汉滩病毒重组腺病毒疫苗与DNA疫苗的联合免疫效果分析

汉坦病毒基因组由L、M、S3个负链RNA片段组成，M片段编码囊膜糖蛋白G1和G2，G1和G2在病毒的吸附、病毒膜与细胞膜的融合、中和抗体的产生等方面起着重要作用。以腺病毒为载体的活载体疫苗安全性好，能有效感染呼吸道和肠道等组织细胞，不仅能激发黏膜免疫，还能诱导系统免疫和细胞免疫反应。我们分别以腺病毒和质粒pcDNA3．1为载体，构建了含有完整汉滩病毒基因M片段和单独表达G1的重组腺病毒和重组DNA疫苗。DNA疫苗能够引发体液和细胞介导的免疫应答，但接种后只能引发很弱的免疫应答。为了克服上述疫苗的缺     

汉坦病毒疫苗研究进展

汉坦病毒属于布尼亚病毒科的汉坦病毒属，主要引起人的两种疾病：肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征。汉坦病毒基因组包括(LM、S)3个负链RNA片段。分别编码RNA聚合酶、囊膜糖蛋白G1和G2和核心蛋白。汉坦病毒基因工程疫苗研究主要包括亚单位疫苗、活病毒载体疫苗和核酸疫苗；传统的灭活疫苗包括鼠脑来源和细胞培养的灭活疫苗，本文就汉坦病毒这两方面的研究进展进行了综述。     

1例HIV—1感染者HIV辅助受体CCR5基因的核酸序列分析

目的 研究中国人ＨＩＶ辅助受体ＣＣＲ５基因变异的频率和类型,观察ＣＣＲ５基因变异与ＨＩＶ感染和发病的关系。方法 采集６例河北籍ＨＩＶ感染者和部分配偶、子女的共１４份血液标本,分离外周血淋巴细胞,提取ｍＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ方法对ＣＣＲ５基因进行扩增分析。对其中１例纯合的ＣＣＲ５缺失缺陷感染者的扩增片段进行了克隆和序列测定。结果 在所检测的１４份样品中,发现１例纯合的ＣＣＲ５基因缺失缺陷型。对该片     

人血管生成素-1基因的克隆及表达载体的构建

【目的】克隆人血管生成素-1基因，并构建原核、真核表达载体。【方法】提取人骨髓中的总RNA，反转录成eDNA，利用巢式PCR技术扩出人血管生成素-1基因片段，并克隆到PQE-31、B7载体中。【结果】克隆了正确的人血管生成素-1基因，构建了PQE31 Ang-1、B7Ang-1载体。【结论】人血管生成素-1基因的克隆及表达载体的构建，为进一步研究其功能、活性和应用奠定了基础。     

1例HIV-1感染者HIV辅助受体CCR5基因的核酸序列分析

目的 研究中国人HIV辅助受体CCR5基因变异的频率和类型,观察CCR5基因变异HIV感染和发病的关系。方法 采集6例河北籍HIV感染者和部分配偶、子女的共14份血液标本,分离外周血淋巴细胞,提取mRNA,用RT-PCR方法对CCR5基因进行扩增分析。对其中1例纯合的CCR5缺失缺陷型感染者的扩增片段进行了克隆和序列测定。结果 在所检测的14份样品中,发现1例纯合的CCR5基因缺失缺陷型。对该片段的序列测定表明,其缺失片段为60个碱基,与国外报道的32个碱基缺失有28个碱基重叠。结论 首次在中国人群中发现了纯合的辅助受体CCR5基因缺失缺陷型,对这种基因变异与HIV感染和发病关系的研究正在进行中。     

汉坦病毒包膜糖蛋白基因核酸免疫的初步研究

目的将克隆有汉坦病毒包膜糖蛋白基因M片段及G1、G2基因的重组质粒免疫动物，了解上述目的基因在核酸疫苗中的应用价值。方法大量制备已构建好的pcDNA3．1-M、pcDNA3．1-G1、pcDNA3．1-G2重组质粒DNA及对照空质粒pcDNA3．1。然后用这四组质粒DNA通过肌肉注射的方法免疫6～8周龄的BALB／c小鼠（每组5只），每4周免疫一次，共免疫3次，每次免疫前及最后一次免疫后2周断尾取血，用免疫荧光的方法检测基因免疫的体液免疫应答效果。结果重组质粒pcDNA3．1-G1免疫小鼠有4只血清抗汉坦病毒抗体为阳性，重组质粒pcDNA3．1-G2以及重组质粒pcDNA3．1-M免疫小鼠各有1只血清抗汉坦病毒抗体为阳性。结论汉坦病毒糖蛋白基因核酸免疫动物后可刺激机体产生特异性的体液免疫应答。     

汉坦病毒疫苗研究进展

汉坦病毒属于布尼亚病毒科的汉坦病毒属,主要引起人的两种疾病肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征.汉坦病毒基因组包括(L M、S)3个负链RNA片段.分别编码RNA聚合酶、囊膜糖蛋白G1和G2和核心蛋白.汉坦病毒基因工程疫苗研究主要包括亚单位疫苗、活病毒载体疫苗和核酸疫苗;传统的灭活疫苗包括鼠脑来源和细胞培养的灭活疫苗,本文就汉坦病毒这两方面的研究进展进行了综述.     

汉滩病毒M片段噬菌体表位文库的构建及筛选

目的 通过构建汉滩病毒M片段的噬菌体展示文库，筛选汉滩病毒包膜蛋白的抗原表位。方法 DNaseⅠ随机消化的M片段与载体pComb3连接，转化宿主XL-1Blue，在辅助噬菌体VCSM13存在的条件下，获得M片段的随机噬菌体文库.利用纯化的恢复期病人血清对M片段噬菌体文库进行3轮淘洗，通过ELISA、序列分析对所获得的克隆进行鉴定。并对其中2个阳性克隆的目的片段进行了原核表达和免疫原性分析。结果 筛选获得的5个阳性噬菌体克隆均位于G1蛋白编码区，原核表达的2个阳性：充隆片段蛋白免疫兔，免疫兔血清能与病毒抗原发生特异反应。结论 本技术路线可用于汉滩病毒包膜蛋白抗原表位的研究，为汉滩病毒诊断试剂的研制、亚单位疫苗的设计提供了数据。