不同剂量CpG ODN联合STAg鼻内免疫BALB／c小鼠诱导的免疫应答

目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原（STAg）与不同剂量的CpG ODN联合滴鼻免疫小鼠的免疫效果，探索CpG ODN佐剂最佳剂量。方法 5-6周龄BALB／c小鼠50只随机分为5组，每组10只，实验组以20μg STAg联合不同剂量CpG ODN佐剂滴鼻免疫小鼠，佐剂剂量分别为0、1、5、10μg，对照组以PBS滴鼻，间隔2wk免疫2次。末次免疫后30d断颈处死全部小鼠，分离脾、Peyer＇s patch（PP结）、肠系膜淋巴结（MLN）和IEL淋巴细胞，观察淋巴细胞增殖情况。用ELISA的方法检测血清IgG和粪便IgA含量。结果 与PBS组和0剂量佐剂组相比，10μg CpG ODN联合STAg免疫后，小鼠肠粘膜淋巴组织和脾淋巴细胞增殖明显（P〈0．05）。10μg组血清IgG远高于对照组（P〈0．05），粪便IgA高于对照组（P〉0．05）。结论 CpG ODN可作为STAg的粘膜佐剂，10μg CpG ODN与STAg联合具有最佳的免疫效果。     

弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答

目的 观察弓形虫排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigen,ESA)鼻内免疫小鼠诱导黏膜和系统免疫应答的效果.方法 将64只BALB/c小鼠随机分为8个组,每组8只.实验组小鼠分别用腹腔感染弓形虫小鼠第0,6,12,24,36,48和60小时无菌收集的腹腔液中获取的ESA 20 μg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d,以PBS20 μl/只滴鼻为对照.逐日观察小鼠状况,于末次免疫后第14天颈椎脱位处死小鼠,检测血清特异性IgG、小肠冲洗液sIgA水平,分离肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,iIEL)及肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)并计数.结果 60 h组小鼠初次免疫后第8-11天,有倦怠、饮水及采食量减少等表现,体重增长较其他组缓慢(P＜0.05),其他组小鼠健康状况良好.不同时相ESA鼻内免疫小鼠后特异性抗体水平升高,MLNL、iIEL发生增殖性应答.48 h组和60 h组各项指标均明显高于0 h组(P＜0.01)及PBS组(P＜0.05).结论 48 h和60 h弓形虫ESA均能诱导黏膜及系统免疫应答,但60h ESA可能对机体有毒副作用,不适宜直接滴鼻免疫,48 h ESA可作为弓形虫黏膜疫苗的候选抗原.     

TLR7在结核分枝杆菌感染中的作用研究

目的 将TLR7激活基序ssRNA加入结核分枝杆菌感染的小鼠巨噬细胞,研究TLR7被激活后在结核分枝杆菌感染中的作用。方法 结核分枝杆菌感染RAW264.7细胞,感染后加入化学合成的TLR7激活基序ssRNA,RT-PCR法检测感染不同时间之后细胞对细菌的吞噬率;无菌TritonX-100裂解细胞,罗氏培养基培养计数活细菌;电镜观察细胞内自噬小体;ELISA检测细胞上清中IL-12、TNF-α与IL-4的含量。结果 感染3 h后RAW264.7细胞吞噬率最高(P>0.05);处理3 h后电镜观察,ssRNA组细胞状态明显好于对照组;36 h后ssRNA组IL-12(P < 0.05)、IL-4(P < 0.05)水平高于对照组,细胞内活菌数量ssRNA组低于对照组(P < 0.05),48 h后IL-4(P <0.05)水平下降,TNF-α的含量上升(P < 0.05)。结论 TLR7能通过诱导细胞自噬、调节细胞因子产生等机制增强细胞杀结核分枝杆菌的能力,TLR7激活基序ssRNA可以用于治疗结核分枝杆菌感染。     

苦参合剂对隐孢子虫感染小鼠空肠黏膜肥大细胞的影响

目的 阐明空肠黏膜肥大细胞激活在隐孢子虫致病机制中的作用, 探讨苦参合剂抗隐孢子虫感染的作用机理。方法 30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、 隐孢子虫感染模型对照组和苦参合剂实验组。建立隐孢子虫肠道感染小鼠模型, 经苦参合剂治疗3周后, 光镜下观察小鼠空肠病理变化; 甲苯胺蓝染色, 计数肥大细胞数量并观察其脱颗粒变化。结果 隐孢子虫感染模型对照组小鼠小肠上皮出现明显炎性病理改变。苦参合剂实验组小鼠治疗3周后小肠上皮较完整, 接近正常。甲苯胺蓝染色显示隐孢子虫感染模型对照组小鼠肥大细胞数量 （12.80±0.84） 较正常对照组 （1.60±0.89）明显增多 （P < 0.01）, 且脱颗粒现象明显; 苦参合剂实验组小鼠肥大细胞数量 （2.00±0.71） 较隐孢子虫感染模型组明显减少（P < 0.01）, 肥大细胞数量和形态接近正常对照组。结论 肥大细胞活化参与了隐孢子虫感染引起的肠黏膜炎症反应。苦参合剂可减少隐孢子虫感染小鼠空肠黏膜肥大细胞数量及抑制肥大细胞活化脱颗粒, 从而减轻炎症、 修复受损肠黏膜, 发挥治疗隐孢子虫病的作用。     

不同剂量弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答

目的观察不同剂量弓形虫排泄一分泌抗原（excreted／secreted antigens，ESA）鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答，确定适宜免疫剂量。方法40只BALB／c小鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组8只。分别用5、10、20和30μg ESA滴鼻免疫小鼠2次，间隔14d，对照组用20μl/只PBS滴鼻。于末次免疫后第14d，颈椎脱臼处死小鼠，ELISA法检测鼻咽冲洗液和小肠冲洗液sIgA、血清IgG抗体水平，分离并计数肠上皮内淋巴细胞（intest inalintraepithelial lymphocytes，iIEL）、肠系膜淋巴结淋巴细胞（mesenteric lymph node lymphocytes，MLNL）及脾淋巴细胞。结果实验期间，小鼠健康状况良好。随鼻内免疫ESA剂量的增加，特异性抗体水平不同程度的升高，MLNL、iIEL及脾淋巴细胞也显示不同程度的增生性应答。其中，30μg组小鼠血清IgG、脾淋巴细胞数量与10μg组、5μg组和PBS组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；30μg组小肠冲洗液sIgA、鼻咽冲洗液sIgA、iIEL和MLNL数量，20μg组小肠冲洗液sIgA和MLNL数量与5／2g组及PBS组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；20μg组血清IgG与PBS组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论20μg和30μg ESA鼻内免疫能有效诱导粘膜及系统免疫应答。     

弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的肠IEL持续性免疫应答

目的采用可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂制备弓形虫复合黏膜疫苗,观察经滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导的肠上皮内淋巴细胞(intraepitheliallymphocytes,IEL)免疫应答及持续时间,探讨其抗弓形虫感染的作用机制。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以免疫原性好的STAg(20μg/只)为抗原和CT(1μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死小鼠。制备肠IEL细胞悬液,计数并涂片;免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测CD4 T、CD8 T细胞亚群水平。结果免疫后肠IEL显著增生,第2周达高峰,第1周至第4周(P<0.01)高于对照组。其中以CD8 T细胞增生为主,CD8 T细胞水平第2周达高峰,第1周至第6周增高显著(P<0.01),CD4 T细胞也略有增生,第2、3周(P<0.05)有显著性,CD4 /CD8 比值倒置,第1、2周明显低于对照组(P<0.05)。结论弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导肠IEL免疫应答,且可持续较长时间,在预防弓形虫感染中起重要作用。     

弓形虫可溶性抗原联合γ干扰素鼻内免疫小鼠的抗弓形虫感染作用

目的探讨弓形虫可溶性抗原(STAg)和γ干扰素(IFN-γ)联合鼻内免疫对小鼠的保护作用及IFN-γ作为佐剂鼻内免疫抗弓形虫感染的最佳剂量。方法将5~6周龄BALB/c小鼠70只随机分为5组,每组14只,分别用20μgSTAg、20μgSTAg 250UIFNγ-、20μgSTAg 500UIFNγ-、20μgSTAg 1000UIFN-γ和20μgSTAg 2000UIFN-γ鼻内免疫小鼠2次,间隔14d,末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,逐日观察小鼠健康存活情况。攻击后第29天处死全部小鼠,分离计数脑、肝组织速殖子;计数肠系膜淋巴结(MLN)和脾T淋巴细胞。结果随着佐剂IFN-γ剂量的增加,小鼠存活率有升高趋势,1000UIFN-γ剂量组小鼠存活率最高达93%;肝、脑速殖子数呈下降的趋势,其中STAg 1000UIFN-γ、STAg 2000UIFN-γ组显著低于STAg组;MLN和脾T淋巴细胞发生了增殖性应答,其中STAg 1000UIFNγ-、STAg 2000UIFN-γ组MLN细胞显著高于STAg组。结论STAg 1000UIFNγ-、STAg 2000UIFN-γ鼻内免疫明显优于其它小剂量佐剂及单独抗原免疫,能有效诱导黏膜免疫应答。     

对医学本科生进行科研创新能力培养的探索和体会

在我国医学高等院校中,传统的基础医学教学和管理模式已严重束缚了本科教学的改革和发展。目前,我国本科生参与专业科研活动并不普遍。本文围绕医学科研相关教学课程的特点和引导学生参与各类科研训练的相关措施,探讨了如何对医学生进行科研实践能力和创新精神的培养,以期提高高等医学院校的教学质量,培养更多的创新人才。     

新形势下高校师资管理制度改革探究

教师是高校不可缺少的人力资源,规范合理的师资管理制度是高校建设高水平师资队伍的基本保障,也是人才培养与科学研究顺利开展的有力保证。我国高校在师资管理方面存在学术创新缺乏、工资待遇较低、行政化严重、人才引进和流动困难、超编与缺编等严重制约高等教育事业发展的问题。针对这些问题,高校师资管理改革可通过确保学术自由、引入市场机制、提倡教授治校、尝试"非升即走"及实行"远缘杂交"等措施改变现状,对进一步完善我国高校师资管理制度,加快实现教育国际化进程有重要的实践意义。     

TLR4/NF-κB信号通路在微小隐孢子虫感染中的作用机制

目的探讨Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路在微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)感染小鼠致肠黏膜损伤中作用的分子机制。方法 30只4周龄雄性BALB/c小鼠随机分成感染1周组、感染2周组和未感染组,每组10只。感染组每鼠经口灌胃微小隐孢子虫卵囊(1×10~5个/只),未感染组小鼠正常饮食、饮水。感染组小鼠分别于感染后第1周和第2周剖杀,未感染组小鼠于第2周剖杀。取小鼠肠组织,HE染色观察小鼠肠黏膜的病理变化。抽提肠黏膜组织总RNA,逆转录成c DNA,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测TLR4和NF-κB p65的m RNA相对表达量。蛋白质印迹(Western blotting)检测肠黏膜组织中TLR4和NF-κB p65的相对表达量。ELISA检测肠黏膜组织中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。结果HE染色结果显示,感染组小鼠肠绒毛明显萎缩变短、脱落,黏膜下层水肿,与肌层间形成明显的间隙;未感染组小鼠肠绒毛结构完整。q RT-PCR结果显示,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜组织中TLR4的m RNA相对表达量分别为2.3±0.4、3.5±0.1,均高于未感染组(1.0±0.0)(P0.05,P0.01);NF-κB p65的m RNA相对表达量分别为2.6±0.3、3.6±0.2,均高于未感染组(1.1±0.1)(P0.05,P0.01)。Western blotting结果显示,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜组织中TLR4的相对表达量分别为0.4±0.0、0.6±0.0,均高于未感染组(0.2±0.0)(P0.05,P0.01);NF-κB p65的表达量分别为0.6±0.0、0.8±0.1,均高于未感染组(0.4±0.0)(P0.05,P0.01)。ELISA检测结果显示,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜组织中IL-1β的表达量分别为33.3±2.2、46.1±2.5,均高于未感染组(22.3±5.0)(P0.01);TNF-α的表达量分别为45.7±2.0、55.4±3.6,均高于未感染组(25.7±9.3)差异有统计学意义(P0.01)。结论微小隐孢子虫感染小鼠后,通过激活TLR4/NF-κB信号通路,可上调TLR4和NF-κB p65的表达,促进IL-1β和TNF-α的释放,诱发肠黏膜炎症反应。