不同锑剂对早幼粒细胞白血病凋亡诱导作用比较

目的：通过不同锑剂对早幼粒白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用的比较，力求找到有效治疗早幼粒细胞白血病锑剂药物。方法：采用细胞生长曲线、形态学及NBT（硝基四氮唑蓝）还原试验判定NB4细胞的生长、分化及功能；细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡。结果：三价锑剂能够诱导早幼粒白血病细胞凋亡，且具有时间剂量依赖性，而五价锑剂对早幼粒白血病细胞没有凋亡诱导作用。结论：三价锑剂能够有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡，提示酒石酸锑钾作为临床治疗寄生虫病有效药物，可以老药新用，有望用于临床治疗早幼粒细胞白血病。     

三氧化二锑诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的研究

目的 研究锑剂三氧化二锑（Sb2O3)对早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的诱导作用，以寻求早幼粒细胞白血病治疗的新方法。方法 采用细胞生长曲线，形态学及硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验，判定NB4细胞的生长，分化及功能。采用细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡。结果 Sb2O3能诱导早幼粒白血病细胞凋亡，且具有时间，剂量依赖性。结论 Sb2O3能有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡，提示锑剂诱导细胞半亡的疗法，有望成为临床治疗早幼粒细胞白血病的新方法。     

人era的结构特点分析及其定点突变体的构建

目的：构建最近克隆的人era基因的定点突变体。方法：利用数据库对era的结构特点进行分析，在此基础上用改良的重叠延伸法分别构建人EraN端和C端的定点突变体。结果：获得了分别针对人EraN端TGP结合结构域（位于29－36氨基酸残基）和C端具有RNA结合活性的 KH结构域（位于297－340氨基酸残基）的定点突变体。结论:人era定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。     

谷胱甘肽转硫酶-血小板因子4融合蛋白表达载体的构建、鉴定与表达

目的 构建谷胱甘肽转硫酶－血小板因子4（GST－PF4）融合蛋白表达载体，并研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达。方法 通过RT－PCR方法，从HL－60细胞中克隆PF4cDNA，然后克隆至载体pUC19中，序列测定后把PF4基因重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEC-4T-3中，并用IPTG诱导其在大肠杆菌中表达。结果 获得了PF4 cDNA。序列分析表明，该序列与GenBank数据库中的序列一致。重组质粒酶切鉴定表明，PF4基因已正确插入到pGEX-4T-3中。重组融合蛋白表达载体GST－PF4经IPTG诱导表达，在SDS－PAGE后得到1条蛋白表达带，相对分子质量（Mr)约为36000。结论 成功地构融合蛋白表达载体GST－PF4，并大肠杆菌中获得有效表达，为进一步研究打下良好的基础。     

骨保护素对破骨细胞分化和骨吸收活性的抑制作用

背景：骨保护素(osteoprotegerin，OPG)可抑制破骨细胞的分化，抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡，在骨质疏松、类风湿性关节炎、癌症骨转移的领域有潜在的应用价值。目的：鉴定在CHO细胞中表达的人骨保护素生物学活性。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：实验在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成，研究对象：人骨肉瘤细胞株MG63、中国仓鼠CHO细胞株、克隆质粒pUC19及真核表达质粒pcDNA3为本室保存，12只6～8周龄BABL／c雄性小鼠由本校动物中心提供。干预：RT-PCR法获得人OPG编码区cDNA并构建真核表达载体，在脂质体介导下转染CHO细胞，经Western blot鉴定筛选稳定表达OPG的细胞系。获取含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液，实验组：体外培养的鼠破骨细胞培养基中加人含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液。对照组1只加入转染pcDNA3空载体的CHO细胞培养基的浓缩液。对照组2只加入完全培养基。主要观察指标：观察人OPG对破骨细胞的分化和骨吸收的影响。结果：转染人OPG编码区基因的CHO细胞能分泌表达OPG。小鼠骨髓细胞在la，25(OH)zD3(1&;#215;10^-8mol／L)的存在下可稳定分化出具有骨吸收功能的破骨细胞样细胞，在该培养体系中加入含有OPG的CHO细胞培养上清浓缩液，TRAP染色阳性细胞数明显减少(t=5．547，p&;lt;0．01)，骨吸收陷窝的数量显著减少(t=3．409，P&;lt;0．01)。结论：人骨保护素可在CHO细胞中分泌表达，并对体外培养状态下的破骨细胞的分化和骨吸收功能有抑制作用。     

利用基因工程技术构建重组人血小板因子4真核表达载体

目的：构建携带绿色荧光蛋白标签的重组人血小板因子4基因(plateletfactor4，PF4)的真核表达载体，并在真核细胞中表达，为研究其生物学功能奠定基础。方法：人工合成PF4基因模板，通过PCR方法扩增PF4-cDNA，然后克隆至pUCl9克隆载体，经序列测定后重组入pIRES2-EGFP真核表达载体并进行酶切鉴定。将鉴定正确的质粒用脂质体转染法瞬式转染至COS7细胞中。结果：获得了PF4-cDNA基因，序列分析表明，该序列与GenBank数据库中的序列一致。重组质粒酶切鉴定表明，PF4基因已与pIRES2-EGFP真核表达载体正确连接。荧光显微镜示，此载体成功转染至COS7细胞中。并获得有效表达。结论：利用基因工程技术，成功的构建了携带绿色荧光蛋白标签的PF4的真核表达载体，并在真核细胞中获得有效表达，为下一步研究其在真核细胞中的生物学功能奠定基础。     

人白细胞介素15（hIL—15）的基因克隆和序列测定

ＩＬ１５是一种促进Ｔ细胞、Ｂ细胞和ＮＫ细胞生长和分化的细胞因子。本文用ＲＴＰＣＲ方法，自行设计并合成两对引物，成功地从成人脾脏中扩增出ｈＩＬ１５ｃＤＮＡ，并定向克隆入ｐＵＣ１９载体中。经序列测定证实，为ｈＩＬ１５成熟肽ｃＤＮＡ基因。ｈＩＬ１５基因的获得，为进一步在大肠杆菌中高效表达有活性的重组ＩＬ１５，更深入地研究其作用机理，以及临床应用奠定了基础。     

人破骨细胞生成抑制因子在真核细胞中的表达

目的 克隆人破骨细胞生成抑制因子（OPG／PCIF）编码区基因并在真核细胞中表达，为进一步研究OPG／OCIF的生理功能及探讨骨质疏松症等疾病的治疗奠定基础。方法 以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板，采用RT－PCR法得到人OPG／OCIF的编码区cDNA，构建真核表达载体并转染成肌细胞，应用核酸杂交及western blot法证实OPG／OCIF在真核细胞中表达。结果 获得人破骨细胞生成抑制因子（OPG／OCIF）编码区全长cDNA，经序列测定证实与文献报道的OPG／OCIF编码区基因的核苷酸序列完全一致。成功构建OPG／OCIF真核表达载体pcDNA3-OPG。重组质粒转染小鼠成肌细胞C2C12，建立稳定转染OPG／OCIF编码区cDNA的细胞系，经核酸杂交及western blot法证实OPG／OCIF在真核细胞中表达。结论 获得人破骨细胞生成抑制因子（OPG／OCIF）编码区全长cDNA并证实在真垓细胞中表达，为OPG／OCIF进一步的功能研究奠定了基础。     

外胚层发育不全无汗综合征患者基因突变的检测

目的：检测外胚层发育不全无汗综合征患者的EDA基因的突变。方法：提取外胚层发育不全无汗综合征患者的基因组DNA，采用PCR方法扩增EDA基因的第5、9外显子，直接将PCR产物送测序。结果：确证该患者是X染色体隐性遗传的外胚层发育不全无汗综合征，患者EDA基因的第5外显子存在突变位点：918位碱基C突变为A，致使226位线氨酸变为终止码，结论：该患者是X染色隐性遗传的外胚层发育不全无汗综合征，其EDA基因5外显子存在突变。