动物血清替代人血清制备乙肝标志物室间质评物的初步研究

目的尝试制备以胎牛血清(FCS)替代人血清为基质的乙型肝炎病毒(HBV)标志物室间质评样本。方法以FCS作为基质稀释人血清HBV标志物高值样本制备室间质评样本,并对制备样本进行基质效应和互换性实验、均匀性和稳定性评估及初步临床应用。结果使用两种检测方法验证制备样本的可互换性,检测值分布于95%可信区间内,相关性很好。雅培i1000全自动免疫分析仪检测HBV 5个项目[乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)]制备物结果的F值均F界值(F界值=3.02),保存于-20℃和4℃时可稳定1个月以上。20家使用化学发光法[ABBOTT i2000全自动免疫分析仪(简称ABBOTT i2000)]和20家使用酶免法(科华试剂)的实验室HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的变异系数(CV)分别为ABBOTT i2000仪器组7.60%、7.79%、6.37%、13.30%、3.61%,科华试剂组11.67%、14.72%、9.11%、12.30%、9.75%。结论通过试验验证以FCS为基质制备的质评样本的互换性、稳定性和均匀性满足室间质评样本要求,初步认为FCS在一定程度上可以作为基质用于HBV标志物室间质评样本的制备。     

与α-烯醇化酶相关的抗内皮细胞抗体ELISA的建立及临床初步应用

目的建立与α-烯醇化酶（ENOI）相关的抗内皮细胞抗体（AECA）的酶联免疫吸附试验（ELISA）,并探讨ENOI-AECA与自身免疫性疾病的关系。方法人工合成获得人ENOI基因编码序列并克隆该片段构建pUC57-ENOI重组质粒,再将重组质粒亚克隆入原核表达载体pET28（a）,回收酶切产物并经T4DNA连接酶连接,获得的重组表达质粒pET28（a）-ENOI,在大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达蛋白,Ni NTA亲和层析纯化重组ENOI蛋白。以纯化的重组蛋白为包被抗原,并对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测ENOI-AECAELISA并作分析性能评价。用建立的方法分别检测健康人及系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）患者血清中的ENOI-AECA。结果获得了相对分子质量为47 000的高纯度人ENOI重组蛋白。ELISA抗原最佳包被浓度为5μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶50。以免疫印迹法为参照,所建方法的敏感性和特异性分别为76.0%和90.2%。SLE和RA患者血清中ENOI-AECA的阳性率分别为23.1%和57.1%;RA组ENOI-AECA阳性率与健康对照组比较,差异有统计学意义（P=0.000）。结论以人ENOI重组蛋白为抗原建立的检测ENOI-AECA的ELISA有较高的敏感性和特异性,可用于ENOI-AECA的检测。ENOI-AECA阳性提示患者可能患有自身免疫性血管炎。     

双抗体夹心ELISA测定人广泛型线粒体肌酸激酶方法的建立

目的建立测定人血清广泛型线粒体肌酸激酶（uMtCK）浓度的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法应用原核表达的uMtCK重组蛋白免疫小鼠获得7株单克隆抗体,采用棋盘格滴定法筛选出最佳双抗体组合,其中抗体19F11进行辣根过氧化物酶（HRP）标记作为检测抗体,抗体3C1作为俘获抗体,建立检测人uMtCK双抗体夹心ELISA方法,并进行方法学评价。同时采用该法检测50名健康体检者和85例肿瘤标志物[甲胎蛋白（AFP）或癌胚抗原（CEA）]阳性患者的血清。结果通过筛查获得配对抗体,建立检测人uMtCK的双抗体夹心ELISA方法。该法的检测限为28．8ng／mL,批内变异系数（CV）为4．5％～7．7％,批间CV为8．2％～13．5％,平均回收率为97．1％。用该法检测50名健康体检者血清uMtCK浓度,结果均为阴性;85例肿瘤标志物阳性患者中有15例检出uMtCK,浓度为52．8～1442．2ng／mL。结论建立的双抗体夹心ELISA可以用于测定人血清uMtCK浓度。     

酶联免疫吸附试验定性检测乙肝表面抗原测量不确定度评定的探讨

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝表面抗原（HBsAg）测量不确定度的评定。方法用4种市售手工法ELISA试剂检测HBsAg定值标准品（1、2IU／mL）和室内质控品，分析测量过程的不确定度分量，合成各试剂盒检测系统的扩展不确定度。结果4种试剂检测1、2IU／mL标准品的批内测量的扩展不确定度为24．4％、27．4％、17．4％、14．4％和18．8％、24．0％、19．4％、23．8％[包含因子（K）=2]。检测质控品的总扩展不确定分别是24．8％、29．8％、30．2％、32．8％（K=2）。结论含有测量不确定度的结果基本能反映测量的真实水平，有助于了解目前国产ELISA试剂手工法检测低水平HBsAg的实际情况。     

上海地区自身抗体检测质量现状调查分析

目的了解上海地区自身抗体检测的质量现状,以便对其检测技术进行规范。方法分2次共发放8个调查样本,要求各临床实验室在规定的时间内检测抗核抗体（ANA）和抗可提取核抗原（ENA）抗体,并按时回报结果。结果开展ANA检测项目的32家实验室均采用间接免疫荧光法,结果总符合率为98．1％,其中阳性结果符合率为96．9％,阴性结果符合率为100．0％。混合核型类样本的次要核型检出率偏低。阳性样本各实验室回报的滴度结果差异较大。开展抗ENA抗体检测项目的38家实验室均采用免疫印迹法,结果符合率为76．3％,抗核糖核蛋白（RNP）抗体、抗干燥综合征抗原A（SS-A）抗体、抗干燥综合征抗原B（SS-B）抗体检测结果总符合率低于其他抗体,试剂质量参差不齐。结论自身抗体检测的质量有待提高,其检测技术有待规范。     

酶联免疫吸附试验定性检测乙肝表面抗原测量不确定度评定的探讨

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)测量不确定度的评定。方法用4种市售手工法ELISA试剂检测HBsAg定值标准品(1、2 IU/mL)和室内质控品,分析测量过程的不确定度分量,合成各试剂盒检测系统的扩展不确定度。结果4种试剂检测1、2 IU/mL标准品的批内测量的扩展不确定度为24.4%、27.4%、17.4%、14.4%和18.8%、24.0%、19.4%、23.8%[包含因子(K)=2]。检测质控品的总扩展不确定分别是24.8%、29.8%、30.2%、32.8%(K=2)。结论含有测量不确定度的结果基本能反映测量的真实水平,有助于了解目前国产ELISA试剂手工法检测低水平HBsAg的实际情况。     

四种国产乙型肝炎表面抗原定量检测试剂对弱阳性样本检测结果的一致性比较

目的 比较4种国产HBsAg定量检测试剂与ARCHITECT i2000免疫检测系统对HBsAg弱阳性样本检测结果的一致性及检测值之间的相关性.方法 采用4种国产发光法检测系统和i2000检测系统分别检测185例HBsAg弱阳性血清标本以及不同浓度HBsAg的标准品.应用描述性统计和相关分析计算不同试剂分析结果的精密度、一致性和相关性.结果 4种国产发光法检测系统对i2000检测系统定量为0.05～1.00 IU/ml的弱阳性结果判断的符合率分别为25.93%、35.19%、51.85%和18.52%;对定量为＞1.00～10.00IU/ml的弱阳性结果判断的符合率分别为71.76%、87.79%、95.42%和69.47%.4种国产试剂均检测阴性的标本为i2000检测值在0.05～0.80IU/ml的低值阳性标本;i2000检测结果≥7.93 IU/ml的样本,4种国产发光法检测系统符合率为100%.国产试剂检测结果之间的相关性分析结果显示,其相关系数为0.8629～0.9265.结论 国产检测系统的分析灵敏度略低于i2000检测系统,检测值≤0.80IU/ml的样本不能给出与i2000一致的检测结果;对于≥7.93 IU/ml的样本,国产试剂均可给出与i2000一致的结果.

Abstract：

Objective To evalue the coincidence and correlation between the four domestic quantity assay reagents and with ARCHITECTi2000 immunoassay system.Methods 185 weak-reactive serum samples and standard materials of different concentrations were tested by four domestic quantity assay reagents for HBsAg test and ARCHITECTi2000 immunoassay system.The coincidence,the precision and the correlations between different systems were analyzed.Results The coincidence rates of the results of 0.05-1.00 IU/ml samples between the four domestic quantity assay reagents and ARCHITECTi2000 immunoassay system were 25.93%,35.19%,51.85% and 18.52% respectively,and for those results of ＞ 1.00-10.00 IU/ml samples the coincidence rates were 71.76%,87.79%,95.42% and 69.47% respectively.The samples of 0.05-0.80 IU/ml weak-reactive serum samples detected by the i2000 system were all negative detected by the four domestic systems.The coincidence rates of＞7.93 IU/ml serum samples detected by i2000 system were 100%detected by the four domestic systems.The correlations of the four domestic quantity assays were around 0.8629-0.9265.Conclusions The analysis sensitivity of the four domestic quantity assay reagents were below the i2000 system.The results of under 0.80 IU/ml samples detected by i2000 system were disaccord with the results detected by the four domestic systems,whereas for the sapmples over 7.93 IU/ml the results were consistent.     

酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）临界样本的复检范围。方法收集用ELISA初检HBsAg吸光度（A）值在0.07～2.00范围内的样本,用ELISA复检;初、复检结果不符和2次结果均在临界的样本,用微粒子酶免疫法（MEIA）进行复核,并用中和法做确认试验。统计分析结果,选择一个合适的样本复检范围。结果样本初检结果A值在0.070～0.104、0.105～0.300范围内,ELISA复检符合率分别为85.2%、56.9%;MEIA与ELISA复检结果的符合率分别为90.1%、93.9%。A值在0.301～0.500、0.501～1.000、1.001～1.500、1.501～2.000范围内,ELISA复检符合率依次为88.3%、93.8%、99.1%、99.2%,MEIA与ELISA复检结果的符合率为100%。确认试验和MEIA复检结果的符合率样本测定值（S）/阴性对照值（N）在1.50～1.99、2.00～5.00,分别为50.0%和92.7%,其他组均在97.1%以上。结论在操作规范化的实验室内,ELISA初检HBsAg复检范围宜选择样本A值在0.070～0.300范围内;大批量体检时,复检范围应放宽至0.070～0.500;乙肝标志物模式异常的样本也需复检。规定适宜的复检范围既能确保检测结果的准确性,又能避免人力和试剂等物品的浪费。     

改良即刻法用于酶联免疫吸附试验室内质量控制的探索

目的 建立一种适用于酶联免疫吸附实验（ELISA）室内质量控制（IQC）的方法。方法 采用即刻法和用控制变异系数（CV）的方法（改良即刻法）同时统计初始阶段的质控数据,制作质控图。结果 检验方法学的CV在15％左右,前3个质控数据的CV〈5％时,采用即刻法统计随后的结果会出现假失控,前3个质控数据的CV〉10％时,随后的结果会出现假在控。采用改良即刻法统计,只要设定好一个实验室或一个地区的允许CV值就没有假失控和假在控的结果。结论 改良即刻法适用于CV较大、检测频次较低的免疫学检验项目IQC初始阶段的统计,操作简便易行。     

乙型肝炎病毒血清标志物GICA检测性能的比对分析

目的评估乙型肝炎病毒血清标志物（HBV—M）胶体金免疫层析法（GICA）的分析性能。方法收集雅培i1000免疫检测系统检测的HBV—M阳性标本653例、阴性标本103例和HBV—M标准品,以化学发光免疫测定法（CLIA）检测结果为标准,分别用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂和5种GICA试剂检测,统计分析检测结果。结果检测HBV—M敏感性：ELISA和GICA检测HBV—M的最低检测限分别为乙型肝炎表面抗原（HBsAg）0．5IU／mL和4～8IU／mL、乙型肝炎表面抗体（抗HBs）10mlU／mL和15～30mlU／mL、乙型肝炎e抗原（HBeAg）1NCU／mL和2～4NCU／mL、乙型肝炎e抗体（抗HBe）2NCU／mL和64～256NCU／mL、乙型肝炎核心抗体（抗HBc）2IU／mL．和32—256IU／mL。检测标本HBV—M的符合率：ELISA分别为87．4％、99．0％、87．7％、96．6％、100．0％,GICA分别为69．6％～71．7％、69．0％～72．0％、70．5％～73．9％、42．2％～49．1％、50．0％～60．0％。检测HBV—M特异性：除GICA柃测抗HBs的特异性略差外,其余各HBV—M的检测特异性均是可接受。,结论GICA检测HBV—M低浓度的标本,漏检率很高,只能用于GICA检测线性范围里HBsAg的筛查,不能作为临床诊断乙型肝炎和疗效考核的依据。