western blot结果表明,Aβ1-42＋Ac2—26组TLR2水平明显低于Aβ1-42和Aβ1-42＋对照乱序肽组,与空白对照组比较差异无统计学意义。结论Ac2—26可有效抑制Apwz激活的小胶质细胞释放炎性介质TNF—α、IL—1β、IL-6和NO,主要通过下调TLR2的水平来实现的。Ac2—26可能作为一种新的治疗阿尔兹海默病的靶向药物。     

1个遗传性长QT间期综合征家系成员的遗传位点检测

目的对遗传性长QT间期综合征(long QT syndrome,LQTS)家系进行遗传分析,观察该家系成员发病的临床症状和心电图特点,推测其相应的致病基因型。方法家系共有6个成员被纳入研究。采集家系成员外周血,提取其基因组DNA。分析先证者及家系成员的临床资料和心电图资料,用PCR和直接测序法对致LQTS的KCNQ1、KCNH2、SCN5A基因编码区全部序列进行基因突变筛查。结果家系成员中共有LQTS患者3例,其中猝死1例,晕厥发作1例,无明显症状1例;共采集到2例LQTS患者心电图2例,QT间期分别为0.6 s和0.54 s。经基因检测发现,在两例患者中均发现了1个LQTS易感的单核苷酸多态性(SNP)位点SCN5A H558R,其他基因均未发现异常。结论在此遗传性LTQS中发现了一个易感SNP位点,推测此两例遗传性LQTS患者均为3型。     

联合检测 hs-CRP、PCT 和BNP在COPD急性恶化期中的诊断价值

目的：探讨联合检测超敏C反应蛋白（hs‐CRP）、降钙素原（PCT ）和B型脑钠肽（BNP）水平在慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性恶化期的诊断价值。方法选择56例COPD稳定期患者及44例 COPD急性恶化组患者,分别测定其血常规、PCT、hs‐CRP及BNP ,同时进行痰细菌培养。结果 COPD急性恶化期患者的hs‐CRP、PCT、BNP水平明显高于COPD稳定期患者（P＜0．05）,hs‐CRP、PCT、BNP的ROC曲线下面积分别为0．66、0．79、0．82,敏感性和特异性分别为80．2％、88．5％、91．3％和58．8％、71％、73．2％。联合检测hs‐CRP和BNP对COPD急性恶化期诊断的ROC曲线下面积为0．88,敏感性和特异性分别为92．8％和75．7％;联合检测PCT和BNP对COPD急性恶化期诊断的ROC曲线下面积为0．93,敏感性和特异性分别为96．3％和81．3％。结论在COPD急性恶化期,联合检测hs‐CRP、PCT 和BNP是较好的诊断指标,在呼吸系统细菌感染的判断上,PCT较hs‐CRP更有诊断价值,BNP可提示病情的严重程度。     

神经元损伤度对小胶质细胞表型的影响

目的：探讨不同的神经元损伤度对小胶质细胞表型的影响。方法将原代培养的神经元进行缺氧处理,不同的时长（0.5、1、2、4 h）后,复氧处理24 h ,收集神经元条件培养液（neuron‐conditioned media ,NCM ）,然后将NCM刺激原代培养的小胶质细胞24 h（NCM∶小胶质细胞培养液＝1∶1,V/V ）。采用Western blot法检测小胶质细胞内的M2表型标记物精氨酸酶‐1（arginase‐1）和激活标记物离子钙结合衔接分子‐1（Iba‐1）的表达变化规律,采用免疫荧光法检测ar‐ginase‐1的表达变化规律。同时,采用 ELISA 法检测小胶质细胞培养液上清中的营养因子,如脑源性神经营养因子（BDNF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）和炎性因子,如肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、白细胞介素‐1β（IL‐1β）、白细胞介素‐6（IL‐6）的分泌变化规律。最后,将不同损伤度的NCM 诱导小胶质细胞形成不同表型,将小胶质细胞和缺氧处理2 h后的神经元共培养24 h ,MTT法检测神经元的活力。结果轻微损伤（缺氧0.5、1 h）的NCM 明显下调M2型标记物arginase‐1的表达水平,中度（缺氧2 h）和重度（缺氧4 h）损伤的 NCM 能够上调arginase‐1的表达,各种损伤度的NCM都能上调Iba‐1的表达水平,提示其在一定程度上激活小胶质细胞。同时,轻微损伤的NCM明显上调小胶质细胞TNF‐α、IL‐1β和IL‐6的分泌,而中度和重度损伤的NCM 对这些促炎因子的释放没有影响,各种损伤度的NCM 都能明显上调营养因子的分泌。M T T法检测表明,轻微和重度损伤处理的NCM刺激的小胶质细胞进一步加重缺氧处理的神经元损伤,而中度损伤的NCM对缺氧处理后的神经元具有保护作用。结论神经元损伤度是决定小胶质细胞表型的重要因素,进而使小胶质细胞进一步发挥神经毒性或保护作用。     

巨噬细胞集落刺激因子在胃癌组织中的表达及其对肿瘤侵袭转移的影响

目的探讨巨噬细胞集落刺激因子(CSF1)在胃癌组织中的表达及其对肿瘤侵袭转移的影响。方法选取武汉市中心医院在2015年1月至2017年2月间收治的100例胃癌患者作为研究对象。采用免疫组织化学法检测胃癌组织中CSF1、血管内皮生长因子(VEGF)、甲羟戊酸脱羧酶(MVD)、β-连环蛋白(β-catenin)、E-钙黏附素(E-cadherin)、CD68、CD163、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及CD31的表达。结果 CSF1高表达样本数占50%,染色强度为(2.77±0.39)分,低表达样本数占50%,染色强度为(0.92±0.21)分;CSF1高表达患者的肿瘤胞膜不完整率明显高于CSF1低表达组,差异具有统计学意义(P0.05);CSF1高表达患者的VEGF、MVD、MMP-9及M2型肿瘤相关巨噬细胞(M2-TAM)表达量显著高于低表达组,差异具有统计学意义(P0.05);VEGF、MVD、MMP-9及M2-TAM表达均与CSF1表达呈显著正相关;CSF1高表达组患者E-cadherin表达显著低于低表达组,β-catenin显著高于低表达组,差异均有统计学意义(P0.05),且E-cadherin表达与CSF1呈显著负相关,β-catenin表达与CSF1呈显著正相关。结论 CSF1的高表达与炎性反应程度以及胃癌上皮细胞-间充质转化密切相关。     

非小细胞肺癌患者血浆中miR-26b的表达及其临床意义

目的探讨微小RNA-26b(miR-26b)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中的表达水平及其在肺癌辅助诊断及疗效监测中的作用。方法收集80例NSCLC患者(肺癌组,其中腺癌48例、鳞癌32例,临床分期Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期分别有30、24、26例)及45例健康人(对照组)的血浆,应用实时荧光定量PCR(FQPCR)检测miR-26b水平。80例肺癌患者中有50例收集到配对的治疗前后血浆,通过FQ-PCR检测上述50例肺癌患者治疗前后血浆中的miR-26b水平。结果对照组血浆miR-26b相对表达量为33.03±19.6,肺癌组为11.57±9.41,肺癌组血浆miR-26b显著低于对照组(t=6.908,P0.01)。肺腺癌和肺鳞癌患者血浆miR-26b水平分别为11.32±8.56、12.03±9.92,均低于对照组(t=6.841、6.162,P0.01);肺腺癌和肺鳞癌患者之间血浆miR-26b水平无显著差异(P0.05)。肺癌组中,Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者血浆miR-26b相对表达量分别为15.26±11.17、9.47±7.04、9.37±6.66,Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期血浆miR-26b水平均低于对照组(t值分别为4.987、7.235、7.394,P0.01);Ⅲ期和Ⅳ期患者血浆miR-26b水平低于Ⅰ/Ⅱ期患者(t值分别为2.32、2.43,P0.05);Ⅲ期与Ⅳ期患者之间血浆miR-26b水平无显著差异(P0.05)。50例肺癌患者治疗前后血浆miR-26b相对表达量分别为10.68±8.18、18.69±10.71,治疗后血浆miR-26b水平较治疗前显著升高(t=-4.855,P0.01)。结论 miR-26b在肺癌患者血浆中明显降低,并且血浆miR-26b水平与肺癌分期密切相关,血浆miR-26b在治疗后显著升高,血浆miR-26b水平有可能作为肺癌辅助诊断及疗效监测的新指标。