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目的 研究乙醛脱氢酶-1(ALDH-1)是否可以作为分选心肌干细胞(CSC)的有效标志物.方法 从裸鼠心脏分离培养细胞球,收集细胞球制成单细胞悬液,利用Aldefluor试剂结合流式细胞术来分选心脏球体细胞中的SSCloAldebr细胞(ALDH-1阳性细胞),通过增殖能力、克隆形成、表型分析及定向分化能力鉴定其干细胞(SC)的特性.结果 裸鼠心脏细胞无血清培养可形成细胞球,球体细胞中可检测到ALDH-1阳性细胞的存在;ALDH-1阳性细胞具有高增殖性、高克隆形成率及定向分化的能力,具有SC的特性.结论 裸鼠心脏中存在CSC;ALDH-1可以作为CSC有效的标志物. 相似文献
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目的 利用重组BCG (rBCG)技术,构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Der p2和Omp D抗原的两种rBCG 口服疫苗.方法 经PCR法分别扩增获得Der p2和Omp D基因,测序正确后将两者克隆入原核表达载体pProEX HTb,获得pProEX HTb Der p2-Omp D质粒.①串联表达:将Der p2-Omp D融合基因亚克隆入穿梭胞壁表达载体pCW,经酶切鉴定阳性命名为pCW Der p2-Omp D 质粒.将此重组质粒电穿导入BCG感受态细胞,构建可胞壁串联表达Der p2-Omp D融合蛋白的rBCG;②并联表达:构建pCW-Der p2与pCW-Omp D两种质粒,并将二者同时电穿导入BCG感受态细胞,以构建胞壁并联表达Der p2和Omp D蛋白的rBCG.经潮霉素抗性筛选的阳性克隆,均采用以下三种方式进行鉴定:PCR特异性扩增目的基因片段;用兔抗Der p2多克隆抗体与兔抗Omp D多克隆抗体对阳性克隆分别进行斑点免疫杂交法和间接免疫荧光法鉴定.结果 采用基因工程手段制备出以胞壁形式串联和并联表达Der p2和Omp D蛋白的两种rBCG口服疫苗,并通过PCR、斑点免疫杂交法及间 接免疫荧光法分别进行鉴定.结论 两种rBCG 口服疫苗构建成功,为体外实验和临床应用提供基础. 相似文献
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