鸡柔嫩艾美耳球虫疫苗候选基因在大肠杆菌中的表达

目的构建柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原原核表达载体，并且在大肠杆菌中表达。方法将本室构建的pMD-Mz5-7克隆质粒酶切回收目的片段定向亚克隆到pET-28b( )载体上，构建成原核表达载体pET-28b-Mz5-7，酶切鉴定正确后，在Escherichia coli BL21(DE3)中用IPTG诱导表达，并经SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果成功构建了目的抗原基因的原核重组表达质粒pET-28b-Mz5-7，IPTG诱导表达该融合蛋白，SDS-PAGE电泳表明，其能表达一分子质量约为37ku的融合蛋白，与预测分子质量相符，最佳反应条件为1mol／LIPTG诱导4h后表达量最高。薄层扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的18％，Western blotting结果显示，表达产物可被抗柔嫩艾美尔球虫的多克隆抗体识别，说明该融合蛋白具有很好的反应原性。结论在原核细胞融合表达Mz5-7成功，为鸡球虫病重组苗的研究奠定了基础。     

鸡柔嫩艾美耳球虫疫苗候选基因在大肠杆菌中的表达

目的　构建柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原原核表达载体 ,并且在大肠杆菌中表达。　方法　将本室构建的pMD Mz5 7克隆质粒酶切回收目的片段定向亚克隆到pET 2 8b( )载体上 ,构建成原核表达载体pET 2 8b Mz5 7,酶切鉴定正确后 ,在EscherichiacoliBL2 1(DE3 )中用IPTG诱导表达 ,并经SDS PAGE及Westernblotting鉴定。　结果　成功构建了目的抗原基因的原核重组表达质粒pET 2 8b Mz5 7,IPTG诱导表达该融合蛋白 ,SDS PAGE电泳表明 ,其能表达一分子质量约为 3 7ku的融合蛋白 ,与预测分子质量相符 ,最佳反应条件为 1mol LIPTG诱导 4h后表达量最高。薄层扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的 18% ,Westernblotting结果显示 ,表达产物可被抗柔嫩艾美尔球虫的多克隆抗体识别 ,说明该融合蛋白具有很好的反应原性。　结论　在原核细胞融合表达Mz5 7成功 ,为鸡球虫病重组苗的研究奠定了基础。     

犬贾第虫核糖体16sRNA部分序列克隆及测定

目的：获取犬贾第虫核糖体16sRNA基因序列。方法：从犬贾第虫包囊中，快速提取DNA，并以DNA为模板，利用热启动PCR技术扩增出一611bp的预计大小的基因片段，纯化回收后，与PMD18－T载体连接转化到DH5a大肠杆菌中，筛选到阳性克隆经PCR、EcoR I和HindⅢ双酶切鉴定，并用双脱氧链末端终止法测定DNA序列，登陆BLAST进行同源性比较和分析。结果：获得了长度为611bp的基因序列，并发现与犬贾第虫核糖体的同源性最高达99％。结论：获得了犬贾第虫核糖体16sRNA的部分基因序列，为研究其在核酸进化领域中的地位和PCR法快速诊断贾第虫病提供了理想的基因材料。     

一体化开放式教学模式在免疫学教学中的应用

<正>免疫学是一门研究免疫系统的组织结构和生理功能的科学,它从不同的角度和水平揭示免疫系统识别并消除有害生物及其成分的应答过程和规律,并应用这些规律来阐明疾病发生发展的机制,从而达到防治疾病的目的。免疫学是生命科学领域发展迅速的前沿学科,其与基础医学及临床医学各个学科的关系极为密切,学生对免疫学课程的学习,将为其他医学课程的学习以及从事与疾病诊断和防治有关的工作奠定坚实的基础~[1]。这门课程概念较多、     

柔嫩艾美球虫重组质粒pVAX1-Mzp57的免疫保护性试验

目的　用柔嫩艾美球虫 (Eimeriatenella ,E .t)子孢子表面蛋白基因构建的DNA重组质粒免疫海兰小公雏 ,观察其诱导鸡产生的免疫应答反应和对球虫攻击的保护作用。　方法　重组质粒经肌肉和鼻黏膜分别于 7、14、2 8日龄3次接种小公雏 ,用间接ELISA、流式细胞仪检测免疫反应。最后一次免疫后 2周经口接种新鲜的E .t孢子化卵囊 ,确定其保护力的大小。　结果　构建的柔嫩艾美球虫重组质粒免疫雏鸡后能诱导有效的细胞免疫和体液免疫 ,表现为CD4+ /CD8+ T细胞比率、特异性抗体滴度明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。可对抗中等剂量球虫的攻击 ,试验组和对照组相比 ,攻虫后卵囊排出量显著减少 ,体重增长快 ,盲肠病变较小 ,保护率达 80 %以上。肌注 10 0 μg重组质粒组综合免疫保护效果最好。　结论　构建的重组质粒对鸡柔嫩艾美球虫的攻击有较好的免疫保护作用。     

柔嫩艾美耳球虫GZ株λMzp5-7重组抗原的免疫保护性实验

目的用柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)孢子表面蛋白基因在大肠杆菌中的表达产物免疫雏鸡,观察其诱导产生的免疫应答反应和对球虫攻击的保护性作用。方法重组抗原经肌肉注射菌体蛋白和口服工程活菌分别于7、14、28日龄3次免疫海兰小公雏,同时设菌体蛋白+小剂量活卵囊组、未免疫攻毒组、未免疫未攻毒组作对照,采用间接ELISA法、流式细胞仪技术检测鸡体产生的免疫应答反应。于末次免疫后2w(42日龄)用5×104个E.tenella卵囊进行攻毒,观察其诱导产生的保护力。结果口服工程活菌组无论从卵囊记数、盲肠病变记分、相对增重、抗体产生水平以及细胞免疫水平上均优于其它免疫组。结论λMzp5-7基因在大肠杆菌中的表达产物对鸡柔嫩艾美耳球虫的攻击有一定的免疫保护作用。