SDF 1α对大鼠骨髓源性内皮祖细胞克隆形成能力及增殖的影响

目的观察基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）对体外培养的大鼠骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）动员和增殖的影响。方法微孔法获取大鼠骨髓EPCs并采用荧光显微镜和流式细胞术鉴定EPCs特异性标记物。不同浓度SDF-1α处理EPCs后,采用细胞培养、MTT检测EPCs的克隆形成、细胞增殖。结果通过MTT法检测,对照组与（1、10、100μg/L）SDF-1α处理组的OD值分别为0.311±0.054、0.587±0.072、0.813±0.056、1.029±0.078,通过统计学方法分析,对照组与SDF-1α处理组比较差异均有统计学意义（n=5,P〈0.05）;100μg/LSDF-1α处理组次级内皮祖细胞集落单位数目是对照组近3倍（4.67±1.577比14.33±3.055,n=5,P〈0.01）。结论SDF-1α剂量依赖性地促进EPCs增殖,并显著增强EPCs克隆形成能力。     

口服小剂量大麻延缓小鼠动脉粥样硬化进展

动脉粥样硬化是一种慢性炎症疾病,它是导致西方国家中风和心脏病的主要原因。大麻衍生物,例如四氢大麻酚能调节免疫功能,因此它有可能成为治疗炎症疾病的药物。我们在动脉粥样硬化老鼠模型中研究了血氢大麻酚的药效。口服血氢大麻酚[1 mg/(kg·d)]能明显的抑制动脉粥样硬化进程。其有效剂量比血氢大麻酚精神调节有效剂量低。而且,我们检测了大鼠和人类动脉粥样硬化斑块中CB2受体(表达在免疫细胞上大麻的主要受体)。从用血氢大麻酚处理过的大鼠分离得到淋巴细胞增殖能力减弱、干扰素γ释放减少。血氢大麻酚体外抑制巨噬细胞趋化性———动脉…     

心肌组织特异性高表达核仁素转基因小鼠的构建与鉴定

 目的：构建并鉴定心肌组织特异性高表达核仁素(Ncl)的转基因小鼠,为从整体水平上研究核仁素对心肌功能的影响及其发挥心肌保护作用的机制提供动物模型。方法：采用基因重组法将小鼠核仁素基因的全长cDNA插入含心肌细胞特异性启动子的Alpha-MyHC clone 26载体,构建Alpha-MyHC clone 26-Ncl重组载体,通过双酶切及基因测序鉴定其正确性;采用PCR鉴定阳性小鼠并用Western blotting法观察转基因小鼠中核仁素的表达情况,采用组织切片及HE染色法观察转基因小鼠心肌组织形态;测量心脏重量指数和左室压最大上升速率,观察核仁素在心肌组织高表达后对小鼠心脏形态功能是否有影响。结果：PCR法观察显示获得4只阳性小鼠(51、52、56和86,其中52和86系繁殖良好）,Western blotting结果表明转基因小鼠的核仁素表达量明显高于野生鼠,HE染色等结果表明核仁素对心肌形态学、心脏/体重比值及心功能无明显影响。结论：成功制备了心肌组织特异性高表达核仁素的转基因小鼠,与野生型小鼠相比,转基因小鼠心肌形态及心功能无明显差异。     

基质细胞衍生因子1α对大鼠骨髓源内皮祖细胞迁移的影响

目的观察基质细胞衍生因子1α对体外培养的大鼠骨髓源内皮祖细胞迁移的影响。方法微孔法从大鼠骨髓提取内皮祖细胞。免疫荧光鉴定血管内皮生长因子受体2和CD133,不同浓度基质细胞衍生因子1α处理内皮祖细胞后,采用Transwell迁移系统检测内皮祖细胞迁移能力。结果分离出的大鼠骨髓内皮祖细胞免疫荧光下血管内皮生长因子受体2 和CD133 双阳性,基质细胞衍生因子1α呈浓度依赖性促进内皮祖细胞迁移,对照组与基质细胞衍生因子1α各处理组比较差异均具显著性(P<0.05或P<0.01)。结论基质细胞衍生因子1α呈浓度依赖性促大鼠骨髓源内皮祖细胞迁移。     

核仁素在糖尿病性心肌病中的表达

目的：探讨核仁素在糖尿病性心肌病中的表达情况。方法：实验分为对照组和II型糖尿病性心肌病模型组 (模型组);模型组采用高脂高糖饲料持续喂养(第5,6周于小鼠腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素)构建,第8周末测定小鼠 血糖,第20周末测定两组小鼠空腹血糖值并计算心脏质量与体质量的比值,观察心肌形态学病理改变,采用免疫组织 化学法和Western印迹检测心肌核仁素的表达水平。结果：糖尿病模型组小鼠较对照组空腹血糖值明显升高(P<0.05); 模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱,出现断裂及溶解;免疫组织化学染色及Western印迹显示模型组小鼠心肌核仁 素蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论：核仁素可能在糖尿病性心肌病的发生和发展中起着一定的作用。     

基质细胞衍生因子1α—CXCR4趋化THP-1细胞迁移及氧化型低密度脂蛋白的影响

目的探讨基质细胞衍生因子1α对单核细胞趋化作用、氧化型低密度脂蛋白对基质细胞衍生因子1α趋化单核细胞的影响及其对THP-1细胞表达CXCR4的影响。方法用Transwell迁移实验检测基质细胞衍生因子1α对单核细胞的趋化作用，逆转录聚合酶链反应检测CXCR4 mRNA的表达，Westem blot检测CXCR4蛋白的表达，并观察氧化型低密度脂蛋白对THP-1细胞CXCR4表达的剂量和时间效应。结果基质细胞衍生因子1α呈浓度依赖性诱导单核细胞迁移，加入CXCR4抗体可明显抑制这种作用。经不同浓度氧化型低密度脂蛋白处理48h后的THP-1细胞再用10μg/L基质细胞衍生因子1α进行趋化时，氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性地增加单核细胞的迁移，50mg／L氧化型低密度脂蛋白组迁移的细胞数是对照组的11倍。THP-1细胞有基础水平的CXCR4表达，50mg／L氧化型低密度脂蛋白可使CXCR4的表达上调4．5倍。CXCR4上调最早在6h内发生，12h达峰值。结论基质细胞衍生因子1α--CXCR4参与趋化单核细胞迁移，其作用被氧化型低密度脂蛋白加强；氧化型低密度脂蛋白上调CXCR4表达。     

重组基质细胞衍生因子1α对单核细胞的趋化作用

目的探讨pcDNA3.1-基质细胞衍生因子1α重组质粒对单核细胞的趋化作用。方法将pcDNA3.1-基质细胞衍生因子1α质粒用脂质体的方法导入人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞中,G418筛选细胞克隆。通过逆转录聚合酶链反应法在转录水平检测基质细胞衍生因子1α在转基因ECV304细胞中的表达。通过Transwell实验研究基质细胞衍生因子1α对单核细胞的趋化作用。结果获得了稳定表达基质细胞衍生因子1α基因的ECV304细胞克隆,pcDNA3.1-基质细胞衍生因子1α重组质粒对单核细胞具有趋化作用。结论重组大鼠基质细胞衍生因子1α对单核细胞具有明显的趋化作用。     

MicroRNA-126-5p在阿霉素所致损伤心肌中的表达及作用

目的:探讨微小RNA-126-5p(microRNA-126-5p)在阿霉素诱导的小鼠损伤心肌中的表达及在心肌细胞损伤中的作用。方法:采用BALB/c小鼠腹腔注射阿霉素的方法制备小鼠急、慢性阿霉素心肌损伤模型,苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠心肌形态学改变,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定小鼠血清中的LDH活性,应用PowerLab数据采集分析系统检测小鼠心肌损伤情况。采用real-time PCR法检测阿霉素刺激大鼠心肌细胞株H9c2后micro RNA-126-5p的表达情况;转染microRNA-126-5p模拟物或抑制物,检测microRNA-126-5p模拟物及抑制物对阿霉素刺激后H9c2细胞microRNA-12-5p表达水平、LDH释放及caspase-3活化情况的影响。结果:在小鼠急、慢性阿霉素心肌损伤模型中,HE染色发现小鼠心肌纤维排列紊乱,肌原纤维溶解,局部有炎症细胞浸润;血清LDH释放增多(P0.05);左心室等容舒张期压力下降最大速率(-dp/dtmax)及左心室等容收缩期压力上升最大速率(+dp/dtmax)下降;real-time PCR检测发现小鼠心肌中microRNA-126-5p的表达显著上调。阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤中也伴有microRNA-126-5p表达明显上调;进一步采用micro RNA-126-5p模拟物与抑制物转染H9c2细胞,发现与单纯阿霉素处理组相比,microRNA-126-5p模拟物组LDH的释放增加,caspase-3活性升高,而microRNA-126-5p抑制物组结果则与之相反。结论:阿霉素可诱导小鼠心肌细胞microRNA-126-5p的表达明显升高,进而降低心肌细胞活性,促进心肌细胞凋亡,发挥促心肌损伤作用。     

基质细胞衍生因子1α促进大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管样结构形成

目的观察基质细胞衍生因子1α对体外培养的大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管样结构形成的影响。方法微孔法获取大鼠骨髓内皮祖细胞,采用免疫荧光鉴定内皮祖细胞特异性标记物VEGFR-2/CD133。1、10和100μg/L基质细胞衍生因子1α以及100μg/L基质细胞衍生因子1α+CXCR4拮抗剂AMD3100共处理内皮祖细胞,采用细胞培养、MTT等方法检测内皮祖细胞血管样结构形成和细胞增殖能力。结果体外培养的大鼠骨髓源性内皮祖细胞出现典型铺路石形状及血管样结构,与此同时内皮祖细胞分化成熟,表达内皮细胞特异性标记物vWF。MTT法检测发现,10和100μg/L基质细胞衍生因子1α处理组的OD值(分别为0.813±0.056和1.029±0.078)与对照组(0.591±0.054)比明显升高(P<0.01),而100μg/L基质细胞衍生因子1α+AMD3100组OD值(0.607±0.077)与对照组比差异无显著性,与100μg/L基质细胞衍生因子1α组比较明显降低(P<0.01)。100μg/L基质细胞衍生因子1α处理组血管样结构长度是对照组的近6倍(10.890±0.360比1.930±0.279,P<0.01),10...     

SDF-1α基因真核表达载体的构建与鉴定

目的：构建SDF-1α真核表达载体，为研究SDF-1α基因功能提供工具。方法：从大鼠平滑肌细胞中提取总RNA，采用RT-PCR技术扩增SDF-1α的基因编码区序列，将序列定向克隆至真核表达载体pcDNA3．1上，并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定。结果：PCR和限制性内切酶分析鉴定，表明获得重组质粒pcDNA3．1／SDF-1α。通过对SDF-1α基因编码区cDNA序列测序证实其与GenBank中的已知序列一致。结论：成功构建了SDF-1α真核表达载体，为SDF-1α基因功能研究奠定基础。