着色性干皮病基因B对白介素-6介导血管平滑肌细胞增殖作用的影响及机制

目的探讨着色性干皮病基因B（xeroderma pigmentosumB,XPB）对白介素-6（IL-6）介导人血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及凋亡的影响。方法用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1-XPB和空载质粒pcDNA3.1稳定转染VSMC,然后给予100 U/mL的IL-6孵育48 h。实验分为6组:空白对照组;pcDNA3.1组;pcDNA3.1-XPB组;IL-6组;IL-6+pcDNA3.1组;IL-6+pcDNA3.1-XPB组。用RT-PCR和Western blot法检测XPB、Bcl-2、Bax和野生型p53（wtp53）表达量的变化;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果 RT-PCR和Westernblot检测发现,重组质粒pcDNA3.1-XPB的转染使得细胞XPB表达增高（P<0.05或P<0.01）,同时使得Bcl-2表达降低、Bax和wt-p53表达增高（P<0.05或P<0.01）,并能抑制IL-6促进VSMC的Bcl-2表达增高、Bax和wt-p53表达降低的作用（P<0.05或P<0.01）;MTT结果显示,XPB高表达抑制了细胞增殖活力（P<0.05）,并能抑制IL-6促进VSMC增殖的作用（P<0.05）;流式细胞仪结果显示,XPB高表达引起了细胞G₀/G₁期增加（P<0.05）、S期减少（P<0.05）、凋亡率增加（P<0.01）,并能抑制IL-6促进VSMCG₀/G₁期减少、S期增加、凋亡率降低的作用（P均<0.01）。结论 XPB基因能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。     

瑞舒伐他汀抑制C-反应蛋白诱导的晚期内皮祖细胞炎症因子的表达

 目的： 观察瑞舒伐他汀对C-反应蛋白（CRP）诱导晚期内皮祖细胞分泌单核细胞趋化蛋白1（MCP-1)、白细胞介素8（IL-8）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）及细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的影响。方法：密度离心法获取人脐血单个核细胞并培养获得晚期内皮祖细胞。以不同浓度和不同时间CRP刺激晚期内皮祖细胞,以及将晚期内皮祖细胞用不同浓度（10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L）瑞舒伐他汀预孵育12 h后再用CRP 50 mg/L刺激,观察细胞的炎症变化。采用荧光定量PCR方法检测IL-8、MCP-1、VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达情况,用ELISA检测细胞上清液MCP-1和VCAM-1蛋白表达情况。结果：IL-8、MCP-1、VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达量及MCP-1和VCAM-1蛋白表达量均随CRP刺激浓度的增高逐渐增加;50 mg/L CRP不同时间刺激下IL-8、VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达量在6 h达高峰,MCP-1则在3 h即达高峰,而MCP-1和VCAM-1蛋白水平均随CRP刺激时间增加逐渐增高。而以不同浓度瑞舒伐他汀预孵育,可以浓度依赖性地抑制CRP诱导的晚期内皮祖细胞各炎症因子的表达。结论：不同浓度、不同时间的CRP刺激可增加晚期内皮祖细胞炎症因子表达,进一步证明CRP并非仅仅为炎症标志物;瑞舒伐他汀可显著抑制CRP诱导晚期内皮祖细胞炎症因子的表达,从一个新的角度阐明了瑞舒伐他汀的作用机制。     

CRP对人外周血CD14+单核细胞Toll受体信号转导的影响

Objectives In this work,we explore the effect of atorvastatin on myocardial apoptosis and caspase-8 acti- vation after coronary microembolization(CME) in rats. Methods Fifty rats were randomly divided into five groups; the coronary microembolization(CME) group,the sham-operated (sham) control group,the gastric lavage control group, the atorvastatin lavage group,and the caspasse-8 inhibitor (N-acetyl-Ile-Glu-Thr-Asp-CHO,abbreviated as CHO) group,with 10 rats for each group.A microembolization ball was injected through the left ventricle for constructing the CME model.Animals in the sham control group were given an injection of physiological saline instead of the microembolization ball.Seven days before the operation,the atorvastatin group underwent gastric lavage with 20 mg/kg of atorvastatin once a day.Gastric lavage control animals underwent gastric lavage with an equivalent dose of physiological saline instead of the atorvastatin.Animals in the CHO group were given an intraperitoneal injection of 10 mg/kg of CHO 30 min before the operation.Six hours after the operation,cardiac ultrasonic detection was conducted on each group to measure the cardiac function indexes.TUNEL(Terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated dUTP nick end labeling) assays were used to measure myocardial apoptosis,and western blots were used to quantify the expression levels of activated caspase-3 and -8.Results(1) The echocardiographic parameters showed that,compared to the sham control animals,the left ventricular ejection fraction(LVEF) of the CME group was significantly decreased(P<0.05).In addition, cardiac sonography revealed a decrease in the left ventricular shortening fraction(FS) and cardiac output(CO), but an increase in the left ventricular end-diastolic dimension (LVEDd).Compared to the CME group,the atorvastatin and CHO groups exhibited significantly improved cardiac function (P<0.05).(2) When compared with the sham control,the myocardical apoptotic rate of the CME group,as well as the levels of activated caspase-3     

C反应蛋白对人外周血CD14单核细胞TLR4信号转导的影响

目的: 观察C反应蛋白(CRP)对CD14⁺单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响,以探讨CRP在急性冠脉综合征(ACS)致炎机制中的作用。方法: 不同浓度(5、25、50、100 mg/L)和不同作用时间(6、12、24、48 h)的CRP刺激正常人外周血CD14⁺单核细胞,或者不同浓度TLR4抑制剂预先干预CD14⁺单核细胞后,再给予CRP刺激。应用流式细胞仪检测细胞表面TLR4蛋白的表达,定量PCR方法检测TLR4 mRNA和髓样分化蛋白2(MD-2)mRNA表达,ELISA检测刺激前后细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、金属蛋白酶9(MMP-9)水平。结果: CRP可剂量依赖和时间依赖地增加CD14⁺单核细胞表达TLR4和MD-2,高浓度TLR4抑制剂可完全阻断CRP对TLR4、MD-2的影响。TNF-α、IL-6、MMP-9与TLR4、MD-2也呈现相同的变化。结论: CRP可激活正常人CD14⁺单核细胞TLR4信号转导途径,并诱导产生TNF-α、IL-6、MMP-9,提示CRP可作为病原相关分子模式(PAMP),通过TLR4模式受体介导而产生炎症反应,参与动脉粥样硬化形成,促进ACS炎症的发展。     

真实世界研究的方法与实践

随机对照临床试验是目前获得证据、制定诊疗策略的主要依据之一,但是,随机对照试验并不总能代表临床实践中的真实情况。真实世界研究是观察性研究,通过“真实世界样本”来反映真实世界总体。临床试验关注效力研究。而真实世界研究则关注效果研究。真实世界研究需要使用多重倾向性评分来减少协变量在组问分布的不均衡性。近年来,真实世界研究正越来越多地应用到临床研究中,可将经验医学与循证医学结合起来。临床试验和真实世界研究是承启关系,前者的结果需要后者的进一步验证及拓展,二者综合考虑才是最佳选择。     

曲美他嗪对心肌梗死大鼠短期心肌保护作用的研究

目的: 探讨曲美他嗪对大鼠心肌梗死心脏的保护作用及其部分作用机制。方法: 90只SPF级SD大鼠随机分为3组:假手术组(n=30)、心肌梗死组(n=30)和曲美他嗪治疗组(n=30)。心肌梗死组和曲美他嗪治疗组在高位结扎左冠状动脉前降支,制成心肌梗死模型。假手术组及心肌梗死组在术前灌胃给予生理盐水,曲美他嗪组灌胃给予曲美他嗪(3 mg/kg,每天2次),连续治疗1周、2周和4周。冠脉结扎后8 h、24 h和48 h检测血清心肌肌钙蛋白I浓度。在治疗后1周、2周和4周后测量平均动脉压、心率、收缩期心室压力最大上升速率(+dp/dt_max)及舒张期左室压力最大下降速率(-dp/dt_max),并检测心肌梗死面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数。结果: 在连续给药2周及4周后曲美他嗪组与心肌梗死组相比,能显著改善大鼠的心脏收缩功能 及舒张功能 (均P＜0.01),不影响心率及平均动脉压(P＞0.05); 曲美他嗪可降低大鼠心肌梗死后24 h血清心肌肌钙蛋白I水平(P＜0.01),减少大鼠心肌梗死面积(P＜0.01),并抑制心肌缺血损伤区的心肌细胞凋亡(P＜0.01)。结论: 曲美他嗪对心肌梗死后大鼠具有明确的心脏保护作用,抑制心肌梗死后缺血损伤区细胞凋亡是其心肌保护作用的机制之一。     

人参皂苷Rb1对糖尿病大鼠心脏功能和心肌细胞凋亡的影响

目的 探究人参皂苷Rb1(GRb1)对糖尿病大鼠心脏功能、心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 5～6周龄SPF级SD雄性大鼠24只,随机分为对照组、糖尿病组、糖尿病+低剂量GRb1(10 mg/kg)组和糖尿病+高剂量GRb1(20 mg/kg)组,每组6只.除对照组外,其他组大鼠腹腔注射40 mg/kg链脲佐菌素(ST...