蓝莓联合益生菌减少CXCL10/CXCR3表达对非酒精性脂肪肝的影响

目的 通过蓝莓联合益生菌减少CXCL10/CXCR3的表达对非酒精性脂肪肝(NAFLD)的影响及作用机制.方法 清洁级SD大鼠30只分为正常组(normal group,N组)、模型组(model group,M组)、蓝莓组(blueberry group,B组)、益生菌组(probiotics group,P组)和蓝莓益生菌组(blueberry+ probiotics group,BP组).除N组(100％普通饮食)外,其余大鼠均采用复合高脂饲料(88.2％普通饲料+10％猪油+1.5％胆固醇+0.2％胆酸钠)制备NAFLD模型共12周.确认造模成功后再将剩余M组大鼠随机分为B组(蓝莓原浆1.5 mL/(100 g·d)灌胃)、P组(益生菌溶液1.5 mL/d灌胃)及BP组(蓝莓益生菌原液1.5 mL/100 g体重灌胃),并给普通饮食,共观察8周.结果 BP组与M组、B组、P组比较:肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、总胆固醇、三酰甘油均差异有统计学意义(P＜0.01).免疫组化:BP组的CXCL10/CXCR3表达较M组、B组、P组减少(P＜0.01).RT-PCR:BP组的CXCL10/CXCR3表达与M组、B组、P组比较显著降低(P＜0.01).Western blot:BP组的CXCL10/CXCR3表达较M组、B组、P组显著降低(P＜0.01).结论 蓝莓联合益生菌对比单独使用蓝莓或益生菌能有效改善NAFLD的病理组织结构,减轻肝细胞脂肪变性,其机制可能是蓝莓与益生菌联合可减轻CXCL-10诱发的炎症反应,下调三酰甘油相关基因的表达,减少脂质沉积,是改善NAFLD的一个辅助治疗方案.     

p-JAK1/p-STAT3通路在蓝莓益生菌血清干预肝细胞脂肪变性中的作用

【摘要】 目的 建立体外肝细胞脂肪变性模型,探讨白介素-22（IL-22）调控的磷酸化酪氨酸蛋白激酶-1（p-JAK1）/磷酸化信号转导激活转录因子-3（p-STAT3）信号通路在蓝莓益生菌血清改善肝细胞脂肪变性实验中的作用机制。方法 制备蓝莓益生菌原液,并制备大鼠10%蓝莓益生菌低、中、高剂量血清及生理盐水血清。建立游离脂肪酸（FFA）诱导的正常肝细胞株L-02细胞脂肪变性模型,设立正常组,模型组,蓝莓益生菌低、中、高剂量血清组。定量检测细胞内三酰甘油（TG）含量;油红O染色检测细胞内的脂质沉积; RT-PCR和实时荧光定量PCR（qRT-PCR)检测各组IL-22、p-JAK1、p-STAT3、 胆固醇调节元件蛋白-1c（SREBP-1c ）的基因表达;免疫荧光及Western blot检测各组IL-22、p-JAK1、p-STAT3、SREBP-1c的蛋白表达。结果 FFA诱导刺激24 h后,模型组细胞TG含量高于正常组（P IL-22、p-JAK1、p-STAT3 基因表达及蛋白表达均较正常组减弱（P 均SREBP-1c 基因及蛋白表达较正常组升高（P 均P 均IL-22、p-JAK1、p-STAT3 的基因表达和蛋白表达较模型组、低剂量血清组、中剂量血清组增强（P 均P <0.01）。结论 蓝莓益生菌通过对p-JAK1/p-STAT3信号通路的调节,参与拮抗肝细胞脂肪变性的作用。     

食用苹果辅助逆转大鼠肝纤维化研究中TIMP-1、COL-Ⅰ的表达

目的研究苹果对实验性肝纤维化大鼠的辅助治疗作用及疗效机理。方法雄性SD大鼠42只分为正常组、CCL4肝纤维化模型组、自然恢复组、丹芍化纤治疗组、丹芍化纤＋苹果试验组。除正常组以外,其余大鼠采用CCL4[皮下注射40％CCL4＋花生油溶液混合液0．3mL／100g首次用纯CCL4 0．5mL／100g,2次／周]、饮酒（隔日以30％乙醇为饮料）、高脂低蛋白饮食（79．5％玉米粉,20％猪油,0．5％胆固醇）等复合因素刺激制备肝纤维化动物模型共8周。8周末随机处死模型组大鼠8只,确认造模成功后将剩余模型组大鼠随机分为丹芍化纤[给予丹芍化纤粉末加蒸馏水混合溶液：药物浓度为0．1g／100g大鼠体质量配比,以0．2mL／（10g·d）灌胃1次]＋苹果试验组（新鲜苹果切碎组织匀浆机匀浆后过滤取汁为4mL／100g大鼠体质量灌胃,同时苹果渣做饲料喂养大鼠）,丹芍化纤治疗组及自然恢复组（给予生理盐水等量灌胃）,共观察8周。实验结束后光镜下观察肝组织纤维化程度,免疫组化SP法检测肝脏中COL—I,TIMP-1的表达。结果免疫组化中丹芍化纤＋苹果试验组肝组织中I型胶原（collagen—I,COL-I）,基质金属蛋白酶组织抑制因子1（Tissueinhibitor of metalloproteinase-1,TIMP_1）的表达与模型组、自然恢复组、丹芍化纤组比较显著降低（P〈0．01,Pd0．05）。结论苹果在实验性肝纤维化大鼠的治疗中起到了有效的作用,其抑制脂质过氧化作用在丹芍化纤的治疗基础上进一步抑制了TIMP—I、COL-I的表达;从而促进细胞外基质的降解,起到保护肝脏的作用,这可能是苹果辅助逆转肝纤维化的机制之一。     

双环醇治疗药物性肝病的临床研究

目的观察双环醇治疗药物性肝病的疗效。方法对2008年1月～2009年12月贵阳医学院附属医院收治的39例药物性肝病患者,分别使用双环醇片和注射用还原型谷胱甘肽进行治疗。观察两种药物治疗前后ALT、AST、γ-GGT和TBiL的变化情况。结果两组患者治疗前后组间比较,ALT、AST、γ－GGT和TBiL4项生化指标都有所下降,差异有统计学意义（P〈0．01）。与对照组相比,治疗组治疗后ALT和γ－GGT下降较为明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论使用双环醇治疗药物性肝病,能加快病情的恢复,疗效较肯定。     

IL-22在蓝莓益生菌血清干预肝细胞脂肪变性实验中的表达

目的探讨蓝莓益生菌血清通过对IL-22表达的影响改善非酒精性脂肪肝的作用机制。方法血清药理学方法制备大鼠10%蓝莓益生菌低、中、高剂量血清。建立游离脂肪酸(FFA)诱导的正常肝细胞株L-02细胞脂肪变性模型,设立正常组、模型组、蓝莓益生菌低、中、高剂量血清组。油红O染色检测细胞内的脂质沉积;定量检测细胞内三酰甘油(TG)含量;RT-PCR检测各组IL-22基因表达;Western blot及免疫荧光法检测各组IL-22蛋白表达。结果 FFA诱导刺激24 h后,模型组细胞内可见大量脂质沉积,且TG含量明显高于正常组(P=0.000),IL-22的基因及蛋白表达均较正常组明显减弱(P=0.000);与模型组相比,蓝莓益生菌低、中、高剂量血清组的TG逐渐降低(P=0.000),细胞内的脂肪沉积逐渐减轻;高剂量血清组IL-22的基因和蛋白表达较模型组、低剂量血清组、中剂量血清组显著增强(P=0.000),但蓝莓益生菌低、中剂量血清组之间IL-22的基因表达和蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论蓝莓益生菌血清能上调IL-22的表达,参与改善非酒精性脂肪肝的作用机制。     

蓝莓益生菌通过影响IL-22/JAK1/STAT3信号通路改善非酒精性脂肪肝的研究

目的 研究蓝莓益生菌通过对白细胞介素-22 (IL-22)调控的酪氨酸蛋白激酶-1(JAK1)/信号转导激活转录因子3(STAT3)信号通路的影响,进一步探明其改善非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用机制.方法 清洁级SD大鼠40只分为正常对照组(NG)、观察组(MG)、蓝莓组(BG)、益生菌组(PG)和蓝莓+益生菌组(BPG).除NG(100％普通饮食)外,其余大鼠均采用复合高脂饲料制备脂肪肝模型共12周.确认造模成功后再将剩余MG大鼠分为BG、PG及BPG,共观察8周.结果 BPG与MG、BG及PG比较:肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)显著下降(P＜0.01),高密度脂蛋白(HDL)显著升高(P＜0.01);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-22:BPG的蛋白水平较MG、BG、PG增高(P＜0.01);定量反转录酶-聚合酶链锁反应(qRT-PCR):BPG的JAK1、STAT3的表达较MG、BG、PG显著升高(P＜0.01),胆固醇调节元件蛋白-1c(SREBP-1c)表达显著降低(P＜0.01);Western blot:BPG的IL-22、JAK1、STAT3的表达较MG、BG、PG显著升高(P＜0.01),SREBP-1c表达明显减少(P＜0.01).结论 蓝莓益生菌能有效改善NAFLD的病理组织结构,减轻肝细胞脂肪变性,其机制可能是蓝莓益生菌可增加肝脏IL-22的表达,激活下游的JAK1/STAT 3信号通路,下调SREBP-1c的基因表达,抑制SREBP-1c的作用,增强胆固醇代谢,减少脂质沉积,是NAFLD的一个辅助治疗方案.     

从黄芩茎叶粗提物中制备野黄芩苷的研究

目的以黄芩茎叶粗提物为原料,制备野黄芩苷。方法运用单因素试验考察碱提pH、酸沉pH、固液比等提取条件对黄芩茎叶总黄酮含有量和浸膏得率的影响。结果碱提pH为7.5,酸沉pH为0.5,固液比为1∶12,所得沉淀中总黄酮质量分数为80%以上。同时,以甲醇为溶剂进行重结晶从总黄酮中分离得到野黄芩苷,经高效液相色谱检测,野黄芩苷质量分数为93.7%。结论本实验采用的方法操作简单,得到的野黄芩苷纯度较高,适合于工业化生产。     

丹芍化纤胶囊通过上调ALK2、p-Smad1/5/8改善四氯化碳所致大鼠肝纤维化

目的 观察丹芍化纤胶囊(DSHX)对四氯化碳(CCl4)所致肝纤维化大鼠肝脏骨形态发生蛋白Ⅰ型受体(BMPR-Ⅰ)中的激活素受体样激酶2(ALK2)、磷酸化Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)与DNA结合(分化)抑制因子2(Id2)表达的影响,探讨该药治疗肝纤维化的可能机制.方法 雄性Wistar大鼠50只分为对照组(A组)、肝纤维化模型组(B组)、自然恢复组(C组)、DSHX低剂量治疗组(D组)、DSHX高剂量治疗组(E),每组10只.除A组外,其余各组用CC14复合因素复制大鼠肝纤维化模型,共8周.D、E组分别用0.5、1.0 g/kg DSHX灌胃8周,1次/日.实验结束后分别采用酶联免疫吸附试验测定大鼠肝匀浆透明质酸(HA)、羟脯氨酸(Hyp)水平,Masson染色法观察肝组织内胶原纤维沉积程度,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝组织ALK2、Id2 mRNA水平,蛋白质印迹法(Western blotting)分析肝组织ALK2、Id2及p-Smad1/5/8蛋白的表达.结果 B组肝匀浆HA、Hyp水平高于A组(P＜0.01),肝组织ALK2、Id2 mRNA和蛋白的表达及p-Smad1/5/8蛋白表达均低于A组(P＜0.01);D、E组大鼠肝纤维化程度较B组和C组明显改善,肝匀浆HA、Hyp水平均低于B组和C组(P＜0.01),肝组织ALK2 mR-NA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白表达均高于B组和C组(P＜0.01),肝组织Id2 mRNA的表达高于B组和C组(P＜0.01),但Id2蛋白表达与B组、C组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 DSHX对大鼠肝纤维化的治疗作用机制可能与上调ALK2、p-Smad1/5/8的表达有关.     

蓝莓联合益生菌通过IL-22调控的JAK1/STAT3/BAX通路改善非酒精性脂肪性肝病的作用机制

目的研究蓝莓联合益生菌通过对IL-22调控的JAK1/STAT3/BAX信号通路的影响,进一步探明其改善非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用机制。方法清洁级SD大鼠40只分为正常对照组(CG)、IL-22siRNA阴性对照组(IL-22SI-NC)、IL-22siRNA组(IL-22SI)、IL-22siRNA阴性对照+蓝莓益生菌组(IL-22SI-NC+BPG)、IL-22siRNA+蓝莓益生菌组(IL-22SI+BPG)。正常对照组予100%普通饮食,其余大鼠均采用复合高脂饲料制备脂肪肝模型,同时予IL-22siRNA阴性对照慢病毒及IL-22siRNA慢病毒腹部肝区注射(盲穿),隔日1次,共12周,取肝脏确认造模及siRNA封闭效果后予蓝莓益生菌原液灌胃,同时按上述分组后给予正常饮食,予蓝莓益生菌原液灌胃,共观察8周。多组间比较采用单因素方差分析,进一步比较方差齐时采用SNK法(q检验),方差不齐时用Tamhane法(q'检验)。结果 IL-22SI组与IL-22SI-NC组比较,ALT、AST、TC、TG、LDL均显著升高(P值均0.01),HDL显著降低(P0.01),IL-22、JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达均明显减弱(P值均0.01)、BAX的表达明显升高(P0.01);与IL-22SI-NC相比,IL-22SI-NC+BPG的ALT、AST、TC、TG、LDL均明显降低(P值均0.01),HDL明显升高(P0.01),IL-22、JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达均显著升高(P值均0.01),BAX的表达显著下降(P0.01);IL-22SI+BPG较IL-22SI组ALT、AST、TC、TG、LDL均略有降低(P值均0.05),HDL略有升高(P0.05),IL-22、JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达均有所增加(P值均0.05),BAX的表达略有减少(P0.05)。结论蓝莓联合益生菌能一定程度拮抗IL-22siRNA所加剧的肝细胞脂肪变性,并可以增强IL-22的表达,提示IL-22可能为蓝莓联合益生菌影响NAFLD的关键作用因子。推测蓝莓联合益生菌能增强IL-22表达,激活JAK1/STAT3信号通路,抑制其下游凋亡因子BAX的表达,减少肝细胞凋亡,增强胆固醇代谢,减少脂质沉积,达到改善NAFLD的目的,是NAFLD的一个辅助治疗方案。