微小牛蜱磷酸丙糖异构酶基因片段的克隆与原核表达

为克隆和表达微小牛蜱磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase,Tim)编码基因,提取微小牛蜱成虫总RNA,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其连入pMD-18T载体,经酶切和测序鉴定后,将正确的目的基因与pET-28a表达载体连接,并转入大肠埃希菌(E.coli)Rosetta(DE3)中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定分析。结果发现,克隆所得的微小牛蜱成虫tim基因片段长度为750bp(登录号为JX112888),其中开放阅读框为750 bp,编码249个氨基酸,与微小牛蜱胚胎中克隆出的tim基因序列的同源性为99%。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白Tim相对分子质量(Mr)约为27 000。     

旋毛虫肌幼虫囊包不染色标本的制作

在医学寄生虫学实验教学中,制作旋毛虫肌幼虫囊包标本通常采用染色封制法,梭形囊包明显,但如果分色过程掌握不好,虫体轮廓不清。作者尝试制作旋毛虫肌幼虫囊包不染色封制标本,用于教学实践取得良好效果。介绍如下。 旋毛虫肌幼虫囊包取自感染旋毛虫幼虫的猪横纹肌。操作工具:眼科剪,眼科镊,载玻片,大瓶皿,显微镜,吸管,玻片标本盘等。试剂:甲醛,蒸馏水,乙醇,水杨酸甲酯,中性树胶。 将感染旋毛虫幼虫的肌肉剪成碎块,夹在两张载玻片之间,轻轻加压、捆扎,置于10％甲醛固定12～24 h。解开载玻片后再浸泡1～2h,充分固定。倾去甲醛,用蒸馏水洗3次,每     

住院幼儿TORCH感染状况

1临床资料2003-01/2004-06洛阳市妇幼保健院住院幼儿172(男123,女49)例,出生3 h～6 mo. 取幼儿静脉血2 mL,分离血清后置-20℃冰箱保存待测. ELISA TORCH-IgM和-IgG诊断试剂盒均购自华美生物工程公司. MK3型全自动多功能酶标仪.     

PBL模式在医学微生物学教学中的应用

在2004级本科临床专业中,采用PBL及传统方法教学,并将教学效果进行了考核。结果表明,PBL组在测验成绩及提高自主学习能力、表达能力、团结协作能力等多方面均优于对照组。说明PBL是一种先进的教学方法,适合于医学微生物学教学,但对其不足也应引起重视。     

两种药物治疗育龄妇女弓形虫感染的效果比较

弓形虫（Toxoplasma，Tox）为机会致病原虫，广泛寄生于人和多种动物的有核细胞内，造成多种脏器和组织的损害。孕期弓形虫急性感染可垂直传播，影响胚胎发育，而孕妇既往感染则影响不大。但研究发现，曾经感染过弓形虫的育龄妇女在妊娠期间，由于内分泌机能和代谢的改变，机体免疫机能减弱，原有的弓形虫包囊破裂引起复发，使潜伏在孕妇体内的弓形虫被激活而成为活动性感染，也可垂直传播，影响胚胎发育。因此开展育龄妇女孕前弓形虫感染检测和治疗可减少不良妊娠的发生。为探讨阿奇霉素及乙酰螺旋霉素对弓形虫感染的治疗效果，作者等以育龄妇女中的弓形虫感染者为对象，对两种药物的临床效果进行了观察。     

从微量血中快速制备线粒体DNA片段

目的 建立从微量血中快速制备线粒体DNA(mtDNA)片段。方法取50μl抗凝血和常规酶解法提取的血DNA,同时扩增核DNA(nDNA)上的基因片段和mtDNA上的基因片段,华美公司生产的RedyPCR(tm)微量全血DNA纯化系统进行比较,PCR相对定量分析比较这3种方法提取的mtDNA片段的纯度。结果RedyrPCR(tm)微量全血DNA纯化系统得到的mtDNA和常规酶解法提取的mtDNA有nDNA污染,而作者建立的方法获得的mtDNA纯度较高。结论同时与该法简便快捷地排除了nDNA的污染,适合于对mtDNA进行PCR分析和研究。     

鸡蛋主要过敏原Gal d1片段基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定

目的克隆、表达和纯化鸡蛋主要过敏原Gald1区基因,并对其免疫学活性进行鉴定。方法用生物信息学方法对鸡蛋主要过敏原Gald1基因进行抗原表位预测,设计特异性引物,用PCR的方法分别扩增Gald1N端和C端基因,将其分别连接到原核表达载体PET32a上。重组质粒转入大肠杆菌,用IPTG诱导表达,通过镍亲和柱层析法纯化重组蛋白,最后用Western-blotting检测重组蛋白的免疫原性。结果表达的蛋白均以可溶性为主,N端融合蛋白相对分子质量为28600,C端融合蛋白相对分子质量为26800,纯化的N端和C端蛋白均有较好的免疫原性,C端的免疫原性强于N端。结论成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原基因Gald1的N端和C端,为鸡蛋过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础。     

住院患儿TORCH感染172例血清学检查分析

目的:了解人类出生缺陷病原微生物(TORCH)在患儿中的感染情况。方法:应用ELISA法检测172例出生3h至6月的住院患儿血清TORCH的特异性IgM、IgG抗体。结果:住院患儿TORCH-IgM总阳性率为13.37%(23/172),TORCH-IgG总阳性率为67.44%(116/172)。TORCH-IgM阳性者中RUV、CMV、TOX、HSV的检出率分别为11.05%、0.58%、1.16%、0.58%,有1例为RUV-IgM、TOX-IgM同时阳性。在肺炎、肝脏损伤及黄疸和神经系统损伤中TORCH-IgM的阳性率分别为10%、11.42%、31.82%。男女患儿TORCH-IgM的阳性率分别为11.38%、18.37%。结论:TORCH在患儿中以RUV感染最为普遍,患儿神经系统损伤中TORCH最为常见。男女患儿之间无显著性差异。故对住院患儿应及早做TORCH检测,以及早诊断,正确治疗,减少远期并发症。