严重急性呼吸综合征临床确诊病例与排除疑似病例血清学检测结果比较

严重急性呼吸综合征(SARS)作为一种呼吸道传染病，发病初期尚无客观的实验室诊断指标，给SARS准确诊断和鉴别造成很大困难，在一定程度上增加了疑似患者的范围。血清学诊断是世界卫生组织推荐的SARS病原学检测的主要方法，为临床早期诊断SARS排除疑似病例提供了帮助。我们对SARS临床确诊病例与疑似病例血清学检测结果进行分析。     

离体消化法分离原代肝星状细胞

目的:改进大鼠肝星状细胞的分离方法,提高肝星状细胞分离的纯度和活力.方法:本研究主要依据Weiskirchen的方法并加以改进,灌注后即将肝脏从原位分离,随之使用0.25%的链霉蛋白酶E和0.025%的胶原酶Ⅳ消化,经DNA酶Ⅰ分散,筛网过滤、离心,将细胞沉淀用18%Nycodenz密度梯度离心,获取肝星状细胞.台盼蓝染色鉴定细胞活率,Desmin免疫细胞化学染色法鉴定肝星状细胞纯度.结果:本方法所建立的离体消化分离肝星状细胞方法,每只大鼠肝约获取2.7×107个肝星状细胞,活率、纯度分别为99%、90%.该方法可有效减少细胞污染、提高细胞活力,值得广泛应用.结论:本文所建立的大鼠离体消化法分离肝星状细胞,方法简单可行,较大程度避免了细胞污染,提高了细胞的存活率和纯度.     

液态芯片技术检测抗人类白细胞抗原抗体抗主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点抗体在移植肾围手术期急性抗体介导性排斥反应中的应用

目的探讨液态芯片技术(Luminex)检测移植肾受者围手术期发生急性抗体介导性排斥反应者抗人类白细胞抗原(HLA)抗体、抗主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点(MICA)抗体水平与影响。方法选取我院器官移植研究所2008年1月至2013年6月肾移植术后围手术期患者106例为研究对象,采用Luminex技术检测接受同种异体肾移植手术并明确病理诊断肾围手术期急性抗体介导性排斥反应患者血清中抗HLA抗体、抗MICA抗体,并同步检测血肌酐、尿量及移植肾超声等临床指标。结果参照Banff 2007标准组织病理学诊断移植肾超急性排斥反应2例,急性抗体介导性排斥反应15例,同时应用Luminex方法检测抗HLA抗体、抗MICA抗体水平,HLA抗体检测结果15例阳性,阳性率为88%(15/17),检出PRAⅠ类和Ⅱ类阳性率分别为47%(7/15)和53%(8/15);MICA抗体2例阳性,阳性率为12%(2/17),其余89例其他病理类型检测未见抗HLA抗体、MICA抗体阳性,移植肾穿刺病理结果显示HLA抗体、抗MICA抗体阳性患者C4d沉积均为阳性。结论抗HLA抗体、抗MICA抗体可预测围手术期急性抗体介导性排斥反应发生及治疗效果,对于及时诊断及治疗排斥反应提供了一个重要指标,可影响移植肾的长期存活。     

更昔洛韦对原位肝移植术后巨细胞病毒感染的预防和治疗:19例临床资料回顾

目的:巨细胞病毒感染是器官移植后的一个严重并发症,回顾性分析肝移植术后患者巨细胞病毒感染的诊断和防治方法.方法:①回顾分析2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院全军器官移植中心收治的19例肝移植受者的临床资料,供者均为健康献肝者.供者、受者对治疗方案均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准.②术后1个月检测1次巨细胞病毒血清抗体,预防和治疗巨细胞病毒感染均采用静脉注射更昔洛韦.术后采用三联免疫抑制疗法,根据术后血药浓度及肝功能改变调整免疫抑制药物用量.③采用酶联免疫吸附法检测患者血中巨细胞病毒抗体巨细胞病毒IgG、巨细胞病毒IgM.结果:19例受者中6例发生巨细胞病毒感染,均无临床症状,并全部治愈.结论:更昔洛韦能够有效治疗肝移植术后巨细胞病毒感染.积极预防、早期治疗肝移植术后患者巨细胞病毒感染是治疗成功的关键.     

调节性树突细胞对皮肤移植小鼠IL-10+调节性B细胞的影响

目的 探讨吞噬了供者凋亡淋巴细胞的未成熟树突细胞(imDC)对皮肤移植受体小鼠外周血IL-10+CD19+调节性B细胞(Breg)比例及移植物存活时间的影响.方法 以C57BL/6小鼠作为受者,BALB/c小鼠为供者,建立小鼠皮肤移植模型.分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,经小鼠重组白细胞介素4(IL-4)和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)共同诱导,制备并培养imDC.分离BALB/c小鼠脾淋巴细胞(SP),经光化学照射方法(PUVA)处理,得到供者小鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP).在体外将PUVA-SP与C57BL/6小鼠骨髓来源的imDC共同培养,得到PUVA-SP DCs.根据受体小鼠术前接受的静脉输注成分将其随机分为4组(n=14):PUVA-SP DC组、imDC组、成熟树突细胞(maDC)组和PBS对照组.于手术前7d分别从尾静脉注入1×106个(0.2ml)PUVA-SP DC、imDC、maDC或0.2ml PBS.于移植术后观察受体小鼠的移植物存活时间、外周血IL-10+CD19+ Breg比例及IL-10的表达情况.结果 移植术后,受体小鼠外周血IL-10+CD 19+Breg细胞占CD19+B细胞的比例在PUVA-SP DC组为7.48％,明显高于imDC组(4.12％)、maDC组(3.01％)和PBS对照组(2.37％).PUVA-SP DC组小鼠血清中IL-10表达水平为58.2±0.9ng/ml,与maDC组(20.1±1.6ng/ml)、imDC组(26.2±1.3ng/ml)及PBS对照组(19.0±0.6ng/ml)比较显著升高(P＜0.01).PUVA-SP DC组移植物存活时间为62.3±2.6d,显著长于maDC组(20.7±1.9d)、imDC组(12.1±1.0d)和PBS对照组(11.0±1.3d,P＜0.01).结论 移植术前输注PUVA-SP DCs可显著延长移植物存活时间,增加受者体内IL-10的表达水平,诱导产生较多分泌IL-10的调节性B细胞.     

肾移植后诱导活化高表达CD25的CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞的表型特点与免疫调节功能

目的 探讨肾移植受者活化并表达不同强度CD25的CD4细胞的表型特征和功能特点.方法依据CD25的表达水平,应用流式细胞仪将9例行初次亲属活体肾移植受者的外周血CD4~+ T细胞分为CD25~-、CD25高表达(CD25~(high))和CD25低表达(CD25~(low))3群,并比较3群细胞叉头翼状螺旋转录因子(FoxP3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)表达强度.经免疫磁珠法和CD4~+ CD25~+调节性T细胞分选试剂盒分选得到受者外周血CD4~+ CD25~-、CD4~+ CD25~(high) T细胞,分别作为反应细胞,以Co~(60)γ射线照射灭活的供者外周血单个核细胞(PBMC)作为刺激细胞,建立体外单向混合淋巴细胞培养系统.采用半定量RT-PCR检测系统中IL-2 mRNA的表达.结果 在肾移植术后受者3群细胞中,FoxP3的表达以CD4~+ CD25~(high)细胞最高(93.7%±3.58%),其次是CD4~+CD25~(high)细胞(16.4%±6.8%),CD4~+ CD25~-细胞最低(1.8%±1.1%),三者间差异均有统计学意义(P<0.01);CTLA-4表达以CD4~- CD25~(high)细胞最高(80.8%±7.9%),其次是CD4~- CD25~(low)细胞(22.9%±6.5%),CD4~- CD25~-细胞最低(4.1%±2.4%),三者间差异均有统计学意义(P<0.01).在混合淋巴细胞培养中,CD4~- CD25~(high)细胞受移植抗原刺激后不表达IL-2 mRNA;按照1:2比例加入CD4~- CD25~(high)细胞后,CD4~-细胞表达的IL-2 mRNA平均被抑制了60%.结论 肾移植受者所有活化T细胞的表面均有CD25表达,高表达CD25的细胞群具有调节性T细胞的表型特点,为CD4~+ CD25~(high)曲调节性T细胞.     

HLA-G与肾移植术后急性排斥反应和巨细胞病毒活动性感染的相关性研究

目的 探讨HLA-G的表达水平与肾移植术后急性排斥反应(AR)和巨细胞病毒(CMV)活动性感染的相关性.方法 根据术后是否发生AR或CMV活动性感染,将132例初次肾移植受者分为肾功能稳定组、AR组和CMV组.另选择41例健康供者作为对照组.采用流式细胞术、酶联免疫吸附试验、蛋白质印迹法以及实时定量聚合酶链法检测各组HLA-G及其mRNA的表达,并采用免疫组织化学法观察移植肾组织中HLA-G的表达.结果 肾移植前后各组膜结合型HLA-G1 (mHLA-G1)的表达均处于较低水平,仅术后CMV组mHLA-G1+的中性粒细胞出现显著升高(P＜0.05).术前可溶性HLA-G5(sHLA-G5)的表达水平肾功能稳定组显著高于对照组(P＜0.05);术后sHLA-G5的表达水平CMV组显著高于肾功能稳定组(P＜0.05),而肾功能稳定组均高于对照组和AR组(P＜0.05),AR组与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).术后CMV组sHLA-G5 mRNA的表达水平最高(P＜0.05),肾功能稳定组次之,对照组和AR组均较低.21例AR组移植肾组织活检样本中,17例HLA-G表达呈阴性,3例呈阳性,1例呈弱阳性;9例CMV组移植肾组织活检样本的HLA-G表达均为阳性.132例受者中,28例CMV感染者的AR发生率为7.1％(2/28),104例非CMV感染者的AR发生率为25.0％(26/104),二者间AR发生率的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 sHLA-G5可作为预测AR和CMV感染的生物标志分子;CMV感染和AR与受者体内的免疫平衡状况相关.     

慢性荨麻疹患者外周血Th淋巴细胞分化取向

目的探讨慢性荨麻疹患者外周血辅助性T淋巴细胞（Th）亚群的分化取向及其在慢性荨麻疹发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测经四色荧光抗体染色的慢性荨麻疹患者及正常对照外周血CD4^＋/IFN-γ^＋Th1）、CD4^＋/IL-4^＋（Th2）细胞含量,并采集外周血单一核细胞（PBMCs）提取RNA,应用逆转录聚合酶链扩增（RT-PCR）检测Th1细胞因子受体IFN-γR mRNA表达水平。结果慢性荨麻疹组Th1细胞含量、Th1/Th2比值均明显低于正常对照组（P〈0.05）,Th2细胞含量高于正常对照组（P〈0.05）,慢性荨麻疹患者外周血单一核细胞（PBMC）中Th1细胞因子受体IFN-γR mRNA表达水平低于正常对照组。结论慢性荨麻疹患者外周血存在着Th细胞亚群分化失衡,可能是慢性荨麻疹发病的机制之一。     

流式细胞技术检测肾脏移植受者pp65抗原血症的意义

背景：临床对pp65抗原的检测主要采用免疫荧光技术，但是该方法步骤繁琐，需要对标本进行人工计数，在检测过程中受人为的影响因素较多。 目的：探讨使用简便的流式细胞技术检测人巨细胞病毒pp65抗原血症的可行性及其特点。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2007-09/2008-03在解放军总医院附属二院器官移植中心完成。 材料：肾脏移植受者外周血标本145份。 方法：分离人外周血白细胞，分别采用免疫荧光技术与流式细胞技术对人巨细胞病毒pp65抗原检测。 主要观察指标：流式细胞仪在激发波长为488 nm处的吸收峰判断阳性检出。 结果：对肾脏移植受者进行免疫荧光技术检测，在15例受者的25份标本中检出阳性，检出的特异性为76.0%；对肾脏移植受者进行流式细胞技术检测，在5例受者的11份标本中检出阳性，检出的特异性为54.5%。使用Fisher确切概率法对两种不同检测方法检出的效果进行检验，结果两种检测方法的检出效果差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：免疫荧光技术和流式细胞技术两种pp65抗原检测方法的检出效果无差异，因此可以通过流式细胞技术对pp65抗原进行检测，并且结果更加客观。     

流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值

目的探讨流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值。方法根据术后影像学和实验室检查结果,将51例首次肾移植受体分为细菌组33例、真菌组9例、BK病毒组9例;另选择肾移植术后稳定的受体28例作为稳定组。采用流式细胞术分析各组受体外周血淋巴细胞亚群比例和绝对计数。比较各组肾移植受体的肾功能、外周血淋巴细胞亚群的比例及绝对计数;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析淋巴细胞亚群比例和绝对计数在肾移植术后感染性疾病中的诊断价值。结果与稳定组相比,细菌组、真菌组和BK病毒组血清肌酐(Scr)水平和血尿素氮(BUN)水平均有不同程度升高,差异均有统计学意义(P=0.035、0.007、0.024;0.037、0.006、0.032)。与稳定组比较,细菌组和真菌组CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例均下降(P=0.036、0.015);真菌组CD4+/CD8+T细胞比例明显下降(P=0.004)。与细菌组相比,真菌组和BK病毒组的CD3+CD8+T细胞比例均升高(P=0.013、0.008),CD3+CD4+T细胞比例均降低(P=0.003、0.010),CD4+/CD8+T细胞比例均明显下降(P=0.003、0.005)。与稳定组比较,细菌组、真菌组、BK病毒组CD3+T细胞数量、CD3+CD8+T细胞数量、CD16+CD56+NK细胞数量均明显降低(P=0.025、0.002、0.003;0.015、0.005、0.006;0.001、0.001、0.031);真菌组和BK病毒组CD3+CD4+T细胞数量降低(P=0.001、0.003);BK病毒组CD19+B细胞数量明显降低(P=0.019)。与细菌组比较,真菌组CD3+CD4+T细胞数量明显降低(P=0.023)。ROC曲线分析显示,CD3+CD4+T细胞和CD16+CD56+NK细胞数量诊断真菌感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8492和0.8889;CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD19+B细胞数量诊断BK病毒感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8472、0.8452和0.8115。结论采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群可以评估患者机体免疫功能状态,绝对计数能够直观地判断免疫程度,两者结合对于肾移植受者感染性疾病的诊断和鉴别诊断具有指导意义。