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背景:多药耐药一直是遏制提高结肠癌化疗有效性的瓶颈问题。目的:探讨沉默PPARα能否减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡,从而阐明PPARα在羟喜树碱耐药中的潜在作用。方法:构建针对PPARα基因的siRNA干扰载体,并转染人结肠癌SW1116细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞,以RT-PCR和蛋白质印迹法验证干扰效果。经羟喜树碱干预后,以MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡。以定量RT-PCR检测不同浓度miR-506前体转染SW1116细胞后对PPARα下游调控靶基因mRNA表达的影响。结果:siRNA干扰载体Ⅲ的沉默效果最佳,PPARα mRNA和蛋白表达分别下调了约94.1%±3.4%和70.8%±8.6%。稳定转染siRNA的SW1116细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为(332±19)μg/L,亲本SW1116细胞为(152±12)μg/L。在相同浓度羟喜树碱的作用下,亲本SW1116细胞的凋亡率显著高于稳定转染siRNA的SW1116细胞(150μg/L:7.0%±2.5%对2.8%±1.6%;300μg/L:32.4%±7.1%对18.5%±2.7%)。miR-506前体下调HMGCS-2表达,上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达,其中上调CCND1的作用最为明显。结论:成功构建了针对PPARα的siRNA干扰载体;沉默PPARα能增强SW1116细胞对羟喜树碱的抵抗性,可能与下调HMGCS-2表达并上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达有关。 相似文献
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背景:肿瘤干细胞是临床上肿瘤耐药的主要机制,识别并靶向肿瘤干细胞为肿瘤治疗的研究带来了新的思路。目的:探讨在体外以化疗药物富集结肠肿瘤干细胞样群体的可行性。方法:应用前期实验中以药物浓度递增诱导法建立的羟基喜树碱(HCPT)耐药人结肠癌细胞株SW1116/HCPT,免疫荧光标记干细胞表面抗原CD133,Hoechst33342/PI双染流式细胞仪检测、分选侧群(SP)细胞,实时PCR检测干细胞相关和多药耐药相关基因表达。结果:亲代细胞株SW1116中CD133阳性群体和SP群体分别仅占2%和1%,耐药细胞株SW1116/HCPT中则高达7%和61%,多药耐药基因MDR1抑制剂维拉帕米可使两组SP群体均下降至接近0水平。SW1116/HCPT细胞SP群体中干细胞相关基因CD133、Nanog和多药耐药相关基因MDR1、MRP1、MRP2、MRP6 mRNA表达水平较非SP群体显著上调(P0.05)。结论:HCPT药物浓度递增诱导法可成功富集结肠肿瘤干细胞样群体,其SP亚群中存在于细胞相关和多药耐药相关基因高表达。 相似文献
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目的探讨miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的潜在作用。方法首先通过PCR从基因组DNA中克隆出包含miR-506前体的片段,将其连接至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中,测序进行验证。将构建成功的pMIF-miR-506转染至低表达miR-506的亲本细胞SW1116中,加入含G418的选择性培养基进行选择性培养。运用RT-PCR验证稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株中的miR-506的表达情况,MTT法检测稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株和亲本细胞SW1116对羟基喜树碱的敏感性差异,Annexin V/PI检测各自对羟基喜树碱的凋亡情况。结果测序结果表明hsa-miR-506的前体序列被成功地构建至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中。TaqMan荧光定量PCR技术检测发现,相比亲本细胞SW1116,稳定表达绿色荧光的SW1116细胞克隆中miR-506的含量显著升高,约为33.7±8.3倍。细胞增殖试验表明稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的IC50为(280±13)μg/L,而对照组SW1116的IC50为(152±12)μg/L。同时还发现在相同浓度的羟基喜树碱作用下,亲本细胞SW1116较稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的凋亡细胞比率增高(150μg/L:7.8%±1.7%vs5.4%±1.2%;300μg/L:33.6%±3.9%vs18.2%±4.7%)。结论成功地构建了过表达miR-506的载体pMIF-miR-506;过表达miR-506能够增加SW1116对羟基喜树碱的抵抗性。 相似文献
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背景:研究表明表皮生长因子受体(EGFR)信号通路可调节细胞的分化、增殖、迁移、凋亡以及血管发生。近年来,靶向EGFR的单克隆抗体拓宽了结直肠癌治疗的选择范围。目的:系统评价EGFR单抗联合结直肠癌治疗方案在结直肠癌治疗中的疗效和安全性。方法:从常用电子数据库中检索结直肠癌治疗方案联合与未联合EGFR单抗治疗结直肠癌的随机对照试验,分析反应率和不良反应发生率的合并比值比(OR),行亚组分析和敏感性分析,以漏斗图检测出版偏倚。结果:共7项随机对照试验(n=4186)纳入分析。联合与未联合EGFR单抗(治疗组和对照组)的反应率按意向治疗(ITT)分析分别为25.4%和17.6%(OR3.36,95%CI:1.42~7.95),按方案(PP)分析分别为25.6%和18.0%(OR3.32,95%CI:1.40~7.88).治疗组反应率明显优于对照组;两组3级以上不良反应总体发生率按ITT分析分别为71.2%和54.3%(OR2.23.95%CI:1.74~2.86).治疗组3级以上不良反应总体发生率和皮肤损害、腹泻、低镁血症发生率均高于对照组。结论:EGFR单抗可明显提高结直肠癌,尤其是转移性或进展期结直肠癌患者对治疗的反应率,伴3级以上不良反应发生率增高。 相似文献
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一氧化氮供体型非甾体抗炎药(NO—NSAIDs)是由特定的化学连接基团将传统NSAIDs与NO供体部分连接而成,其研发最初系用于减少传统NSAIDs的不良反应。NO-NSAIDs对结肠癌细胞株的生长抑制作用较母体化合物强数百倍,并能在动物模型中有效预防结肠癌的发生,作用机制可能涉及对细胞动力学、细胞信号转导和药物代谢酶的影响。动物实验和前期人体研究已证实NO—NSAIDs是安全的。NO—NSAIDs的高效性和安全性决定了其可能成为具有潜力的结肠癌化学预防剂。 相似文献
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目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子-6(tumor necrosis factor receptor—associated factor-6,TRAF-6)在炎症性肠病患者外周血单个核细胞和血浆的表达,及其与内镜下疾病活动性的相关性。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析炎症性肠病患者和正常对照者血浆中TRAF-6蛋白的表达,SYBR—green real time PCR方法分析炎症性肠病患者和正常对照者外周血单个核细胞中TRAF-6 mRNA的表达。数据处理使用Graph Pad Prism 5。结果克罗恩病患者(P=0.000)和溃疡性结肠炎患者(P=0.000)血浆TRAF-6水平显著高于正常对照者,但是克罗恩病患者(r=-0.114,P=0.377)以及溃疡性结肠炎患者(r=0.044,P=0.727)血浆TRAF-6表达水平和内镜下疾病活动指数均无显著的相关性。克罗恩病患者(P=0.000)和溃疡性结肠炎(P=0.000)患者外周血单个核细胞TRAF-6 mRNA表达均显著高于正常对照者外周血单个核细胞中mRNA的表达。结论炎症性肠病患者血浆和外周血单个核细胞中均存在TRAF-6的激活,但血浆TRAF-6的高表达不能反映内镜下的疾病活动程度。 相似文献
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目的比较炎症性肠病患者肠黏膜炎症组织、非炎症组织及正常对照者肠黏膜CD27激活表达的差异,探讨CD27激活表达在炎症性肠病发病中的意义。方法共纳入32例克罗恩病患者、41例溃疡性结肠炎患者及40例正常对照者。分别应用West-ern blot试验和SYBR-green real time PCR方法分析炎症性肠病患者肠黏膜炎症组织、非炎症组织及正常对照者肠黏膜CD27蛋白及其mRNA的表达。数据处理使用GraphPad Prism 5软件。结果克罗恩病和溃疡性结肠炎患者肠黏膜炎症组织CD27蛋白及其mRNA表达均显著高于非炎症组织及正常对照组织(P均0.01);克罗恩病患者肠黏膜非炎症组织CD27蛋白及其mRNA表达显著高于正常对照组织(P=0.000);溃疡性结肠炎患者肠黏膜非炎症组织CD27蛋白表达显著高于正常对照组织(P=0.000)。结论炎症性肠病患者肠黏膜组织中存在CD27的激活表达,这种激活效应不仅出现在内镜表现为炎症性肠病的炎症组织中,甚至出现在炎症性肠病患者内镜表现为正常的肠黏膜中,CD27的激活表达是炎症性肠病发病的早期事件。 相似文献
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目的 分析血浆肿瘤坏死因子受体相关因子-4(tumor necrosis factor receptor-associated factor-4,TRAF4)水平对于炎症性肠病的诊断价值以及与内镜下疾病活动性的相关性.方法 应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析炎症性肠病患者和正常对照者血浆中TRAF4蛋白的表达,受试者工作特征曲线(receiver-operating characteristic,ROC)分析血浆TRAF4水平对于克罗恩病和溃疡性结肠炎的诊断价值,应用Pearson相关分析研究血浆TRAF4水平与内镜下疾病活动性的相关性.数据处理使用GraphPad Prism 5.结果 克罗恩病患者和溃疡性结肠炎患者血浆TRAF4水平均显著高于正常对照者(P<0.05);克罗恩病患者和溃疡性结肠炎患者血浆TRAF4表达水平和内镜下疾病活动指数均无显著的相关性(P>0.05).结论 炎症性肠病患者血浆TRAF4水平增高,对区分炎症性肠病患者和正常对照者具有诊断价值,但血浆中TRAF4的水平不能反映内镜下疾病活动程度. 相似文献