自噬相关基因14在心脏缺血再灌注损伤中的作用及其机理研究进展

自噬被证明在多种疾病中发挥重要作用,急性心肌梗死时自噬活化可以帮助心肌细胞维持细胞内必需的生理活动。自噬相关基因14(autophagy related gene14,ATG14)是自噬过程中的关键分子,参与自噬体的形成同时调节自噬体与溶酶体的融合。ATG14在心脏缺血再灌注损伤中具有重要作用,在心肌缺血期,含有ATG14的复合物Ⅰ与自噬前体结构(pre-autophagosomal structure,PAS)结合,形成双层囊泡的自噬体结构;在再灌注期,ATG14参与形成的自噬体与损伤的线粒体融合,清除受损线粒体,维持心肌细胞内稳态。无论在缺血期还是再灌注期,ATG14功能缺失都会影响心肌细胞内自噬活性,最终影响心肌梗死面积和预后。本文综述ATG14在心肌梗死不同时期的功能,为临床上不同时期通过调节自噬活性来治疗心肌梗死提供新的理解。     

氯普鲁卡因诱导体外人宫颈癌细胞抑癌基因CDH1、APC和P16启动子去甲基化及基因表达

 摘要：目的 观察氯普鲁卡因(CP)对人宫颈癌细胞HeLa和CaSki的抑癌基因CDH1、APC及P16启动子甲基化水平和基因表达的影响。方法 用不同终浓度的CP（0、1、1.5、2、3和4 mmol/L）处理癌细胞系HeLa和CaSki及正常人脐静脉内皮细胞HUVEC,MTT法检测细胞生长抑制率;用甲基化特异性PCR (MSP) 和RT-PCR检测1.5 mmol/L CP处理后各细胞CDH1、APC及P16启动子甲基化状态及基因表达水平。结果 1.5 mmol/L CP作用96 h后,HeLa和CaSki抑制率分别为 (66.17±5.82) % 和 (69.12±6.89) %,显著高于HUVEC的 (21.78±3.12) %, 1.5 mmol/L CP处理宫颈癌细胞96 h后,CDH1、APC及P16基因启动子均有不同程度去甲基化,3种基因mRNA均增强或者恢复了表达。结论 CP可以抑制人宫颈癌细胞HeLa和CaSki增殖,诱导HeLa和CaSki的CDH1、APC及P16基因启动子去甲基化,并可增加或者恢复相应基因的表达。     

小鼠骨肉瘤模型构建的关键

目的探讨骨肉瘤动物模型荷瘤成功率的关键因素。方法 24只4~8周龄C3h小鼠,其中C3h/He J型6只、C3h/He N型18只,随机分为2组。A组采用一般脱毛膏脱毛后外侧腋下注射浓度为5×10~7个数量级/m L的LM8细胞悬液0.2 m L;B组采用动物剃毛器剃毛后外侧腋下皮下注射浓度为5×10~7个数量级/m L的LM8细胞悬液0.2 m L后每日给于注射处局部按摩,并分别记录肿瘤生长情况。结果 A组成瘤率33%(4/12);B组成瘤率100%。结论不同的注射技巧对LM8的荷瘤过程及后期护理对成瘤率具有重要的意义。     

虫草素对阿霉素诱导的急性心力衰竭的心脏保护作用及机制

目的探讨虫草素对阿霉素诱导心功能不全、炎性反应和心肌细胞凋亡的影响。方法将小鼠80只随机分为对照1组、虫草素1组、阿霉素1组、处理1组,每组20只。虫草素1组和处理1组给予虫草素,连续4周;阿霉素1组和处理1组一次性注射阿霉素,对照组注射等量生理盐水。给予阿霉素5d后检测心功能,取材进行分子生物学检测和病理学检测。将H9C2心肌细胞分为对照2组、虫草素2组,阿霉素2组、处理2组,分别给予磷酸盐缓冲液、虫草素、阿霉素刺激、阿霉素+虫草素处理,进行分子生物学和病理学检测。结果与对照1组比较,阿霉素1组和处理1组LVEF、左心室缩短率(LVFS)及Bcl-2蛋白表达水平明显下降(P0.05),白细胞介素(IL)1β、IL-6、TNF-αmRNA表达、CD45、磷酸化NF-κB抑制蛋白(P-IκB)α、磷酸化P65(P-P65)、半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase-3)、Bax蛋白表达及凋亡的心肌细胞水平明显升高(P0.05)。但与阿霉素1组比较,处理1组LVEF、LVFS明显升高[(48.0±6.9)%vs (66.0±5.5)%,(26.0±5.7)%vs (37.0±6.1)%,P0.05],炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)mRNA表达、CD45、P-IκBα、P-P65、caspase-3、Bax蛋白表达及凋亡的心肌细胞明显降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P0.05)。虫草素1组与对照1组各项指标比较,无统计学差异(P0.05)。与对照2组比较,阿霉素2组和处理2组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达及P-IκBα、P-P65蛋白表达明显升高(P0.05);与阿霉素2组,处理2组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达及P-IκBα、P-P65蛋白表达明显下降(P0.05)。阿霉素2组显著诱导H9C2心肌细胞凋亡,处理2组心肌细胞凋亡情况明显改善。结论虫草素可以改善阿霉素诱导的心功能不全,通过抑制NF-κB信号通路降低阿霉素诱导的炎性反应和心肌细胞凋亡。     

微小 RNA 及 RNA 干扰治疗脊髓损伤的研究进展

伴随社会、现代交通和建筑事业的发展,脊髓损伤（ spi-nal cord injury,SCI）发病率逐年上升。 SCI可分为原发性损伤和继发性损伤。原发性损伤由受伤时承受的扭转力、压缩力和神经横断程度决定。而后期伴发的持续炎症反应、缺血、脂质过氧化作用、自由基生成、离子通路受损、瘢痕形成、坏死、轴突退脱髓鞘作用和神经细胞凋亡等继发性损伤将进一步加重病情［1－3］。其中,持续的炎症反应能帮助清除坏死细胞,但同时也会清除正常的细胞和组织并加重SCI,且常是破坏血－脊髓屏障的主要因素［4］。研究证实,抑制SCI局部炎症反应,能有效减少局部神经组织的坏死和凋亡,促进损伤后神经功能恢复［5－6］。因此,抑制SCI继发性炎症反应对治疗SCI具有重要意义。大量研究证实Th1细胞所分泌的多种炎性因子γ干扰素（ IFN －γ）、肿瘤坏死因子－α（ tumor necrosis factor alpha,TNF－α）、核因子－κB（ nuclear fac-tor kappaB,NF－κB）、CCL5、白细胞介素（ interleukin,IL）－1、IL－1β、IL－2、IL－6等在SCI后表达升高以及Th2细胞所分泌的抑炎因子IL－4、IL－10、TGF－β、IFN－γ等在SCI后表达降低,均不同程度地加重SCI炎症反应,并且证实降低炎性因子的表达或升高抑炎因子的表达均能促进SCI后功能恢复［7－13］。基于此,本文就炎性因子和抑炎因子特异性的微小RNA（ microRNA,miRNA）在SCI后表达变化,以及近年通过miRNA和短发夹状RNA（short hairpin RNA,shRNA）调节促进SCI 继发性损伤功能恢复的相关报道作一简要综述。     

骨肉瘤继发性化疗耐药的分子机制

骨肉瘤（ osteosarcoma,OS）好发于15～25岁的青少年,并以男性患者居多,其发病率在儿童和青少年恶性肿瘤中居首位。 OS好发于长骨干骺端、股骨远端和胫骨近端［1］,具有很强的侵蚀性,多向肺部转移［2］。 OS主要是梭形细胞的恶性增殖,也存在软骨母细胞和成纤维细胞等亚型,只要在骨组织内被发现这些肉瘤细胞即可确诊OS［3］。 OS患者的主要临床症状是疼痛和软组织肿胀,并且高达20％～25％的患者发现有肺部转移灶,给予OS患者及时有效的治疗对缓解病情的发展具有重要的意义。 OS患者仅行手术切除的存活率不足20％,但与化疗联用后,局部病变OS患者存活率猛增至70％,这说明化疗的有效性和重要性［4］。目前国内外以顺铂、多柔比星和甲氨蝶呤（ methotrexate）为基础的化疗药物治疗OS。骨肉瘤对化疗药物耐药是OS患者存活率在过去的30年里没有再次提高的重要原因之一［5］。探索骨肉瘤抗化疗的分子机制并找到相应的克服方式,对提高OS患者的生存率具有重要的意义。 OS主要通过原发性和继发性耐药2种方式发挥化疗耐药作用,本文将对OS继发性化疗耐药的分子机制作一简要综述。     

长链非编码RNA HOX转录反义RNA对微小RNA-519c-3p/骨形成蛋白Ⅱ型受体调控骨关节炎进展作用及分子机制

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)通过miR-519c-3p/骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR2)调控骨关节炎进展的作用及分子机制。方法利用生物信息学网站ENCORI、TargetScanHuman 8.0工具分析预测LncRNA HOTAIR的下游miR-519c-3p以及靶基因BMPR2,并通过双荧光素酶报告及RIP实验验证分子间的相互结合。通过慢病毒转染将miR-519c-3p在细胞中过表达后,将构建好的软骨细胞分为NC组和miR-519c-3p过表达组(miR-519c-3p组)。两组细胞分别应用CCK-8检测、蛋白质印迹、实时荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验等检测探究LncRNA HOTAIR/miR-519c-3p/BMPR2轴对人软骨细胞骨关节炎的进展的影响。结果与NC组比较,miR-519c-3p组细胞生长变慢,降解酶[降基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)4和ADAMTS5]和促炎因子(白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α)水平显著降低,而COL2A1和SOX9水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,LncRNA HOTAIR可结合miR-519c-3p,并且BMPR2是miR-519c-3p的下游靶基因,回补实验证实LncRNA HOTAIR可通过miR-519c-3p/BMPR2轴调控人软骨细胞生长、降解酶以及促炎因子的分泌。结论LncRNA HOTAIR可通过miR-519c-3p/BMPR2轴调控骨关节炎的进展。     

肿瘤细胞与骨髓基质细胞的相互作用及其对肿瘤细胞休眠的影响

[摘要] 目前,癌症患者的存活率及无病生存率持续提高,但是肿瘤复发率依然较高。肿瘤复发与肿瘤细胞的休眠及耐药有着密不可分的内在联系。骨髓具有丰富的血管和营养,因此也是原发肿瘤远处转移的主要场所之一。当肿瘤细胞转移到骨髓内,可以与骨髓内的基质细胞相互作用,并触发肿瘤细胞休眠,休眠状态下的肿瘤细胞不仅可以存活很长的时间,而且对细胞毒性治疗顽强抵抗;最重要的是在特定的条件下,还可恢复增殖,最终引起肿瘤复发。其中,成骨细胞、间充质干细胞和部分细胞因子促进肿瘤细胞的休眠,破骨细胞和神经元细胞主要参与肿瘤细胞休眠的停止和转移的发生,而内皮细胞促进肿瘤细胞增殖或是休眠取决于周围环境的活化状态。本文就上述内容的研究现状做一简要综述。     

骨肉瘤直接抑制化疗药物疗效的分子机制

骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)是一种发病率在儿童和青少年恶性肿瘤中居首位的肿瘤,目前临床治疗方式以外科手术联合药物化疗为主。骨肉瘤对化疗药物的耐药性是影响临床骨肉瘤治疗效果的重要原因之一,了解骨肉瘤细胞的耐药机制,从而研发新的化疗药物对提高骨肉瘤的治疗效果具有重要意义。OS可以通过直接抑制化疗药物或增强自身抗药性等两种方式达到耐药的目的。本综述侧重介绍骨肉瘤直接影化疗药物疗效的3种分子机制：骨肉瘤细胞阻滞化疗药物进入胞内、骨肉瘤细胞排出胞内的化疗药物以及促使化疗药物失活。     

CD147N－糖基化与肿瘤的关系

糖基化是蛋白质翻译后修饰的主要方式之一。多种生物分子参与并影响蛋白质糖基化过程。糖基化与肿瘤的黏附力、侵蚀性和转移能力密切相关。1982年首度从肿瘤细胞上分离纯化出CD147,它属于免疫球蛋白家族（ immuno-globulin superfamily,IgSF）Ⅰ型跨膜糖蛋白［1］。 CD147在多种细胞上均有表达,但在肿瘤细胞上表达明显增多并高度糖基化［2］。研究证实,CD147参与肿瘤转移和化学耐药等过程［3－4］。 CD147作为一种黏附分子,介导肿瘤相关分子与整合素［3］、单羧酸转运蛋白（ monocarboxylate transporters, MCTs）［4］、亲环素［5］、小窝蛋白1［6］和E选择素［7］之间相互作用,从而影响肿瘤的发展。细胞膜上的糖蛋白和糖脂异常糖基变化是肿瘤的显著特征之一,并与肿瘤细胞的黏附、侵蚀和转移密切相关［8］。 CD147是一种肿瘤相关抗原,其异常糖基化在肿瘤细胞间普遍存在,此外,N －糖基化修饰是CD147糖基化的主要方式之一。在此,本文就CD147 N－糖基化与肿瘤发展的关系作一简要综述。