原发性肝癌患者外周血中AFPmRNA检测的临床意义

通过定量检测AFPmRNA在原发性肝癌（PHC）患者外周血中的表达,探讨AFPmRNA作为PHC患者早期诊断和微转移指标的可能性。建立荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）,检测58例外周血AFPmRNA的表达量。其中,30例PHC患者中19例AFP≥20ng/m l,23例外周血中AFPmRNA有表达;肝癌患者外周血中AFPmRNA的基因拷贝数与肝癌患者有肝内外转移有明显相关,而肝炎及健康对照组外周血中AFPmRNA均未表达,肝硬化组有一例表达。应用荧光定量PCR检测PHC外周血中AFPmRNA表达情况,可以作为早期反映PHC患者外周血中是否存在肝癌细胞和发生微转移的早期灵敏指标。     

高压液相色谱法检测全反式维甲酸微囊在体内的缓慢释放

目的 将全反式维甲酸与全反式维甲酸微囊在体内的释放过程进行比较.方法 应用高压液相色谱(HPLC)技术,测定了全反式维甲酸(ATRA)的标准曲线.结果 5只家兔在1次口服20mg的裸氏全反式维甲酸后,药物在血浆中达到高峰浓度时间(Tpeak)约为1 h,峰浓度(Cpmax)为0.081 μg/mL,血浆清除半衰期(t...     

大鼠肝脏F蛋白基因的克隆和表达

目的获得大鼠肝脏F蛋白基因克隆(F-protein’s cDNA);利用原核(大肠杆菌)表达系统表达大鼠肝脏F蛋白。方法提取大鼠肝脏总RNA,对其进行反转录和PCR(RT-PCR)扩增出目的基因(F-protein’s cDNA),然后将其与pUCm-T载体进行连接获得克隆质粒pUCm-T-F并转化到大肠杆菌DH5α中;将测序结果正确的克隆片断重新与表达载体pET-15b连接,获得F抗原表达质粒pET15b-F并将其转化到表达菌株BL21(DE3)pLysS中,用1mmol/L IPTG诱导其表达。结果RT-PCR扩增出的目的基因(F-protein’s cDNA),经测序证明与Gene-bank上提供的F蛋白cDNA序列完全一致;表达后的全菌蛋白进行SDS-PAGE电泳检测,目的蛋白分子量大小约为43 kD,与预期值相符,表达量可达全菌总蛋白量的40%。结论表达的目的蛋白经His-tag柱进行亲和层析纯化,SDS-PAGE检测得到了不含其他杂蛋白的单一F蛋白条带,与豚鼠抗人F蛋白抗血清反应成阳性,说明我们经基因工程方法得到的纯化的F蛋白有免疫活性。     

全自动血培养仪常规检测时间的探讨

目的评价全自动血培养仪（BacT／Alert，简称EA）检测时间设定4d的临床应用情况。方法用BA全自动血培养仪检测2466份血标本，观察细菌阳性检出率及其检出时间。结果2466份血标本中BA报警阳性346例，分离出333株细菌，阳性率为13．5％，最快检出时间为2h，1d内检出的阳性数占75.1％，2d内检出的阳性数占95．2％，3d内检出的阳性数占99．1％．4d内检出的阳性数占100％。假阳性率为4.0％，假阴性率为0．5％。结论应用BA有较高阳性检出率，常规孵育时间可以设定为4d。     

预测急性心肌梗死患者转归的血清代谢物谱研究

目的采用液-质联用代谢组学研究平台寻找能在急性心肌梗死(AMI)患者入院时即预测患者转归的特异性代谢物。方法运用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)代谢组学研究平台分析48例心绞痛患者、24例AMI好转者、24例AMI死亡者及48名体检健康者(正常对照组)代谢物数据,对代谢轮廓数据的变异性进行分析,构建疾病区分模型。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估特征代谢物的临床诊断效能。结果成功构建了"正常对照组-心绞痛组-AMI好转组-AMI死亡组"的主成分分析(PCA)模型(R2X=40.2%,Q2=13.9%)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型(R2X=79.0%,R2Y=83.2%,Q2=65.0%)。验证结果显示模型的预测准确度达100%。筛选并鉴定出10种可用于AMI预后判断的代谢物离子,其中4-羟基-6-二十二烷酮、N-乙酰-白三烯、溶血磷脂酰胆碱(LPC)[18:2(9Z,12Z)]、LPC(18:0)、LPC(P-16:0)、LPC[P-18:1(9Z)]、LPC[20:1(11Z)]、LPC[20:2(11Z,14Z)]在AMI死亡患者的血清中水平较低,L-苏氨酸、3-甲基-2-丁烯-1-硫醇水平较高,与AMI好转患者比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论采用代谢组学分析方法找到的特征代谢物具有很好的预测AMI患者预后的能力,可作为潜在的疾病转归标志物进一步研究。     

磺基水杨酸-硫酸钠比浊法测定尿蛋白的应用

[目的]建立简便的双试剂磺基水杨酸-硫酸钠(SS-S)比浊法测定尿蛋白,并对该方法进行应用性评价.[方法]在TBA120FR全自动生化分析仪上,确立SS-S比浊法测定尿蛋白的参数,评价该法的重复性、线性范围及干扰能力,并与氯化苄甲乙氧铵法(BEC)进行比较.[结果]批内的变异系数(CV)为1.39%、1.81%、1.10%;批间的变异系数(CV)为1.61%、1.97%、0.99%.线性范围为0.04～2.99 g/L.与氯化苄甲乙氧氨法比较YBEC=1.0733XSS-S+0.042 9,相关系数r=0.993 7.[结论]SS-S法测定尿蛋白简便、试剂稳定,具有较高的准确性和精密度,且适合自动化分析.     

可溶性致癌抑制因子2、心型脂肪酸结合蛋白评估重症急性胰腺炎患者早期心肌损伤及预后的价值

目的探讨可溶性致癌抑制因子2(sST2)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)评估重症急性胰腺炎(SAP)患者早期心肌损伤及预后的价值。方法选取急性胰腺炎患者240例,根据病情分为轻症急性胰腺炎(MAP)组132例和SAP组108例,SAP患者按预后又分为存活组(82例)和死亡组(26例)。分别于入院后2 h、8 h、72 h,检测所有患者心肌肌钙蛋白I(cTnI)、H-FABP、sST2、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平。分析SAP患者cTnI与H-FABP、sST2的相关性。采用受试者工伤特征曲线评价sST2及H-FABP预测SAP患者预后的价值。结果入院后2 h,MAP组和SAP组cTnI和NT-proBNP水平差异无统计学意义(均P>0.05),MAP组H-FABP、sST2水平正常,而SAP组H-FABP、sST2水平升高且高于MAP组(均P<0.05);其余时点SAP组4个指标均高于MAP组(均P<0.05)。入院后2 h,死亡组H-FABP、sST2水平均高于存活组,但两组间cTnI和NT-proBNP水平差异无统计学意义(均P<0.05...     

双纸片增效试验筛查金属β-内酰胺酶

目的：建立简便的双纸片增效试验,筛查产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌.方法：3组不同底物的双纸片增效试验检测金属β-内酰胺酶,比较其结果.结果：75株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌分别应用亚胺培南、头孢他啶、氨曲南和其EDTA复合纸片检出金属β-内酰胺酶阳性株分别为13,11,10株,阳性率分别为17.3%,14.7%和13.3%;联合应用3组底物,检出阳性株18株,阳性率为24.0%.结论：双纸片增效试验可作为金属β-内酰胺酶的初筛试验.